子宮內(nèi)膜癌組織中miR-143 的表達及與預后的相關性分析

羅嬋娟

（宜賓市第二人民醫(yī)院/四川大學華西醫(yī)院宜賓醫(yī)院病理科，四川 宜賓 644000）

子宮內(nèi)膜癌（endometrial cancer）是發(fā)生于女性子宮內(nèi)膜的一種上皮惡性腫瘤，多發(fā)于圍絕經(jīng)期，臨床表現(xiàn)為不規(guī)則陰道出血、陰道排液、腹部包塊等癥狀，其死亡率位居婦科惡性腫瘤前列，嚴重威脅女性生命安全[1，2]。目前臨床多采用手術治療，但子宮內(nèi)膜癌確診時多數(shù)為中晚期，其治療效果不甚理想，術后遠處轉移率較高，患者3 年生存率較低，故明確影響預后的因素對子宮內(nèi)膜癌的臨床診治具有積極意義[3，4]。近年來研究發(fā)現(xiàn)[5，6]，微小RNA（microRNA，miRNA）可調(diào)節(jié)基因表達，在多種真核生物的病理進程中發(fā)揮重要作用，其中位于人染色體5q32 的miR-143 被證實與多種腫瘤細胞的增殖、遷移、侵襲及轉移息息相關，參與肝癌、胰腺癌、宮頸癌等腫瘤的發(fā)生及進展。但miR-143 在子宮內(nèi)膜癌中的研究較少，基于此，本研究以子宮內(nèi)膜癌患者為例，探討子宮內(nèi)膜癌組織中miR-143 的表達及與預后的相關性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年1 月-2018 年7 月宜賓市第二人民醫(yī)院/四川大學華西醫(yī)院宜賓醫(yī)院收治的82 例子宮內(nèi)膜癌患者為研究組，年齡47～61 歲，平均年齡（54.21±5.20）歲；病理類型：子宮內(nèi)膜樣腺癌75 例，其他7 例；根據(jù)隨訪3 年存活情況分為死亡組32 例，存活組50 例。另選取同時期住院的50例子宮肌瘤患者為對照組，年齡45～65 歲，平均年齡（55.01±5.18）歲。兩組年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審查批準，患者或家屬知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標準 納入標準：①研究組符合《子宮內(nèi)膜癌診斷與治療指南（第四版）》[7]中相關診斷標準并經(jīng)臨床宮腔鏡檢查確診為子宮內(nèi)膜癌；②子宮肌瘤患者均為子宮切除的良性患者；③意識清晰，無溝通障礙者；④依從性較好，可配合完成后續(xù)治療及隨訪者。排除標準：①合并其他惡性腫瘤者；②合并心、腦、腎等功能性器官存有器質(zhì)性病變者；③合并精神類疾病及既往病史者；④失訪或中途主動退出研究者。

1.3 方法 采用實時熒光定量多聚酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）檢測對照組及研究組癌組織、癌旁組織miR-143 表達水平。①樣本提?。菏中g時獲取患者子宮內(nèi)膜組織、癌組織、癌旁組織，洗凈后分別置于液氮速凍5 min 并于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?；②總RNA 提?。簩⒆訉m內(nèi)膜組織、癌組織、癌旁組織分別進行研磨，加入細胞裂解液處理后按照TRIzol 總RNA 試劑盒（美國Invitrogen 公司）說明書進行提取總RNA，采用N6000 彩屏紫外可見分光光度儀（青島瑞明儀器設備有限公司）定量，miRNA 試劑盒購于上海酶聯(lián)生物科技有限公司；③PCR 檢測：采用上海生工生物公司設計合成的引物：miR-143 上游引物序列為5’-GCTAGCAGGTTAATTGAAATA-3’，下游引物序列為5’-GTGGACCTTGCTGGAATATCG-3’；對照內(nèi)參（U）上游引物序列為5’-GTAATACTACCTGCTGACTCG-3’，下游引物序列為5’-AAATTAATGGAATTGACGAAT-3’；PCR 總反應體系為20 μl，上游及下游引物各1 μl，DNA 模板2 μl，滅菌蒸餾水6 μl，反應條件：95 ℃15 min，94 ℃60 s，55 ℃30 s，72 ℃延伸1 min，36 個循環(huán)；每個樣本均設有3 個復孔，留取Ct 平均值，分別計算引物及內(nèi)參的ΔCt 值，ΔCt=Ct（miR-143）-Ct（U6），以2ΔΔCt得出組織miR-143的相對表達量。

1.4 觀察指標 比較對照組、研究組及研究組不同預后者miR-143 表達水平，并繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic curve，ROC）曲線判斷研究組患者發(fā)生死亡時組織miR-143 水平最佳截斷值，分析不同miR-143 表達與臨床病理特征的關系及與預后的關系。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 24.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以（）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組miR-143 表達水平比較 研究組miR-143表達水平低于對照組（P＜0.05），且研究組中死亡組癌組織及癌旁組織miR-143 表達水平低于存活組（P＜0.05），見表1、表2。

表1 對照組與研究組miR-143 表達水平比較（）

表1 對照組與研究組miR-143 表達水平比較（）

表2 研究組不同預后患者miR-143 表達水平比較（）

表2 研究組不同預后患者miR-143 表達水平比較（）

2.2 研究組患者發(fā)生死亡時組織miR-143 水平最佳截斷值分析 ROC 曲線分析顯示，子宮內(nèi)膜癌患者癌組織最佳截斷值為0.510，曲線下面積為0.749，靈敏度為62.71%，特異度為80.21%，95%CI為（1.320～3.440），見圖1。

圖1 癌組織miR-143 對子宮內(nèi)膜癌患者預后價值評估的ROC 曲線圖

2.3 研究組中不同臨床病理特征患者癌組織miR-143 表達比較 研究組中miR-143 高表達患者52例，低表達患者30 例。不同病理分期、淋巴結轉移、分化程度間miR-143 表達水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而不同年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、肌層浸潤狀態(tài)間miR-143 表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 研究組中不同臨床病理特征患者癌組織miR-143 表達比較[n（%）]

2.4 研究組患者癌組織miR-143 表達與預后的關系隨訪3 年，研究組患者癌組織miR-143 高表達生存率為60.00%，高于miR-143 低表達生存率的38.46%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見圖2。

圖2 研究組患者癌組織miR-143 表達與預后的關系

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率有所增加且日趨年輕化，生育年齡女性亦可發(fā)生，其發(fā)病機制尚未完全明確[8]。研究表明[9，10]，雌激素對子宮內(nèi)膜的長期持續(xù)刺激、子宮內(nèi)膜增生過長、不育、家族史等均可能誘發(fā)子宮內(nèi)膜癌。目前子宮內(nèi)膜癌的最佳治療方式為以手術切除為主的綜合治療，臨床手段有限，患者生存率較低，故明確影響預后的因素，對避免癌轉移、提高患者生存率有著重要意義。隨著基因工程、蛋白組學在癌癥領域的不斷發(fā)展。有研究發(fā)現(xiàn)[11，12]，CA199、甲胎蛋白等許多與子宮內(nèi)膜癌相關的生物標志物對子宮內(nèi)膜癌疾病的診斷及預后具有重要作用，但其存在假陽性、特異性較差等現(xiàn)象，故尋求更加合理的生物標志物對子宮內(nèi)膜癌進行早期診斷及預后評估尤為關鍵。

miRNA 由高等真核生物基因組編碼，是一種類似于siRNA 的小分子，其通過和靶向基因mRNA 堿基配對，誘導沉默復合體降解，阻礙mRNA 翻譯，在許多癌癥病理中占據(jù)重要位置[13，14]。研究表明[15]，miRNA 既可作為抑癌基因下調(diào)原癌基因活性，也可轉變?yōu)榘┗蛳抡{(diào)抑制體內(nèi)原有基因活性，故多數(shù)研究對腫瘤的研究越來越集中在miRNA 分子上。研究顯示[16，17]，miRNA 參與乳腺癌、前列腺癌、宮頸癌等多種癌癥疾病發(fā)生及發(fā)展，如miR-199 在乳腺癌組織中表達下調(diào)與不良預后有關，而在胃癌組織中表達上調(diào)可促進患者不良預后；miR-206 可抑制前列腺細胞增殖、遷移進程，有利于疾病早期診斷及預后評估。而miR-143 作為miRNA 家族的重要成員，可靶向調(diào)節(jié)細胞增殖相關信號通路或生物學反應，進而干擾相應生物學效應過程，其已被證實在胰腺癌、肝癌等惡性腫瘤中發(fā)揮抑癌基因作用[18]，但在子宮內(nèi)膜癌疾病中表達情況鮮有報道。本研究應用PCR 檢測子宮內(nèi)膜癌患者組織miR-143 表達水平，結果顯示研究組miR-143 表達水平低于對照組（P＜0.05），且研究組中死亡組癌組織及癌旁組織miR-143 表達水平低于存活組（P＜0.05），提示臨床可將miR-143 作為子宮內(nèi)膜癌的生物標志物。同時，本研究分析子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征與miR-143 表達水平的相關性發(fā)現(xiàn)，miR-143 與病理分期、淋巴結轉移、分化程度相關，與Christensen ST 等[19]研究結果具有同質(zhì)性，提示miR-143 表達水平越低，病理分期級別越高、淋巴結轉移風險越大，分化程度越低，可為子宮內(nèi)膜癌的早期診斷提供參考依據(jù)。Farooqi AA 等[20]研究表明，miR-143 在子宮內(nèi)膜病變組織中的表達水平與患者生存率有關。本研究結果也發(fā)現(xiàn)，隨訪3 年，EC 患者組織miR-143 高表達組生存率高于miR-143 低表達組，提示miR-143 表達水平影響子宮內(nèi)膜癌患者預后，可為患者生存預測提供理論支持。

綜上所述，子宮內(nèi)膜癌患者組織miR-143 表達下調(diào)，對患者預后有明顯影響，臨床可將其作為子宮內(nèi)膜癌預后的評估指標。但因本研究選取樣本量及研究時間有限，相關結論仍需多中心大樣本臨床試驗進一步佐證。