LLLT療法聯(lián)合鹽酸米諾環(huán)素對(duì)重度牙周炎患者的療效及對(duì)Arg1、STAT6表達(dá)的影響*

郅曉雷,惠新宇,張耐新,于曉艷△，華 超

1.華北醫(yī)療健康集團(tuán)峰峰總醫(yī)院北院區(qū)口腔科，河北邯鄲 056200；2.開(kāi)灤總醫(yī)院口腔科，河北唐山 063000；3.河北省邯鄲市口腔醫(yī)院口腔科，河北邯鄲 056000

牙周炎主要是由局部因素引起的牙周支持組織的慢性炎癥[1]。牙周炎初期的癥狀并不明顯，當(dāng)炎癥進(jìn)一步擴(kuò)散，就會(huì)導(dǎo)致牙周膜被破壞，牙槽骨出現(xiàn)吸收的現(xiàn)象，并且牙齦與牙根逐漸分離，齦溝加深并形成牙周袋[2]。若沒(méi)有得到及時(shí)有效的治療，會(huì)導(dǎo)致牙周袋壁出現(xiàn)潰瘍及炎癥性肉芽組織的形成，使牙周組織被破壞，特別是牙槽骨吸收嚴(yán)重時(shí)，還易導(dǎo)致牙齒支持力量不足，從而出現(xiàn)牙齒松動(dòng)、移位甚至是脫落等情況[3]。低能量激光(LLLT)療法可改善組織血液循環(huán)、加速組織修復(fù)、提高痛閾、減少炎性滲出等，具有無(wú)創(chuàng)和不良反應(yīng)少的優(yōu)勢(shì)，但其破壞力較強(qiáng)；鹽酸米諾環(huán)素具有殺菌的功效，主要用于治療衣原體、支原體感染，但單一使用治療效果不理想[4-5]。精氨酸酶1(Arg1)是一種具有抗炎、促進(jìn)組織修復(fù)功能的親水性蛋白，能夠在炎癥后期修復(fù)和重塑由病原微生物造成的組織損傷。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白6(STAT6)是介導(dǎo)輔助性T細(xì)胞分化的關(guān)鍵信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)錄子,也是介導(dǎo)過(guò)敏性炎性反應(yīng)的重要因子,在炎性反應(yīng)中起著重要作用。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，Arg1、STAT6在牙周炎患者血清中存在異常表達(dá)，但臨床有關(guān)LLLT療法聯(lián)合鹽酸米諾環(huán)素治療對(duì)Arg1、STAT6水平影響的報(bào)道較少[6-7]。因此，本研究使用LLLT療法、鹽酸米諾環(huán)素聯(lián)合治療牙周炎患者，分析其對(duì)Arg1、STAT6表達(dá)的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年6月至2021年6月華北醫(yī)療健康集團(tuán)峰峰總醫(yī)院診治的95例重度牙周炎患者，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組及聯(lián)合組。對(duì)照組47例，其中男25例，女22例；年齡22～55歲，平均(36.0±11.2)歲；病程1～2年，平均(1.5±0.4)年。聯(lián)合組48例，其中男24例，女24例；年齡23～54歲，平均(38.5±12.4)歲；病程1～2年，平均(1.5±0.4)年。所有患者基線資料均衡、完整，兩組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究通過(guò)華北醫(yī)療健康集團(tuán)峰峰總醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者、家屬知情同意。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合《重度牙周炎診斷標(biāo)準(zhǔn)及特殊人群牙周病治療原則的中國(guó)專(zhuān)家共識(shí)》[8]中有關(guān)重度牙周炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)；患者近3個(gè)月內(nèi)未接受過(guò)口腔手術(shù)；患重度牙周炎且患牙超過(guò)兩個(gè)，深度超過(guò)4 cm，對(duì)本研究藥物均無(wú)過(guò)敏史。排除標(biāo)準(zhǔn)：患者在入院前已接受過(guò)牙周治療；近1個(gè)月內(nèi)使用抗菌藥物者；處于妊娠期者；意識(shí)模糊不清或患有精神疾病，不能夠積極配合完成治療者。

1.2方法 對(duì)照組使用鹽酸米諾環(huán)素(廠家：惠氏制藥有限公司；國(guó)藥準(zhǔn)字H10960010；規(guī)格：100 mg)，首次劑量0.2 g，12 h或24 h后再次服用0.1 g；聯(lián)合組在對(duì)照組治療后的第1、2、7天使用LLLT療法，波長(zhǎng)為808 nm，輸出功率為80 mW，能量密度為4 J/cm2，光斑面積為0.28 cm2。將激光光纖探頭緩慢插入患牙的牙周袋袋底，覆蓋袋底及袋內(nèi)壁，呈“之”字形進(jìn)行上下提拉照射，照射15 s，同時(shí)用濕潤(rùn)的消毒棉卷進(jìn)行局部隔阻，防止對(duì)鄰近組織造成損傷。聯(lián)合組鹽酸米諾環(huán)素使用劑量與對(duì)照組保持一致。

1.3觀察指標(biāo)

1.3.1牙周指數(shù)評(píng)分[9]包括菌斑指數(shù)(PLI)、牙齦指數(shù)(GI)、出血指數(shù)(BI)、牙松動(dòng)度(TM)評(píng)分。PLI評(píng)分，牙齦邊緣無(wú)菌斑計(jì)0分，見(jiàn)薄層菌斑計(jì)1分，中等量菌斑計(jì)2分，大量軟垢計(jì)3分；BI評(píng)分，牙齦無(wú)炎癥、出血計(jì)0分，牙齦出現(xiàn)炎癥、無(wú)出血計(jì)1分，牙齦出血呈線狀計(jì)3分，出血溢出齦溝計(jì)4分，自動(dòng)出血計(jì)5分；GI評(píng)分，牙齦健康計(jì)0分，輕度炎癥計(jì)1分，炎癥出現(xiàn)水腫計(jì)2分，中度炎癥出現(xiàn)紅腫、有出血計(jì)3分，重度炎癥且腫脹明顯、自動(dòng)出血計(jì)4分；TM評(píng)分，頰舌方向松動(dòng)計(jì)1分，近遠(yuǎn)向有松動(dòng)計(jì)2分，垂直松動(dòng)計(jì)3分。

1.3.2PCR檢測(cè)Arg1、STAT6水平 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定Arg1、STAT6水平。細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功，采用Trizol法提取細(xì)胞中總RNA，應(yīng)用mRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，GAPDH為內(nèi)參。采用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)引物。反應(yīng)條件：94 ℃ 30 s、58 ℃ 45 s復(fù)性，72 ℃ 1 min,72 ℃延伸7 min，35個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt方法計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.3.3疾病相關(guān)因子及炎癥因子測(cè)定 分別抽取治療前、治療后所有患者空腹靜脈血5 mL，以2 000 r/min 離心10 min，離心半徑10 cm，取上層血清(肝素抗凝)，于-60 ℃冰箱保存待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)、骨鈣素(BGP)、可溶性細(xì)胞間黏附分子-1(sICAM-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、超敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)水平，試劑盒由上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司提供。

1.3.4療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[10]顯效：牙齦腫脹出血等癥狀消失，牙周袋深度>2 mm，牙齦指數(shù)下降50%；有效：牙齦腫脹、出血等癥狀顯著緩解，牙周袋深度>1 mm；無(wú)效：牙齦腫脹、出血等臨床癥狀無(wú)改善甚至加重。總有效率=(顯效例數(shù)+有效例數(shù))/總例數(shù)×100%。

1.3.5不良反應(yīng) 記錄并比較兩組患者皮疹、局部腫脹、胃腸道反應(yīng)、牙齦腫痛、惡心等不良反應(yīng)發(fā)生情況，總發(fā)生率=不良反應(yīng)發(fā)生例數(shù)/總例數(shù)×100%。

2 結(jié) 果

2.1兩組牙周指數(shù)評(píng)分比較 治療前，兩組PLI、GI、BI、TM評(píng)分相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組患者PLI、GI、BI、TM評(píng)分降低，且聯(lián)合組評(píng)分低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組牙周指數(shù)評(píng)分比較分)

2.2兩組齦溝液疾病相關(guān)因子比較 治療前，兩組MCP-1、BGP、sICAM-1水平相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，兩組患者M(jìn)CP-1、sICAM-1水平降低，BGP水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；相比對(duì)照組，聯(lián)合組MCP-1、sICAM-1水平較低，BGP水平較高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組齦溝液疾病相關(guān)因子水平變化

2.3兩組血清Arg1、STAT6水平比較 治療前，兩組血清Arg1、STAT6水平相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組患者血清Arg1、STAT6水平降低，且聯(lián)合組Arg1、STAT6水平低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩組血清Arg1、STAT6水平比較

2.4兩組炎癥因子水平比較 治療前，兩組TNF-α、IL-6、hs-CRP水平相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組患者TNF-α、IL-6、hs-CRP降低，且聯(lián)合組TNF-α、IL-6、hs-CRP較低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 兩組炎癥因子水平比較

2.5兩組臨床療效比較 治療后，聯(lián)合組治療總有效率(95.83%)高于對(duì)照組(80.85%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 兩組臨床療效比較[n(%)]

2.6兩組不良反應(yīng)發(fā)生情況比較 治療后，聯(lián)合組不良反應(yīng)總發(fā)生率(14.58%)高于對(duì)照組(12.77%)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表6。

表6 兩組不良反應(yīng)發(fā)生情況比較[n(%)]

3 討 論

牙周病的病因復(fù)雜,一般來(lái)說(shuō)是由于大量的牙菌斑和牙結(jié)石長(zhǎng)時(shí)間刺激牙齦引起的[9]。牙周病局部刺激因素包括牙菌斑、牙結(jié)石、創(chuàng)傷性咬合、食物嵌塞、不良修復(fù)體、用口呼吸等，促進(jìn)了牙周組織的炎癥過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)，牙齦萎縮是由成年期某種腦激素分泌水平的逐漸降低引起的，導(dǎo)致消化系統(tǒng)無(wú)法吸收牙齦最需要的維生素[10]。

牙周炎的治療應(yīng)以消炎抑菌為主，鹽酸米諾環(huán)素是一種具有快速、高效抑菌作用的藥物，常用于牙周炎的治療。但鹽酸米諾環(huán)素存在耐藥性，且對(duì)肝功能和腎功能有一定的損害[11]。LLLT是一種能夠有效加速牙周組織愈合的激光療法，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，該法目前在臨床應(yīng)用廣泛[12]。LLLT用于牙周炎的治療，可有效消除局部刺激因素，緩解炎癥。本研究將兩種方法聯(lián)合，通過(guò)內(nèi)服和外治的方法相結(jié)合，可極大發(fā)揮兩種治療方法的優(yōu)勢(shì)。研究發(fā)現(xiàn)，多種因子在牙周炎的進(jìn)展中起重要作用，其中BGP作為一種合成的維生素K依賴性鈣結(jié)合蛋白，參與調(diào)節(jié)骨代謝，進(jìn)而影響牙槽骨的改建過(guò)程，減輕牙槽骨的吸收破壞，延緩骨轉(zhuǎn)換進(jìn)程；sICAM-1參與多種免疫反應(yīng)，加重機(jī)體炎性反應(yīng)；MCP-1可激活單核細(xì)胞并促進(jìn)單核細(xì)胞趨化，進(jìn)而加重牙周炎患者牙齦炎性反應(yīng)[13]。TNF-α、hs-CRP、IL-8為主要的促炎因子，可加重患者病情，對(duì)疾病的診斷、評(píng)估有一定參考價(jià)值，牙周炎患者血清中炎性指標(biāo)水平顯著升高[14-15]。鹽酸米諾環(huán)素是一種廣譜抗菌藥物，屬于一種半合成的四環(huán)素類(lèi)抗菌藥物，具有高效和長(zhǎng)效性，作用機(jī)制主要是通過(guò)抑制細(xì)菌或者其他病原菌的蛋白質(zhì)合成而發(fā)揮抗菌、殺菌功效[16]。本研究結(jié)果顯示，治療后重度牙周炎患者BGP水平升高，MCP-1、sICAM-1、TNF-α、hs-CRP、IL-8水平降低，且LLLT療法、鹽酸米諾環(huán)素聯(lián)合治療療效明顯優(yōu)于單一藥物治療，提示聯(lián)合治療可發(fā)揮協(xié)同作用，鹽酸米諾環(huán)素可阻止細(xì)菌、蛋白質(zhì)的合成而發(fā)揮抗菌的作用,明顯抑制與破壞牙周組織和形成牙周袋有關(guān)的膠原酶的活性，療效顯著。

Arg1是M2型巨噬細(xì)胞的一種親水性蛋白，當(dāng)機(jī)體發(fā)生外傷、感染時(shí)需要從外源攝入[17]。慢性重度牙周炎進(jìn)展可能與巨噬細(xì)胞密切相關(guān)，且發(fā)現(xiàn)Arg1可抑制T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的增殖，以及細(xì)胞因子的分泌作用，具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能[18]。研究顯示，在重度牙周炎中Arg1表達(dá)下降，且Arg1具有促進(jìn)血管生長(zhǎng)和修復(fù)、重構(gòu)損傷組織的功能[19]。STAT6的磷酸化在M2巨噬細(xì)胞極化過(guò)程中發(fā)揮重要作用[20]。相關(guān)研究指出，通過(guò)抑制STAT6磷酸化，從而抑制巨噬細(xì)胞分化為M2型，進(jìn)一步證實(shí)STAT6磷酸化廣泛參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡及炎癥等過(guò)程[21]。研究發(fā)現(xiàn)，在健康牙周組織中有Arg1、STAT6的存在，提示M2型巨噬細(xì)胞在維持免疫穩(wěn)態(tài)中有關(guān)鍵作用[22]。鹽酸米諾環(huán)素的有效成分可能有效抑制膠原酶活性,減少骨吸收,促進(jìn)牙周膜細(xì)胞的附著及牙周組織再生,從而改善慢性牙周炎的癥狀。LLLT療法是指功率密度低的紅光或近紅外光，具有促進(jìn)傷口愈合、神經(jīng)再生等作用，安全無(wú)創(chuàng)[23]。本研究結(jié)果指出，治療后重度牙周炎患者Arg1、STAT6水平降低，提示LLLT療法聯(lián)合鹽酸米諾環(huán)素藥物可有效抑制炎性反應(yīng)，減輕重度牙周炎牙槽骨的吸收，延緩牙齒脫落，加強(qiáng)療效。

綜上所述，LLLT療法、鹽酸米諾環(huán)素聯(lián)合應(yīng)用可改善重度牙周炎患者臨床癥狀，有效減輕齦溝液內(nèi)炎性反應(yīng)，改善牙周指數(shù)，抑制Arg1、STAT6水平，療效顯著，不良反應(yīng)較少，安全性高，可作為治療重度牙周炎的有效手段。但本研究樣本納入量較小，可能會(huì)使研究結(jié)果出現(xiàn)偏倚，需進(jìn)一步加大樣本量深入研究以確認(rèn)。