引物
- 聚焦關(guān)鍵能力,優(yōu)化高考復(fù)習(xí)
——以高中生物學(xué)“PCR引物”試題歸類分析為例
了大量以“PCR引物”為背景的試題,不僅考查PCR 實(shí)驗(yàn)本身,還深入到通過PCR 技術(shù)解決基因工程操作中遇到的實(shí)際問題,如給目的基因加上限制酶識(shí)別序列或制備融合基因等。但高中生物學(xué)教材對(duì)引物的概念、利用引物的必要性、如何設(shè)計(jì)或選擇引物、如何利用引物初步判斷擴(kuò)增的DNA 是目的片段、引物與退火溫度的關(guān)系等問題描述較少。下面通過對(duì)歷年高考試題、模擬試題進(jìn)行歸類與分析,鞏固基礎(chǔ)知識(shí),培養(yǎng)學(xué)生關(guān)鍵能力,為教師教學(xué)提供參考。1 引物的設(shè)計(jì)【例1】(2017·江蘇)設(shè)
中學(xué)生物學(xué) 2023年8期2024-01-02
- 核桃過敏原成分PCR 方法的建立
碼序列上設(shè)計(jì)新型引物，利用熒光定量PCR 方法檢測食品中的核桃過敏原，檢測限為2.5 pg 核桃DNA，與ELISA 分析比較，該方法在核桃的痕量檢測中顯示出更高的靈敏度和可靠性。PCR 法在復(fù)雜食品中過敏原的定量分析及物種鑒定方面，具有其他方法無法比擬的優(yōu)點(diǎn)，這使PCR 方法在動(dòng)植物源性食物過敏原檢測方面，存在極大的優(yōu)勢，適合國際法規(guī)所要求的食品中痕量過敏原的檢測原則[14]。在所有核桃過敏原中研究最多的是英國核桃中的Juglans Jug r 1，一種
農(nóng)產(chǎn)品加工 2023年10期2023-06-21
- 例談基于PCR的基因定點(diǎn)突變技術(shù)
疊延伸PCR、大引物PCR等新型PCR技術(shù)，但不少一線教師對(duì)其理解不夠透徹。除此之外，重組PCR、環(huán)狀質(zhì)粒PCR等也能對(duì)基因進(jìn)行定點(diǎn)誘變，其原理不完全相同，使用情境也各有側(cè)重。本文以基因定點(diǎn)突變技術(shù)為線索，將相關(guān)的幾種PCR技術(shù)串聯(lián)在一起，幫助一線教師拓展視野，并提供教學(xué)素材。1 基因定點(diǎn)突變技術(shù)的研究意義人類很早就意識(shí)到基因突變、基因重組等可遺傳變異對(duì)進(jìn)化的重要作用，但是傳統(tǒng)的基因突變和基因重組具有不定向性，極大地延長了基因向人類需求進(jìn)化的時(shí)間。轉(zhuǎn)基因技
中學(xué)生物學(xué) 2023年2期2023-05-30
- 基于等位基因特異性PCR 技術(shù)檢測Sw-5b 基因
b-f1/r1 引物擴(kuò)增抗病基因型材料和感病基因型材料。Sw-5b-f1:5'-AACCACTAG GGGCAGTCCTT-3'，Sw-5b-r1:5'-CTCACTATGTGGC TGCTCCA-3'。將獲得的片段進(jìn)行克隆和測序。PCR反應(yīng)總體積為25 μL，模板DNA 40 ng，Taq DNA 聚合酶0.5 U，dNTPs（10 mmol·L-1）0.5 μL，10×PCR 緩沖液2.5 μL，5'端引物（10 μmol·L-1）2.5 μL，3'端
天津農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年4期2023-05-06
- 烏蘇里擬鲿SCoT多態(tài)性引物篩選
鲿80條SCoT引物進(jìn)行多態(tài)性及其最佳退火溫度篩選，從中得出26條具有多態(tài)性且條帶清晰的引物，共擴(kuò)增出135條條帶，其中多態(tài)性條帶86條，占總條帶數(shù)的63.70%，多態(tài)百分率為25%～100%，最佳退火溫度為47℃～63℃。該研究結(jié)果為SCoT分子標(biāo)記技術(shù)在烏蘇里擬鲿相關(guān)研究中的應(yīng)用提供了參考。烏蘇里擬鲿（Pseudobagrus ussuriensis）俗稱牛尾巴、招財(cái)魚等，屬鲇形目（Siluriformes）、鲿科（Bagridae）、擬鲿屬（Pseu
中國水產(chǎn) 2023年1期2023-02-22
- DNA引物合成起始的分子基礎(chǔ)
始期間，寡核苷酸引物由引物酶從頭合成，隨后由復(fù)制聚合酶延伸以完成基因組復(fù)制。引物酶-聚合酶（Prim-Pol）超家族是一組多樣性的引物酶，包括復(fù)制型引物酶和參與適應(yīng)性免疫的與CRISPR相關(guān)的引物酶-聚合酶（CAPPs）。盡管對(duì)這些酶的活性了解很多，但引物酶用于啟動(dòng)引物合成的精確機(jī)制尚未闡明。在此，研究人員確定了通過CAPP啟動(dòng)引物合成的分子基礎(chǔ)，并表明這一機(jī)制在復(fù)制型引物酶中也是保守的。引物起始復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)揭示了在合成第1個(gè)磷酸二酯鍵之前，進(jìn)入的核苷
廣東藥科大學(xué)學(xué)報(bào) 2022年3期2023-01-04
- 高中生物學(xué)PCR技術(shù)中“引物”相關(guān)問題歸類分析
題中出現(xiàn)了大量與引物有關(guān)的試題，而現(xiàn)有高中生物學(xué)教材只提及PCR 技術(shù)需要引物。為什么需要引物？引物是什么？引物的作用是什么？引物的堿基序列如何設(shè)計(jì)？PCR 循環(huán)時(shí)需要多少引物？如何選擇引物和判斷引物的互補(bǔ)鏈？引物與PCR 反應(yīng)時(shí)復(fù)性溫度的高低和時(shí)間長短有什么關(guān)系？這些相關(guān)問題在教材中并未提及，需要教師對(duì)上述相關(guān)問題進(jìn)行歸類分析。筆者在基因工程專題的復(fù)習(xí)過程中構(gòu)建了以引物為核心的知識(shí)網(wǎng)絡(luò)圖（圖1），培養(yǎng)學(xué)生學(xué)科內(nèi)知識(shí)的綜合能力，拓展學(xué)生視野，提高學(xué)生的科學(xué)
生物學(xué)通報(bào) 2022年1期2022-11-22
- 利用熒光SSR標(biāo)記構(gòu)建歐李種質(zhì)分子身份證1)
因組DNA提取與引物篩選葉片基因組DNA的提取采用CTAB法[23]，加入30～50 μL TE-buffer，紫外分光光度計(jì)和0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA質(zhì)量，稀釋至30 mg·L-1保存?zhèn)溆?。試?yàn)所用的SSR引物參考?xì)W李近緣種屬李屬的櫻桃、桃及杏上發(fā)表的引物[24-29]，分別進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測，從21對(duì)引物中篩選出條帶清晰、多態(tài)性高的13對(duì)SSR引物(表2)，由北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司合成，用FAM(藍(lán)色)熒光修飾上游引物5’端，對(duì)19份
東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 2022年10期2022-11-07
- 20個(gè)玉米自交系SSR指紋圖譜的構(gòu)建
R擴(kuò)增所需SSR引物由上海生工合成，溶解后置于-80℃貯存?zhèn)溆?。反?yīng)體系：每20μL體積中含1×EasyTaq Buffer，0.4 mmol/L dNTP Mix，SSR引 物(正 向 引 物 和 反 向 引 物)各0.25μmnol/L，1U EasyTaq DNA聚合酶，20 ng DNA模板，反應(yīng)液上加蓋一滴礦物油，于ABI 9700型PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性5 min，1個(gè)循環(huán)；94℃變性40 s，58℃退火40 s，72℃
農(nóng)業(yè)技術(shù)與裝備 2022年9期2022-10-21
- 基于跨反向剪接位點(diǎn)引物特異性檢測circRNA的PCR方法
接位點(diǎn)兩側(cè)的背向引物進(jìn)行qRT-PCR已被廣泛用于檢測circRNA的表達(dá)水平，但使用常規(guī)背向引物無法特異地?cái)U(kuò)增發(fā)生可變剪接環(huán)化時(shí)被包含的circRNA，所以開發(fā)一種適用于發(fā)生可變剪接環(huán)化的circRNA的定量分析方法至關(guān)重要。逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）是驗(yàn)證circRNA并分析其表達(dá)量簡便、快速的方法，其關(guān)鍵在于引物設(shè)計(jì)的位置。由于circRNA和線性RNA序列相同，為避免擴(kuò)增出線性序列，circRNA驗(yàn)證時(shí)需要跨
生物技術(shù)通報(bào) 2022年5期2022-06-10
- 甜菜全基因組SSR引物的篩選與評(píng)價(jià)
技術(shù)，尋找合適的引物，這對(duì)甜菜遺傳圖譜和指紋圖譜的構(gòu)建、遺傳多樣性的鑒定等分子標(biāo)記輔助育種具有重要意義[2]。缺乏理想的分子標(biāo)記工具和基因組資源是阻礙甜菜遺傳研究和分子育種發(fā)展的重要因素。近年來，基因組學(xué)不斷發(fā)展，利用分子標(biāo)記分析種質(zhì)資源遺傳多樣性和親緣關(guān)系已經(jīng)在多種重要作物上廣泛開展[3]。另外也有多種分子標(biāo)記，如AFLP[4]、SRAP[5]、RAPD[6]、SSR[7]、ISSR[8]、SNP[9]以及 SCoT[10]等應(yīng)用于遺傳多樣性分析，在眾多
中國農(nóng)學(xué)通報(bào) 2022年12期2022-06-01
- 玉米品種德美亞多重SSR-PCR系統(tǒng)的建立及應(yīng)用
系中加入多對(duì)反應(yīng)引物，擴(kuò)增出多個(gè)目的條帶的技術(shù)。由于該技術(shù)具有快速高效、低成本等優(yōu)點(diǎn)，目前在生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域已得到廣泛的應(yīng)用[9-12]。因此本研究的主要目的在于利用SSR標(biāo)記，針對(duì)本公司主推不同系列的‘德美亞’品種，篩選具有多態(tài)性的SSR 引物，并組建多重引物組合，將多重PCR技術(shù)應(yīng)用到玉米種子純度鑒定中，制定出一套玉米品種純度鑒定方案，指導(dǎo)大田生產(chǎn)。1 材料與方法1.1 材料選用本公司提供的‘德美亞’雜交種及其親本為試驗(yàn)材料，‘德美亞’品種主要分為3
中國糖料 2022年2期2022-04-06
- 花菜類雜交種純度鑒定SSR 核心引物篩選
往需要進(jìn)行大量的引物篩選工作，才能找到適合的鑒定引物[3]。確定一套適于純度鑒定的核心引物，并構(gòu)建品種純度鑒定體系，對(duì)花菜類種子的純度鑒定至關(guān)重要。有了核心引物就不再需要進(jìn)行繁瑣的引物篩選，即使對(duì)未知品種，也只需進(jìn)行少量的篩選，就能迅速找到合適的鑒定引物[4]。本研究通過對(duì)70 個(gè)花椰菜和青花菜材料的DNA 指紋分析，確定適于花菜類雜交種純度鑒定的核心引物，構(gòu)建了花菜類雜交種純度鑒定 體系。1 材料與方法1.1 試驗(yàn)材料試驗(yàn)材料選取F1材料70 份，其中青
中國種業(yè) 2021年11期2021-11-25
- 非洲豬瘟病毒LNA引物PCR檢測方法的建立及優(yōu)化
FV檢測中常用的引物設(shè)計(jì)靶標(biāo)[7]。PCR方法是目前ASFV快速診斷中廣泛推薦使用的核酸檢測技術(shù)[8]，賈云飛等[9]針對(duì)非洲豬瘟病毒p72基因建立了非洲豬瘟病毒SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法，崔貝貝等[10]基于E184L基因建立了非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法。熒光定量PCR方法檢測靈敏度高、特異性強(qiáng)，但所用儀器和試劑價(jià)格昂貴，成本高，且對(duì)操作人員要求嚴(yán)格，不利于其在條件一般的實(shí)驗(yàn)室或基層獸醫(yī)臨床檢測中大規(guī)模推廣應(yīng)用；常規(guī)P
中國農(nóng)學(xué)通報(bào) 2021年29期2021-11-13
- 非洲豬瘟病毒LNA引物PCR檢測方法的建立及優(yōu)化
FV檢測中常用的引物設(shè)計(jì)靶標(biāo)[7]。PCR方法是目前ASFV快速診斷中廣泛推薦使用的核酸檢測技術(shù)[8]，賈云飛等[9]針對(duì)非洲豬瘟病毒p72基因建立了非洲豬瘟病毒SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法，崔貝貝等[10]基于E184L基因建立了非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法。熒光定量PCR方法檢測靈敏度高、特異性強(qiáng)，但所用儀器和試劑價(jià)格昂貴，成本高，且對(duì)操作人員要求嚴(yán)格，不利于其在條件一般的實(shí)驗(yàn)室或基層獸醫(yī)臨床檢測中大規(guī)模推廣應(yīng)用；常規(guī)P
中國農(nóng)學(xué)通報(bào) 2021年29期2021-11-13
- SSR-based hybrid identification, genetic analyses and fingerprint development of hybridization progenies from sympodial bamboo (Bambusoideae, Poaceae)
取的30對(duì)SSR引物及其序列等信息Thirty SSR primer pairs were used for the PCR amplification of the genomic DNA of nine clones (A1-A9) ofD.latiflorusand 10 clones (E1-E10) ofB.chungii. PCR products were detected using gel electrophoresis. Primer
- 鄱陽湖流域蚌類環(huán)境DNA宏條形碼引物的篩選驗(yàn)證*
A識(shí)別片段來設(shè)計(jì)引物.環(huán)境DNA宏條形碼引物在監(jiān)測、定量過程中存在較大偏好性，選擇適合的引物可識(shí)別生態(tài)群落中不同的物種.但環(huán)境中細(xì)胞外源的DNA會(huì)不斷降解，在保證物種分辨率的前提下，選擇的分子標(biāo)記越短越好.所以使用宏條形碼技術(shù)分析環(huán)境DNA的研究中，為了避免在不同分類種群中放大偏差，選擇設(shè)計(jì)較短的、高度保守序列片段的引物是極其重要的.如果實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的引物保守度低和特異性不足的話，容易引起堿基錯(cuò)配甚至引起假陽性和假陰性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果.蚌的分布呈明顯的地域性特征，北
湖泊科學(xué) 2021年4期2021-07-07
- 科學(xué)思維視角下PCR 的深度學(xué)習(xí)
括：緩沖液、一對(duì)引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA、4 種dNTP。反應(yīng)過程包括：高溫變性、低溫復(fù)性、中溫延伸。反應(yīng)結(jié)果：在短時(shí)間內(nèi)，以指數(shù)形式擴(kuò)增DNA 片段。2.以題說題，提升分析與綜合能力【例1】（2017 年，江蘇卷，第33 題節(jié)選）（題干略）（2）設(shè)計(jì)一對(duì)與MT 基因兩端序列互補(bǔ)配對(duì)的引物（引物1 和引物2），為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒，在引物中需要增加適當(dāng)?shù)腳_________位點(diǎn)。設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免引物之間形成__________，而造成引物自連
教學(xué)考試(高考生物) 2021年2期2021-05-31
- 柑橘黃龍病早期診斷的PCR檢測技術(shù)優(yōu)化
靠性較低[9]，引物與DNA模板濃度的不同也會(huì)對(duì)檢測結(jié)果產(chǎn)生較大的影響[10]。本實(shí)驗(yàn)在前人研究基礎(chǔ)上選用使用率較高的幾對(duì)引物進(jìn)行比較，通過對(duì)PCR體系中的各物質(zhì)濃度進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn)，提升引物的特異性與靈敏度[11]，篩選用于黃龍病菌檢測的引物，優(yōu)化檢測反應(yīng)體系，提高檢測的準(zhǔn)確度，為大規(guī)模均一化鑒定柑橘黃龍病提供一種快速低成本的方法。1 材料與方法1.1 材料黃龍病陽性樣品：采自江西贛州某黃龍病重癥果園的具有典型黃龍病斑駁癥狀的臍橙葉片。黃龍病陰性樣品：為本實(shí)
浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年4期2021-04-02
- 基于簡化基因組數(shù)據(jù)開發(fā)嶺南青岡微衛(wèi)星引物
對(duì)某一物種設(shè)計(jì)的引物通常只適用于這一物種及其近源種。隨著近幾年新一代測序技術(shù)的快速發(fā)展，基于高通量測序技術(shù)可在短時(shí)期內(nèi)以較低成本獲得大量SNP(Single nucleotide polymorphism)[4]。例如，近幾年出現(xiàn)的簡化基因組測序技術(shù)(restriction-site associated DNA sequence,RAD-seq)現(xiàn)已在群體遺傳學(xué)、保護(hù)生物學(xué)及譜系地理學(xué)中開始廣泛使用[5]。目前微衛(wèi)星在保護(hù)生物學(xué)及群體遺傳學(xué)中還具有一定的
植物研究 2020年4期2020-07-13
- 甜菜分子標(biāo)記InDel-PCR引物的篩選
失位點(diǎn)的PCR-引物，其本質(zhì)仍屬于長度多態(tài)性遺傳標(biāo)記[7-8]。InDel作為一種高通量遺傳標(biāo)記，具有基因組內(nèi)分布廣泛、帶型簡單、重復(fù)性好、準(zhǔn)確性高、變異穩(wěn)定、密度高、數(shù)目眾多等特點(diǎn)，與其他分子標(biāo)記相比，在基因組的同一位置出現(xiàn)相同大小的InDel標(biāo)記的概率非常低，避免了由于特異性和復(fù)雜性導(dǎo)致的后續(xù)分析模糊；在作物種質(zhì)資源遺傳多樣性分析中，可顯著提高其重現(xiàn)性、準(zhǔn)確性和分辨率，因此能解決引種材料中名稱混亂不清、種質(zhì)資源整理困難、親本材料間遺傳重復(fù)度高等問題[7
中國糖料 2020年2期2020-04-09
- 基于SSR熒光標(biāo)記進(jìn)行酒花品種鑒定
利用30對(duì)SSR引物對(duì)11個(gè)酒花品種進(jìn)行鑒定；HORREO等[21]利用毛細(xì)管電泳對(duì)生長在西班牙西北部(加利西亞)的野生啤酒花進(jìn)行遺傳多樣性分析。目前SSR分子標(biāo)記主要使用聚丙烯酰胺凝膠電泳和毛細(xì)管電泳2種檢測平臺(tái)，由于毛細(xì)管電泳具有高效、快速、微量、自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，已成為SSR分子標(biāo)記的主流檢測平臺(tái)。然而毛細(xì)管電泳檢測時(shí)要求擴(kuò)增片段標(biāo)記熒光染料，尤其在引物篩選階段，如果對(duì)上百對(duì)引物進(jìn)行熒光標(biāo)記則引物成本較高，影響實(shí)際應(yīng)用。TP-M13-SSR(simple
食品與發(fā)酵工業(yè) 2019年20期2019-11-14
- 桑樹ISSR引物最適退火溫度的探究*
CR的退火溫度與引物長度、堿基組成和引物濃度有關(guān)，ISSR引物的退火溫度差異很大是ISSR-PCR反應(yīng)的突出特點(diǎn)。對(duì)于長度低于20bp的引物，Tm值可以按Tm=4(G+C)+2(A+T)計(jì)算，ISSR引物一般少于20bp，適用于該公式[1]。但是在實(shí)驗(yàn)過程中，往往根據(jù)Tm值得不到清晰穩(wěn)定的擴(kuò)增條帶，因此在正式實(shí)驗(yàn)之前，有必要確定每個(gè)ISSR引物的最適退火溫度。本試驗(yàn)在已篩選出桑樹ISSR-PCR最佳反應(yīng)體系的基礎(chǔ)上，對(duì)適合桑樹體系的5條ISSR引物的最佳退
蠶學(xué)通訊 2019年3期2019-11-12
- 有關(guān)PCR擴(kuò)增過程中的疑慮與剖析
大幾百萬倍。3 引物的概念及PCR過程使用引物的原因在PCR技術(shù)中，擴(kuò)增目的基因的方法其實(shí)就是必修2中的DNA復(fù)制。那么，復(fù)制為什么要引物？這引物的化學(xué)本質(zhì)是什么？復(fù)制完成后引物到哪里去了？……學(xué)生會(huì)產(chǎn)生出一串關(guān)于引物的疑問。在PCR過程中之所以需要引物是因?yàn)樵贒NA復(fù)制中DNA聚合酶僅僅可以把新的脫氧核苷酸加到已有的DNA鏈上，據(jù)此可知：引物其實(shí)就是引子，是一小段單鏈DNA（體內(nèi)DNA復(fù)制所用的引物是RNA，RNA引物形成后，由DNA聚合酶Ⅲ催化將第一個(gè)
中學(xué)生物學(xué) 2019年7期2019-10-17
- 麥芽品種多重?zé)晒釹SR標(biāo)記指紋數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建
]利用5對(duì)SSR引物對(duì)國內(nèi)外8個(gè)麥芽品種進(jìn)行了區(qū)分，但文中并未給出具體的引物序列信息，品種數(shù)量較少，且使用的聚丙烯酰胺凝膠電泳存在分辨率低、無法準(zhǔn)確讀取擴(kuò)增片段大小等缺點(diǎn)[14]，因此無法進(jìn)行應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)室前期基于TP-M13熒光標(biāo)記結(jié)合單重?zé)晒釶CR技術(shù)可對(duì)23個(gè)麥芽品種進(jìn)行區(qū)分[15]，但由于毛細(xì)管電泳的試劑及引物成本較高，該法在大批量、多批次樣品檢測時(shí)存在檢測周期長、成本高等缺點(diǎn)。隨著電泳技術(shù)的發(fā)展，多重?zé)晒釶CR與毛細(xì)管電泳多重?zé)晒鈾z測技術(shù)的結(jié)合剛
食品與發(fā)酵工業(yè) 2019年18期2019-10-09
- 用于海洋沉積物中厭氧氨氧化細(xì)菌分子生態(tài)學(xué)研究的引物比較?
基因的兩對(duì)特異性引物(Amx368F/Amx820R和Brod541F/Amx820R)在研究海洋、河口等生態(tài)環(huán)境中厭氧氨氧化細(xì)菌的豐度分布以及群落結(jié)構(gòu)時(shí)應(yīng)用較為廣泛[23-26]。據(jù)報(bào)道，Amx368F是定向擴(kuò)增厭氧氨氧化細(xì)菌所有屬的前引物，之前的研究發(fā)現(xiàn)，Amx368F可以十分高效地覆蓋厭氧氨氧化細(xì)菌[22, 27]，而Brod541F更專注于Ca. Scalindua屬，同時(shí)，后引物Amx820R側(cè)重于Ca. Scalindua屬、Ca. Broca
- 新疆主栽骨干棉花品種指紋圖譜構(gòu)建及純度鑒定
12]采用SSR引物對(duì)51個(gè)常規(guī)棉品種進(jìn)行了基因純度鑒定、遺傳聚類分析和品種特異性鑒定。聶新輝等[13,14]構(gòu)建了新疆2013年前審定的51個(gè)新陸早常規(guī)棉品種和23個(gè)彩色棉品種的DNA指紋圖譜，并進(jìn)行了遺傳多樣性分析。近年來，利用SSR標(biāo)記也構(gòu)建了小麥[15]、水稻[16]、大豆[17]、玉米[18]、煙草[19]等農(nóng)作物的DNA指紋圖譜數(shù)據(jù)庫?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】當(dāng)前棉花品種純度和真實(shí)度多是通過田間小區(qū)種植的方法鑒定的，此法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，操作復(fù)雜，且受環(huán)境影響
新疆農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年2期2019-05-30
- 明悉引物設(shè)計(jì) 參透PCR技術(shù)
關(guān)鍵字 PCR 引物設(shè)計(jì) 題型解析PCR(Polymerase Chain Reaction)是一種人工合成DNA的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，PCR技術(shù)是高中生物學(xué)選修3《現(xiàn)代生物科技專題》模塊的重點(diǎn)和難點(diǎn)之一，其基本原理和過程如圖1所示。圖1 PCR原理反應(yīng)示意圖[1]在教學(xué)實(shí)踐中，教師一般采用動(dòng)畫演示或者繪圖的方式闡釋PCR的原理和過程。但是，學(xué)生在解決PCR實(shí)際問題時(shí)仍然會(huì)有很多困惑，其中最為突出的問題是PCR的引物設(shè)計(jì)。引物設(shè)計(jì)是PCR的核心，學(xué)生既可以通過
生物學(xué)教學(xué) 2019年3期2019-03-22
- 紅鰭東方鲀(Takifugu rubripes)Vtg基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR分析的引物設(shè)計(jì)與評(píng)估
R表達(dá)分析的相關(guān)引物，為今后分析紅鰭東方鲀的 Vtg基因的表達(dá)譜、深入探討河豚毒素在肝臟和卵巢中富集與分布奠定基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 材料實(shí)驗(yàn)用18月齡的紅鰭東方鲀50尾，采自大連天正實(shí)業(yè)有限公司。麻醉后，采集新鮮的紅鰭東方鲀肝臟和尾鰭組織，立即儲(chǔ)存在液氮中，然后在-80 ℃的超低溫冰箱中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?.2 實(shí)驗(yàn)方法1.2.1 性別鑒定 將上述50尾紅鰭東方鲀解剖，根據(jù)性腺發(fā)育的程度、形狀和顏色進(jìn)行性別鑒定，具體鑒別方法按照參考文獻(xiàn)20、21的方法進(jìn)行。
河北漁業(yè) 2019年3期2019-03-22
- GATA1不同激酶活性突變體質(zhì)粒的構(gòu)建及蛋白表達(dá)和亞細(xì)胞定位
01）目的采用大引物法構(gòu)建GATA1不同激酶活性突變體GATA1 S161A S187A （死型） 和GATA1 S161D S187D （激活型） 真核表達(dá)載體，并證實(shí)其融合蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及定位，旨在進(jìn)一步探討其生物學(xué)功能和潛在腫瘤治療靶點(diǎn)。方法以GFP-GATA1 WT為模板，采用大引物法擴(kuò)增S161A S187A、S161D S187D突變體片段，雙酶切克隆至pEGFP-C1表達(dá)載體中，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293中，經(jīng)免疫印跡鑒定融合蛋白的表達(dá)
中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2018年1期2018-12-27
- PCR過程中生成引物二聚體回收再利用的研究
PCR）過程中，引物的 3’端不依賴模版相互作用生成大量非特異性產(chǎn)物，尤其是引物二聚體[1]。有研究報(bào)道，在兩引物的3’端只要有一個(gè)堿基互補(bǔ)配對(duì)，30個(gè)循環(huán)即可生成引物二聚體[2]。許多實(shí)驗(yàn)通過引物的優(yōu)化設(shè)計(jì)、控制反應(yīng)條件、熱啟動(dòng)和酶的優(yōu)化等方法來減少引物二聚體的生成[3，4]，但引物濃度較高時(shí)，這些方法不能減少引物二聚體的生成。因此，引物二聚體被認(rèn)為是PCR反應(yīng)過程中的必然產(chǎn)物，嚴(yán)重干擾實(shí)時(shí)熒光定量PCR、反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （reverse tr
江西醫(yī)藥 2018年8期2018-10-24
- 16S rDNA特異性引物設(shè)計(jì)優(yōu)化及其在淞江鱸體表微生物鑒定中的應(yīng)用
1203)PCR引物設(shè)計(jì)中，引物與模板結(jié)合的特異性是首要考慮要素．特異性不足時(shí)，引物容易與近似序列發(fā)生非特異性結(jié)合，產(chǎn)生不純的擴(kuò)增產(chǎn)物，在qPCR的時(shí)候也會(huì)影響定量結(jié)果．引物的特異性是保證理想PCR產(chǎn)物的基本條件．一般而言，較高的引物特異性容易得到單一的PCR產(chǎn)物，但是這并不總是符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的需求．從屬水平上來看，利用16S rDNA分析各種微生物的相對(duì)豐度時(shí)，設(shè)計(jì)的引物就需要滿足以下兩個(gè)主要條件： 一是在屬內(nèi)具有較好的覆蓋度，能夠與屬內(nèi)絕大多數(shù)物種的DN
復(fù)旦學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版） 2018年1期2018-05-15
- ONECUT1重組質(zhì)粒構(gòu)建及其對(duì)細(xì)胞應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)的影響
CR擴(kuò)增的上下游引物，即上游引物序列為AATGGAATTCATGAACGCGCAGCTGACCATGG (內(nèi)切酶為EcoRⅠ)，下游序列為GGCGAAGCTTTCATGCTTTGGTACAAGTGCTTG(內(nèi)切酶為HindⅢ)。提取U251細(xì)胞總RNA，取1 μg總RNA，加入All-in-one cDNA Synthesis SuperMix 10 μL，RT-PCR擴(kuò)增獲得cDNA樣本，擴(kuò)增條件：25 ℃ 10 min，42 ℃ 30 min，85 ℃
山東醫(yī)藥 2018年5期2018-03-15
- 基于介觀量子理論的最佳PCR引物濃度計(jì)算
理論的最佳PCR引物濃度計(jì)算周德良，劉明坤，葉鋒（北京旌準(zhǔn)醫(yī)療科技有限公司，北京 100176）對(duì)PCR反應(yīng)體系而言，引物濃度過高或過低對(duì)反應(yīng)體系都存在嚴(yán)重的影響，只有合理的濃度區(qū)間才能對(duì)整個(gè)反應(yīng)高效有序地進(jìn)行發(fā)揮重要的作用.降低PCR引物間的量子效應(yīng)有利于提高引物間PCR反應(yīng)的獨(dú)立性和確定性，故粒子自由程至少是相位關(guān)聯(lián)長度的10倍，并由此可以得到引物反應(yīng)濃度的上限；粒子非彈性散射的最大自由程是粒子運(yùn)動(dòng)的極限自由程，依此可以得到引物反應(yīng)濃度的下限，從而確定
黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào) 2017年5期2017-10-31
- 玉米InDel標(biāo)記20重PCR檢測體系的建立
38對(duì)InDel引物進(jìn)行單重PCR評(píng)估,共得到192對(duì)擴(kuò)增效率高、穩(wěn)定性好的引物。根據(jù)軟件評(píng)估結(jié)果、擴(kuò)增質(zhì)量、產(chǎn)物范圍、染色體均勻分布原則從192對(duì)引物中優(yōu)選出30對(duì)綜合表現(xiàn)較好的引物形成擴(kuò)增產(chǎn)物范圍在80~200 bp和200~400 bp的兩組核心引物組合,每套組合中有10對(duì)引物分布在不同染色體上。在核心引物組合的基礎(chǔ)上綜合考慮染色體分布、堿基片段范圍、引物熒光顏色,逐一添加引物,最終形成兩組玉米20重PCR體系,一組40重?zé)晒鈽?biāo)記毛細(xì)管電泳。玉米;I
作物學(xué)報(bào) 2017年8期2017-08-22
- 不同引物對(duì)和退火溫度對(duì)鹽生植物鹽穗木內(nèi)參基因β-actin擴(kuò)增效率的影響
30046)不同引物對(duì)和退火溫度對(duì)鹽生植物鹽穗木內(nèi)參基因β-actin擴(kuò)增效率的影響白雪芹，楊瑞瑞，曾幼玲(新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院/新疆生物資源基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830046)【目的】以鹽生植物鹽穗木為材料，研究不同引物對(duì)和不同退火溫度對(duì)鹽穗木內(nèi)參基因β-actin擴(kuò)增效率的影響?！痉椒ā吭O(shè)計(jì)擴(kuò)增β-actin基因的兩對(duì)引物，標(biāo)記為β-actin1和β-actin2，分別建立這兩對(duì)引物擴(kuò)增鹽穗木β-actin基因和特異性引物擴(kuò)增該物種的過氧
新疆農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年2期2017-04-13
- 呼吸道感染樣本中IFITMs引物優(yōu)化
本中IFITMs引物優(yōu)化1.濟(jì)南大學(xué)-山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院（山東 濟(jì)南 250200）2.山東省罕少見病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東省醫(yī)藥生物技術(shù)研究中心,山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院(山東 濟(jì)南 250062)左清利1,2魯艷芹1,2韓金祥1,2目的優(yōu)化干擾素誘導(dǎo)的跨膜蛋白（Interferon induced transmenmbrane proteins,IFITMs）的五個(gè)亞型基因，即IFITM1、IFITM2、IFITM3、IFITM5和IFITM10。方
罕少疾病雜志 2017年2期2017-02-23
- 兼并PCR技術(shù)反應(yīng)條件的探索
210095兼并引物是根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸序列與其對(duì)應(yīng)基因的堿基序列之間的共線性關(guān)系設(shè)計(jì)出的引物[1]?？寺⌒碌鞍谆驎r(shí)，可通過蛋白質(zhì)序列的測定獲取末端氨基酸序列信息，并依據(jù)其氨基酸序列，設(shè)計(jì)兼并引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。使用兼并引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增是獲得新基因和基因家族新成員的常見方法[2]，廣泛應(yīng)用于病毒檢測、醫(yī)學(xué)診斷等研究領(lǐng)域[3]。在基因家族的研究中，也可根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)兼并引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，尋找基因家族的新成員[4]。由于遺傳密碼子的兼并性，特定氨基酸對(duì)
- 植物位點(diǎn)特異性甲基化研究的引物設(shè)計(jì)及PCR體系優(yōu)化
異性甲基化研究的引物設(shè)計(jì)及PCR體系優(yōu)化王鶴潼1，2，宋婕3，崔偉娜4，曹霞5，6，何蕾3，賈春云1，惠秀娟1，臺(tái)培東1，成智博1，劉宛1*（1.中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所污染生態(tài)與環(huán)境工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，沈陽 110016；2.遼寧何氏醫(yī)學(xué)院，沈陽110163；3.遼寧大學(xué)，沈陽 110036；4.上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院，上海 201418；5.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)，沈陽 110866；6.通遼市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院蔬菜所，內(nèi)蒙古通遼 028000）通過設(shè)計(jì)大量引物，探索在植
- miRNA qPCR檢測方法研究進(jìn)展及其應(yīng)用
定量檢測流程包括引物設(shè)計(jì)、反應(yīng)體系設(shè)置、內(nèi)參基因篩選等方面進(jìn)行了深入探討，并對(duì)miRNA定量檢測研究方法的發(fā)展趨勢進(jìn)行了展望，以期為研究者進(jìn)行miRNA qPCR定量檢測提供參考。miRNA；stem-loop RT-PCR；poly（A）加尾法RT-PCR；延伸法RT-PCR；數(shù)字PCRmiRNA是真核生物體內(nèi)普遍存在的一類非編碼序列長度約22個(gè)堿基的單鏈小RNA分子，由特定發(fā)卡結(jié)構(gòu)（Stem-loop）的前體剪切加工而成。成熟的miRNA與相關(guān)蛋白組成
生物技術(shù)通報(bào) 2016年2期2016-10-13
- 應(yīng)用通用熒光引物篩選裸鼴鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)方法的建立
3）應(yīng)用通用熒光引物篩選裸鼴鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)方法的建立林麗芳1， 李 莉2， 肖 邦1， 程繼帥1， 楊文靜1， 叢 薇1， 趙善民1， 湯 球1， 崔淑芳1 （1. 第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心， 上海 200433； 2. 第二軍醫(yī)大學(xué)教學(xué)保障處， 上海 200433）目的 建立使用通用熒光引物分步PCR法篩選裸鼴鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)的方法。方法 在特異性引物F鏈的5’端連接通用引物，先以特異引物R鏈和加長引物F鏈進(jìn)行PCR，再加入通用熒光引物進(jìn)行第二步PCR，最后使
- 哪些物質(zhì)合成需要引物
DNA合成需要引物原核和真核生物的DNA聚合酶都具有校正功能，必須核實(shí)前一個(gè)脫氧核苷酸正確后才會(huì)催化下一個(gè)脫氧核苷酸的加入。DNA聚合酶不能從無到有催化合成DNA。必須要有引物提供3′-OH[1]。1.1 線性DNA的合成 以真核生物染色體DNA為代表，復(fù)制時(shí)需要RNA引物。引物從幾個(gè)到十幾個(gè)核糖核苷酸不等，由引物合成酶催化合成。復(fù)制的特點(diǎn)是半保留復(fù)制，多起點(diǎn)雙向復(fù)制，在復(fù)制起點(diǎn)處解旋，邊解旋邊復(fù)制。由于DNA聚合酶只能催化從5′→3′合成，提供3′端的
生物學(xué)教學(xué) 2016年4期2016-08-15
- TP-M13自動(dòng)熒光法的改進(jìn)及在美國山核桃品種鑒定上的應(yīng)用
現(xiàn)原有直接使用三引物方法擴(kuò)增的有效性和可靠性較低，而經(jīng)過改進(jìn)的間接三引物法則有較大的實(shí)用價(jià)值，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究后認(rèn)為混合三引物法在適當(dāng)控制混合引物的對(duì)數(shù)和提高特異性后，在提高間接三引物法的擴(kuò)增效率方面是可行的。自動(dòng)熒光檢測；TP-M13；美國山核桃；SSR簡單序列重復(fù)（Simple sequence repeat，縮寫為SSR），又稱微衛(wèi)星（microsatellite），是以1 ~ 6個(gè)堿基為基本單元的串聯(lián)重復(fù)核酸序列，普遍存在和隨機(jī)分布于所有已知真
浙江林業(yè)科技 2015年5期2015-12-30
- 蘋果牛眼果腐病菌3個(gè)致病種LAMP檢測方法的建立
病種LAMP通用引物設(shè)計(jì)LAMP 引物設(shè)計(jì)主要針對(duì)靶基因的6 個(gè)不同區(qū)域，即基于靶基因3'端的F3c、F2c 和Flc 區(qū)及5'端的Bl、B2和B3區(qū)等6個(gè)不同位點(diǎn)設(shè)計(jì)4種引物。本研究根據(jù)明孢盤菌屬特異性β-tublin基因和真菌通用引物ITS序列作為靶序列進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。1.3 最佳引物篩選1.3.1 LAMP 反應(yīng)體系的配制 1 次反應(yīng)量反應(yīng)體系包括：2×反應(yīng)緩沖液12.5 μL，引物FIP 1.0 μL（40 pmol）、BIP 1.0 μL（40 p
生物技術(shù)通訊 2015年6期2015-11-29
- 甲型H1N1流感病毒FAST-LAMP檢測方法的建立
HA基因設(shè)計(jì)一組引物，包括外引物、內(nèi)引物、環(huán)引物及套內(nèi)引物，套內(nèi)引物的加入增加了引物與模板的接觸位點(diǎn)，提高擴(kuò)增效率，縮短檢測時(shí)間。結(jié)果顯示，F(xiàn)AST-LAMP檢測法比普通LAMP檢測法時(shí)間縮短45 min左右，比加入環(huán)引物的LAMP檢測方法縮短20 min，大大縮短了反應(yīng)的檢測時(shí)間。檢測靈敏度可達(dá)到1×102拷貝。FAST-LAMP是一種高效、更快的檢測方法。FAST-LAMP；甲型H1N1流感病毒；檢測環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（Loop-mediated is
生物技術(shù)通報(bào) 2015年5期2015-10-24
- 應(yīng)用微衛(wèi)星PCR技術(shù)鑒別中國林蛙
多態(tài)信息容量高、引物通用性好、突變率高、共顯性等特點(diǎn)[3-4]。本文采用微衛(wèi)星鑒別技術(shù)，對(duì)長白山、黑龍江伊春、遼寧撫順、吉林四海林場4個(gè)地區(qū)的林蛙開展了鑒別研究。1 材料1.1 儀器 1110型PCR儀(美國Bio-Rad公司);TGL型臺(tái)式高速離心機(jī)(湖南星科科學(xué)儀器有限公司)；Dolphin-Doc凝膠成像分析儀(美國wealtec公司);JY-SP10水平電泳槽(杭州匯爾儀器公司)；電泳儀(美國Bio-Rad公司)；微型離心機(jī)(北京六一儀器有限公司)
吉林中醫(yī)藥 2014年10期2014-08-09
- 對(duì)蝦傳染性皮下和造血器官壞死病毒檢測及各基因型分析
831R/F兩對(duì)引物，前者只與感染型IHHNV毒株（Ⅰ型和Ⅱ型）結(jié)合，后者與非感染型IHHNV病毒株結(jié)合。為了更好地了解目前IHHNV的各種基因型，本研究根據(jù)IHHNV不同基因型的特異性引物，對(duì)一例進(jìn)境南美白對(duì)蝦親蝦進(jìn)行IHHNV病毒分型檢測，并對(duì)IHHNV各基因型序列進(jìn)行同源性比對(duì)，為IHHNV各基因型序列分析提供更多的數(shù)據(jù)。2 材料與方法2.1 材料2.1.1 試驗(yàn)材料湛江地區(qū)某對(duì)蝦養(yǎng)殖場隨機(jī)采取進(jìn)境南美白對(duì)蝦親蝦3尾。2.1.2 試劑rTaq 反應(yīng)酶
質(zhì)量安全與檢驗(yàn)檢測 2014年3期2014-05-28
- 一種新的引物二聚體形成機(jī)制＊
NA小溝上，導(dǎo)致引物二聚體和非目的DNA的擴(kuò)增使結(jié)果的判斷更加困難，尤其是對(duì)低濃度的樣本進(jìn)行精確定量時(shí)，很難分辨是否為非特異性擴(kuò)增引起的假陽性結(jié)果，因此限制了該技術(shù)的應(yīng)用［5］。本研究通過SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)無模板引物對(duì)測試結(jié)果分析，闡明一種新的引物二聚體形成的機(jī)制，探討SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR的優(yōu)化方案并測試定量檢測乙肝病毒的效果。1 材料與方法1．1 試劑和儀器6mmol／L dNTPs（U 替換 T），5U／μL
- 適用于野生軟棗獼猴桃遺傳多樣性分析的SSR引物篩選
開發(fā)了大量SSR引物，但適用于野生軟棗獼猴桃居群遺傳多樣性評(píng)價(jià)的SSR引物還較缺乏，在我們前期篩選的軟棗獼猴桃引物基礎(chǔ)上[7]，本研究進(jìn)一步優(yōu)化擴(kuò)增條件，篩選出了多態(tài)性較好適合軟棗野生居群分析的SSR引物，為該物種大格局遺傳多樣性研究提供了有效的分子工具.1 材料與方法1.1 材料和儀器從來自陜西眉縣、戶縣、吉林露水河、天全縣二郎山、陜西安康等5個(gè)軟棗獼猴桃(Actinidiaarguta)野生居群中隨機(jī)選擇8份樣本作為擴(kuò)增篩選的樣品.引物篩選完成后，從天
- 基于松屬不同樹種EST序列的馬尾松SSR引物開發(fā)
列的馬尾松SSR引物開發(fā)王曉鋒1,2， 季孔庶1， 何衛(wèi)龍1(1.南京林業(yè)大學(xué)， 江蘇 南京 210037； 2.湖南省林業(yè)科學(xué)院， 湖南 長沙 410004)利用松屬5個(gè)樹種的EST序列，分別樹種查找SSR位點(diǎn)，采用Primer3.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。設(shè)計(jì)的5個(gè)樹種的EST-SSR引物中：所占比例最高的均為三核苷酸重復(fù)，其次是六核苷酸重復(fù)，兩者之和都達(dá)到了64%以上；四核苷酸重復(fù)所占比例均為最低。從設(shè)計(jì)的引物中分別不同樹種各選取20對(duì)進(jìn)行引物合成和通用性
湖南林業(yè)科技 2013年1期2013-11-18
- 不同溶解液對(duì)CYP1B1432密碼子PCR引物穩(wěn)定性的影響
斯154003)引物是所有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase chain reaetion，PCR)中必須使用的主要材料之一，引物的穩(wěn)定性對(duì)PCR的結(jié)果有著重要影響，可以說是決定PCR成敗的關(guān)鍵因素，而不同的引物溶解溶液對(duì)引物的穩(wěn)定性有著重要影響，我們?cè)谶M(jìn)行CYP1B1432密碼子(rs1056836)的PCR中就遇到了該問題。對(duì)于引物的穩(wěn)定性，多數(shù)文獻(xiàn)[1，2]從引物長度，解鏈溫度(Tm)引物序列，引物二聚體及引物自由能等方面考慮，而沒有見到關(guān)于引物溶
黑龍江醫(yī)藥科學(xué) 2013年6期2013-10-09
- ScYLV和SrMV的PCR引物優(yōu)化設(shè)計(jì)
行均離不開PCR引物的合理設(shè)計(jì)?？梢哉f，PCR引物的合理設(shè)計(jì)是任何PCR反應(yīng)能否進(jìn)行及其產(chǎn)物的特異性、產(chǎn)率高低的關(guān)鍵。目前許多計(jì)算機(jī)軟件如Primer Premier 3.0，Primer Premier 5.0，Oligo 6.0等均可用于引物的設(shè)計(jì)。但由于軟件自身存在的局限性，其設(shè)計(jì)的引物并無法滿足實(shí)驗(yàn)者不同需要。目前最常用的是計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)，即實(shí)驗(yàn)者根據(jù)PCR引物設(shè)計(jì)的原則并結(jié)合自己的經(jīng)驗(yàn)人工設(shè)計(jì)引物，然后選擇合適的軟件分析引物的合理性。1 材料和方
中國糖料 2012年1期2012-09-10
- 玉米SSR引物和甘蔗EST－SSR引物在芒屬中的通用性研究
篩選來開發(fā)SSR引物的成本高昂，并且因?yàn)橥ㄟ^公共數(shù)據(jù)庫搜索來獲得適用序列來開發(fā)芒屬SSR引物的機(jī)會(huì)也小，因此根據(jù)SSR側(cè)翼區(qū)序列保守性的特點(diǎn)，從現(xiàn)有近緣種的SSR引物中篩選獲取可用于芒屬植物擴(kuò)增的SSR引物是一個(gè)現(xiàn)實(shí)選擇［10］。Hernández等［10］考察了76對(duì)玉米（Zea mays）SSR引物在2份芒屬雜交種中的擴(kuò)增情況，并接著使用了11份材料開展多樣性研究，結(jié)果表明玉米的微衛(wèi)星引物在芒屬中的通用性很高。鐘智林等［13］比較了30對(duì)玉米SSR引物
草業(yè)學(xué)報(bào) 2012年5期2012-08-20
- 金黃色葡萄球菌rep-PCR指紋圖譜分型技術(shù)反應(yīng)條件的優(yōu)化
PCR即重復(fù)序列引物聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)是根據(jù)基因組中的重復(fù)序列設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增重復(fù)序列間的片段，通過電泳產(chǎn)生的特異性指紋圖譜鑒別細(xì)菌基因組間的差異[2]。主要的重復(fù)片段主要分為基因外回文序列(rep)和腸桿菌科基因間重復(fù)序列(ERIC)兩種。這種新方法相對(duì)于“金標(biāo)準(zhǔn)”的脈沖場電泳，操作簡單易行，在實(shí)驗(yàn)室可廣泛應(yīng)用。但其結(jié)果的重復(fù)性和指紋圖譜的清晰程度與實(shí)驗(yàn)條件密切相關(guān)。本研究針對(duì)兩種不同的實(shí)驗(yàn)引物，以及引物濃度和退火溫度進(jìn)行優(yōu)化，以期得到最佳的指紋圖譜。1 材
大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2012年3期2012-01-17
- 流動(dòng)引物PCR高效篩選陽性XRCC1基因敲除小鼠細(xì)胞的方法
行快速篩選，一個(gè)引物位于篩選標(biāo)記中，一個(gè)引物位于同源臂外面，根據(jù)有無PCR產(chǎn)物鑒定陽性基因敲除細(xì)胞，這種篩選方法的缺點(diǎn)是沒有陽性對(duì)照，從而導(dǎo)致篩選效率低下。本研究將野生型基因敲除位點(diǎn)內(nèi)的20 bp DNA序列人工合成，加到基因敲除質(zhì)粒嘌呤霉素抗性基因5’端，并設(shè)計(jì)與之配對(duì)的流動(dòng)引物。流動(dòng)引物為PCR下游引物，利用來自同源臂外DNA序列設(shè)計(jì)PCR上游引物，使用這對(duì)引物PCR擴(kuò)增，野生型和基因敲除陽性細(xì)胞克隆都能夠得到PCR產(chǎn)物。正常雙倍體細(xì)胞只有一個(gè)PCR產(chǎn)
大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2012年2期2012-01-17
- 通用引物多重PCR技術(shù)檢測3種病原微生物
00083)通用引物多重PCR技術(shù)檢測3種病原微生物商 穎1，許文濤1,2，元延芳2，梁志宏2，石 慧1，翟志芳1，張雅楠2，羅云波1,2，黃昆侖1,2,*(1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院，北京 100083；2.農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物食用安全監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心(北京)，北京 100083)為尋找快速且準(zhǔn)確的病原微生物檢測方法，在普通多重PCR(polymerase chain reaction)技術(shù)的基礎(chǔ)上研究一種新的通用引物多重PCR(universa
食品科學(xué) 2011年10期2011-03-31
- 優(yōu)化多重PCR擴(kuò)增效果的實(shí)驗(yàn)研究
應(yīng)體系中使用多對(duì)引物，針對(duì)多個(gè)DNA模板或同一模板的不同區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增的過程，滿足同時(shí)分析不同DNA序列的需要，尤其是在臨床檢測和科學(xué)研究時(shí)，在一個(gè)反應(yīng)體系中能夠同時(shí)檢測多種目的DNA，這不僅能節(jié)省珍貴的實(shí)驗(yàn)樣品，而且能使以往繁瑣的操作變得省時(shí)省力，具有高效快捷、高度特異敏感、實(shí)驗(yàn)成本低等優(yōu)點(diǎn)，具有普通PCR方法不可比擬的優(yōu)越性。本研究采用Y染色體10對(duì)引物探討了基因組DNA的多重PCR反應(yīng)體系中各種因素對(duì)擴(kuò)增結(jié)果的影響，優(yōu)化了反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，以期為應(yīng)用
河北醫(yī)藥 2011年11期2011-03-06
- 應(yīng)用隨機(jī)PCR技術(shù)檢測未知病毒基因序列的研究進(jìn)展
66000)隨機(jī)引物PCR技術(shù)(random amplified polymorphic DNA,RAPD;arbitrarily primed PCR,APPCR)是由Welsh、Williams于1990年幾乎同時(shí)建立起來的一項(xiàng)DNA多態(tài)檢測技術(shù) 。該技術(shù)以PCR為基礎(chǔ),利用一系列單一的人工合成的隨機(jī)寡核苷酸鏈為引物,對(duì)所研究的基因組 DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。在該技術(shù)問世的短短幾年內(nèi),因其獨(dú)特的檢測DNA多態(tài)性的方式以及簡便快速等特點(diǎn)而迅速滲透到分子生物
中國獸醫(yī)雜志 2010年5期2010-02-13