黃芩MYB轉(zhuǎn)錄因子家族全基因組鑒定與分析

王曉童 向 麗 鄔 蘭 高冉冉

(1 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所/青蒿素中心，北京，100700； 2 東北林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，哈爾濱，150040)

黃芩(Scutellariae Radix)是我國(guó)傳統(tǒng)中藥，具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效，其基原植物為唇形科(Lamiaceae)植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)[1]。研究表明黃芩地上和地下部分積累不同的黃酮類活性成分，地上主要積累野黃芩苷、野黃芩素、芹菜素、木樨草素等，地下主要積累黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等4′-脫氧類黃酮[2]。黃芩及其黃酮類活性成分均具有良好的臨床藥用價(jià)值，在新型冠狀病毒肺炎的治療中，黃芩作為傳統(tǒng)中藥發(fā)揮重要作用，是《新型冠狀病毒診療方案》中“清肺排毒湯”“宣肺潤(rùn)燥解毒方”的成分之一[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芩提取物可以體外抑制新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)中的蛋白酶3CLpro活性和SARS-CoV-2在Vero細(xì)胞中的復(fù)制[4]。此外，黃芩素及黃芩苷等成分被報(bào)道具有改善飲食引起的肥胖和肝脂肪變性、抗菌等活性。因此，揭示黃芩中調(diào)控黃酮類活性成分生物合成的轉(zhuǎn)錄因子及其調(diào)控機(jī)制，對(duì)于培育高黃酮含量的黃芩種質(zhì)、黃芩相關(guān)藥物研發(fā)等具有重要價(jià)值。

MYB轉(zhuǎn)錄因子(v-Myb禽成髓細(xì)胞病病毒癌基因同源物)是植物界中數(shù)量最多的轉(zhuǎn)錄因子家族之一，其在N端含有一段能夠與DNA結(jié)合的高度保守的基序，該基序通常由1～4個(gè)不完整的重復(fù)片段組成，每個(gè)重復(fù)片段50～53個(gè)氨基酸，組成3個(gè)α-螺旋并形成螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋(Helix-turn-helix，HTH)結(jié)構(gòu)，MYB轉(zhuǎn)錄因子通過HTH結(jié)構(gòu)插入到靶DNA的大溝中進(jìn)行結(jié)合，從而調(diào)控靶基因的表達(dá)。依據(jù)重復(fù)序列的數(shù)量和種類，MYB可分為4個(gè)亞族：1R-MYB、2R-MYB(R2R3-MYB)、3R-MYB和4R-MYB，R2R3-MYB是數(shù)量最多、功能也最為廣泛的亞族[5-7]。

MYB轉(zhuǎn)錄因子是目前研究較多的轉(zhuǎn)錄因子家族，廣泛參與調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育、抗逆脅迫、次級(jí)代謝產(chǎn)物的積累。已報(bào)道研究中，MYB參與調(diào)控植物黃酮類成分合成的報(bào)道居多，如蘋果(Malusdomestica)MdMYB9和MdMYB11都能與花青素合成酶(Anthocyanin Synthetase，ANS)、花青素還原酶(Anthocyanidin Reductase，ANR)和無色花青素還原酶(Leucoanthocyanidin Reductase，LAR)的啟動(dòng)子結(jié)合，調(diào)控花青素和原花青素的積累[8]；蒺藜苜蓿(Medicagotruncatula)中的MYB轉(zhuǎn)錄因子MtLAP1可以結(jié)合MtGSTF7啟動(dòng)子區(qū)來激活其表達(dá)，從而調(diào)控蒺藜苜蓿中花青素的積累[9]；擬南芥(Arabidopsisthaliana)、龍膽(Gentianatriflora)中的MYB轉(zhuǎn)錄因子也可以調(diào)控黃酮類成分的積累[10-12]。

迄今為止，黃芩活性成分合成的調(diào)控機(jī)制鮮有報(bào)道。目前報(bào)道的黃芩中參與黃酮類化合物合成的SbMYB只有3個(gè)[13-14]。隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展，黃芩的全基因組測(cè)序已經(jīng)完成[15-16]，黃芩中黃酮類活性成分的生物合成途徑及關(guān)鍵酶已基本解析[17-19]，基于全基因組的SbMYB轉(zhuǎn)錄因子家族的系統(tǒng)分析和研究提上日程。本研究首次基于黃芩的全基因組對(duì)其中MYB轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行系統(tǒng)鑒定和分析，預(yù)測(cè)可能參與黃酮類化合物生物合成相關(guān)的調(diào)控基因，為深入研究黃芩中黃酮類成分合成的調(diào)控機(jī)制提供支撐。

1 材料與方法

1.1 基因家族的鑒定 黃芩基因組在the Genome Warehouse(https://bigd.big.ac.cn/gwh)下載(登錄號(hào)：GWHAOTO00000000)。采用以下2種方法進(jìn)行SbMYB轉(zhuǎn)錄因子家族成員的鑒定：1)從PFAM數(shù)據(jù)庫(kù)(http://pfam.xfam.org/)下載MYB轉(zhuǎn)錄因子特有的保守結(jié)構(gòu)域模型(PF00249)，使用HMMER軟件在黃芩基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行搜索，E-value設(shè)為e-5；2)從植物轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫(kù)(http://planttfdb.gao-lab.org/index.php)下載168條擬南芥AtMYB蛋白序列，通過本地BLAST，與黃芩基因組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行同源比對(duì)。將二者的比對(duì)結(jié)果整合，使用NCBI-CDD(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/bwrpsb/bwrpsb.cgi)和PFAM蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)。通過PROSITE(http://www.expasy.org/prosite/)針對(duì)篩選出的SbMYB轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行蛋白質(zhì)理化性質(zhì)預(yù)測(cè)。通過WoLF PSORT(https://wolfpsort.hgc.jp/)對(duì)SbMYB進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析。

1.2 基因家族分類與系統(tǒng)發(fā)育樹 為研究黃芩MYB轉(zhuǎn)錄因子的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系并確定其亞族分類，以模式物種擬南芥為參考，利用最大似然法對(duì)168條AtMYB和146條SbMYB蛋白的全長(zhǎng)序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。序列與MAFFT進(jìn)行比對(duì)，比對(duì)結(jié)果使用IQ-TREE2.0.3構(gòu)建最大似然法系統(tǒng)發(fā)育樹，MFP參數(shù)選擇最優(yōu)模型，BOOTSTRAP設(shè)為1 000次。系統(tǒng)發(fā)育樹在ITOL在線網(wǎng)站(https://itol.embl.de/)進(jìn)行編輯。根據(jù)黃芩與擬南芥MYB轉(zhuǎn)錄因子的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，對(duì)黃芩SbMYB基因家族成員進(jìn)行亞族分類。

1.3 基因結(jié)構(gòu)與染色體分布分析 從黃芩基因組注釋文件中提取146個(gè)SbMYB基因的注釋信息，將其提交到GSDS2.0(http://gsds.gao-lab.org/index.php)網(wǎng)站進(jìn)行基因結(jié)構(gòu)分析，確定基因的內(nèi)含子數(shù)量，并繪制內(nèi)含子和外顯子模式圖。從SbMYB基因注釋文件中獲取基因位置信息，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)整理，使用Tbtools進(jìn)行可視化分析。

1.4 保守結(jié)構(gòu)域與基序分析 采用基序誘導(dǎo)多個(gè)最大期望值(Multiple Expectation Maximization for Motif Elicitation，MEME)在線軟件(http://meme-suite.org/)對(duì)SbMYB的保守基序進(jìn)行分析。參數(shù)設(shè)置為：同一基序在一條序列中出現(xiàn)的次數(shù)為“any”，基序長(zhǎng)度范圍6～100個(gè)氨基酸殘基，基序最大發(fā)現(xiàn)數(shù)目15個(gè)，其他參數(shù)為默認(rèn)值。將以上結(jié)果與PFAM數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的保守結(jié)構(gòu)域信息一同提交到ITOL網(wǎng)站進(jìn)行可視化分析。

1.5 基因表達(dá)模式分析 根據(jù)黃芩SbMYB轉(zhuǎn)錄因子在根、莖、葉和花4個(gè)不同組織中編碼基因的表達(dá)量FPKM值，繪制SbMYB轉(zhuǎn)錄因子在不同組織部位的表達(dá)量熱圖。黃芩中黃酮合成途徑結(jié)構(gòu)基因已經(jīng)被注釋[17]，篩選15個(gè)已驗(yàn)證有功能或表達(dá)量高的黃酮類化合物合成相關(guān)基因(SbPAL3、SbC4H1、SbCLL-1、SbCLL-5、Sb4CLL7-1、Sb4CLL8、Sb4CLL10、SbCHS1、SbCHI、SbFNSII1、SbFNSII2、SbF6H1、SbF8H、SbF6H2、SbUBGAT)，根據(jù)已有的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，提取這15個(gè)基因在根、莖、葉和花中的表達(dá)量，與SbMYB轉(zhuǎn)錄因子繪制表達(dá)量熱圖。所有熱圖均在在線網(wǎng)站(https://www.omicstudio.cn/tool)繪制，F(xiàn)PKM值進(jìn)行“+1”預(yù)處理后，取log2值，并對(duì)基因進(jìn)行聚類分析。

1.6 基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 為了進(jìn)一步研究SbMYB轉(zhuǎn)錄因子與黃酮類化合物合成相關(guān)結(jié)構(gòu)基因間調(diào)控關(guān)系，本研究將所有SbMYB和高表達(dá)的黃酮類化合物合成相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因蛋白序列提交String(https://www.string-db.org/)進(jìn)行蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(Protein-protein Interaction，PPI)預(yù)測(cè)，預(yù)測(cè)結(jié)果使用Cytoscape 3.8.0構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖。篩選FPKM值大于5的SbMYB轉(zhuǎn)錄因子，使用Omicstudio平臺(tái)的Cor工具計(jì)算SbMYB轉(zhuǎn)錄因子與黃酮類化合物合成相關(guān)結(jié)構(gòu)基因間的相關(guān)性，構(gòu)建無向量網(wǎng)絡(luò)圖。相關(guān)性系數(shù)絕對(duì)值大于0.8，皮爾遜相關(guān)系數(shù)(p-value)小于0.05。

2 結(jié)果

2.1 黃芩MYB轉(zhuǎn)錄因子家族的篩選與鑒定 本研究共鑒定得到146條SbMYB蛋白序列。蛋白質(zhì)理化性質(zhì)和亞細(xì)胞定位分析表明，各成員的氨基酸序列長(zhǎng)度在87 aa(SbMYB106)～957 aa(SbMYB105)之間，平均分子質(zhì)量在9 884.46(SbMYB109)～107 846.15(SbMYB105)之間。蛋白質(zhì)等電點(diǎn)大于(堿性蛋白質(zhì))和小于(酸性蛋白質(zhì))7的成員數(shù)量分別為90和56個(gè)，說明大多數(shù)為堿性蛋白質(zhì)。脂肪系數(shù)均小于100，親水系數(shù)均為負(fù)值，不穩(wěn)定系數(shù)小于40的蛋白序列僅5個(gè)(SbMYB55、SbMYB81、SbMYB109、SbMYB117、SbMYB137)，表明SbMYB蛋白多為親水性不穩(wěn)定蛋白。WoLF PSORT預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，144個(gè)SbMYB定位在細(xì)胞核中，SbMYB143、SbMYB120分別定位在線粒體和葉綠體中。見表1。

表1 黃芩MYB轉(zhuǎn)錄因子家族信息

續(xù)表1 黃芩MYB轉(zhuǎn)錄因子家族信息

續(xù)表1 黃芩MYB轉(zhuǎn)錄因子家族信息

續(xù)表1 黃芩MYB轉(zhuǎn)錄因子家族信息

2.2 黃芩MYB轉(zhuǎn)錄因子家族的系統(tǒng)進(jìn)化分析 最大似然法構(gòu)建擬南芥和黃芩MYB蛋白全長(zhǎng)序列系統(tǒng)發(fā)育樹，自動(dòng)選擇最佳模型為VT+R6，進(jìn)化樹分枝上的圓圈代表支持率(%)，圓圈越大，相應(yīng)的支持率也增大。結(jié)果顯示，根據(jù)與擬南芥的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，黃芩146個(gè)SbMYB轉(zhuǎn)錄因子可以劃分為4個(gè)亞族(1R-MYB，R2R3-MYB，3R-MYB，4R-MYB)和一個(gè)未分族成員(SbMYB117)。其中，R2R3-MYB亞族成員數(shù)量最多，有116個(gè)，占總SbMYB轉(zhuǎn)錄因子的79.45%；1R-MYB有26個(gè)，占總SbMYB的17.81%，是黃芩SbMYB家族中的第二大亞族；3R-MYB、4R-MYB亞族成員數(shù)量較少，分別有2個(gè)和1個(gè)。見圖1。

圖1 黃芩和擬南芥MYB轉(zhuǎn)錄因子家族系統(tǒng)進(jìn)化樹

2.3 黃芩MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)分析及其染色體定位 根據(jù)基因組注釋信息，繪制了SbMYB轉(zhuǎn)錄因子的外顯子和內(nèi)含子模式圖。SbMYB外顯子數(shù)目2～19個(gè)，表明不同的SbMYB成員在基因結(jié)構(gòu)上存在多樣性和顯著差異。同一SbMYB亞族內(nèi)的外顯子數(shù)量較為保守，R2R3-MYB亞族成員大都含有2～3個(gè)外顯子，外顯子長(zhǎng)度和位置也較為相近；1R-MYB、3R-MYB、4R-MYB亞族成員的外顯子數(shù)目明顯多于R2R3-MYB，大部分含有4～6個(gè)外顯子。不同亞族之間外顯子的位置和長(zhǎng)度存在差異。見圖2A。

圖2 SbMYB的基因結(jié)構(gòu)(A)與染色體分布(B)

依據(jù)從黃芩基因組注釋文件中獲取的SbMYB位置信息，繪制SbMYB染色體定位圖。145個(gè)SbMYB轉(zhuǎn)錄因子隨機(jī)不均勻分布在9條染色體上(chr1～chr9)，其中大多數(shù)SbMYB定位在chr1和chr2上(36個(gè)和27個(gè))，chr6(8個(gè))、chr7(7個(gè))和chr9(7個(gè))上分布較少，SbMYB106未定位到染色體上，而定位在未掛載到染色體的contig上，這與基因組的染色體組裝有關(guān)。見圖2B。

2.4 黃芩MYB轉(zhuǎn)錄因子保守結(jié)構(gòu)域與基序分析 本研究對(duì)SbMYB進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)域分析，共預(yù)測(cè)到4個(gè)MYB轉(zhuǎn)錄因子保守結(jié)構(gòu)域，命名為MYB Domian1-4。所有的SbMYB至少含有1個(gè)MYB保守結(jié)構(gòu)域。1R-MYB大都僅含1個(gè)MYB Domian1，部分成員還含有MYB Domian3，且MYB Domian3僅在1R-MYB中存在。R2R3-MYB中，最保守的結(jié)構(gòu)域組成含有2個(gè)MYB Domian1，很少部分成員僅含有1個(gè)MYB Domian2。3R-MYB均含有3個(gè)MYB Domian，但組成不同，SbMYB2含有1個(gè)MYB Domian2。見圖3A。

同一基因家族的成員，其基序組成通常較為保守，且進(jìn)化關(guān)系較近的成員間具有相似的基序組成。我們?cè)赟bMYB轉(zhuǎn)錄因子中共預(yù)測(cè)到15個(gè)保守基序(Motif)，命名為Motif1-15。不同亞族之間SbMYB基序組成存在差異，同一亞族SbMYB成員具有相似數(shù)目和類型的基序組成。1R-MYB亞族的保守基序?yàn)镸otif7，它可能與Motif5或Motif13共同組成MYB Domian3；R2R3-MYB亞族中，Motif1、Motif2、Motif3和Motif4是其最保守的基序，依照其在基因位置上與MYB結(jié)構(gòu)域的對(duì)應(yīng)關(guān)系，Motif1-4可能是MYB Domian1的代表基序；3R-MYB亞族的保守基序?yàn)镸otif1、Motif2、Motif3和Motif11；4R-MYB亞族僅預(yù)測(cè)到Motif3。見圖3B。

圖3 黃芩MYB基因保守結(jié)構(gòu)域(A)與基序(B)分析

2.5 黃芩MYB轉(zhuǎn)錄因子的基因表達(dá)模式分析 基于黃芩根、莖、葉、花的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，進(jìn)一步分析SbMYB在不同器官中的表達(dá)模式，結(jié)果表明，SbMYB在不同器官中具有不同的表達(dá)模式。根、莖、葉中表達(dá)模式相似，與花中的表達(dá)模式差異較大。見圖4A。對(duì)SbMYB與黃酮類化合物合成結(jié)構(gòu)基因之間的表達(dá)模式分析顯示，黃酮類化合物合成相關(guān)基因大都與R2R3-MYB聚類在同一枝，表明R2R3-MYB亞族更可能參與黃酮類化合物的調(diào)控。此外Sb4CLL10、Sb4CLL7-1、SbFNSII1分別與SbMYB120、SbMYB127、SbMYB126聚在同一枝，說明黃酮類化合物合成相關(guān)基因可能也受到1R-MYB的調(diào)控。見圖4B。

圖4 不同組織中的基因表達(dá)分析

2.6 黃芩MYB轉(zhuǎn)錄因子與黃酮類化合物合成相關(guān)結(jié)構(gòu)基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò) 通過在轉(zhuǎn)錄組水平上對(duì)SbMYB與15個(gè)黃酮類化合物合成相關(guān)結(jié)構(gòu)基因間的相關(guān)性進(jìn)行分析，構(gòu)建共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果表明，15個(gè)黃酮類化合物合成相關(guān)基因均與43個(gè)SbMYB存在強(qiáng)相關(guān)性(|r|>0.8)，說明它們之間可能存在調(diào)控關(guān)系。大多數(shù)SbMYB(38個(gè))具有正調(diào)控作用，少部分SbMYB(9個(gè))具有負(fù)調(diào)控作用。根據(jù)節(jié)點(diǎn)大小可以看出，SbCHI可能受SbMYB強(qiáng)調(diào)控作用，且大多為正調(diào)控。見圖5A。PPI網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果表明，有8個(gè)黃酮類化合物合成相關(guān)基因與SbMYB可能存在相互作用關(guān)系；部分SbMYB之間也有潛在的互作關(guān)系(如：SbMYB100和SbMYB117)，說明SbMYB之間可能形成蛋白復(fù)合體共同調(diào)節(jié)下游基因的表達(dá)。見圖5B。

3 討論

藥用植物活性成分是發(fā)揮其藥效的重要基礎(chǔ)，主要來源于萜類、黃酮類、生物堿類等次生代謝產(chǎn)物的生物合成。由于植物次生代謝產(chǎn)物含量少、復(fù)雜多樣、分離困難等因素限制了藥用植物的發(fā)展和應(yīng)用。研究表明，轉(zhuǎn)錄因子是植物代謝合成過程中的重要調(diào)控元件[20]，通過與序列特異性DNA結(jié)合和PPI調(diào)節(jié)特定基因表達(dá)，可以作為基因表達(dá)的激活劑或抑制劑，參與次生代謝物的合成和積累，獲取高價(jià)值次生代謝產(chǎn)物[21-22]。

圖5 SbMYB轉(zhuǎn)錄因子與黃酮類化合物合成相關(guān)基因間的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)

隨著黃芩基因組的公布，黃芩的WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族已被系統(tǒng)鑒定與分析[23]。MYB是植物中家族最龐大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一，以R2R3-MYB亞族數(shù)量最多，R2R3-MYB也是報(bào)道具有最多生物學(xué)功能的亞族[24]。本研究基于黃芩的基因組數(shù)據(jù)，注釋出146個(gè)MYB轉(zhuǎn)錄因子，其中R2R3-MYB亞族有116個(gè)，1R-MYB、3R-MYB、4R-MYB亞族成員分別有26個(gè)、2個(gè)和1個(gè)，這與擬南芥、水稻、葡萄等物種中各亞族MYB的數(shù)量分布情況相似[5-6,25]；保守結(jié)構(gòu)域和基序分析表明，不同亞族間具有不同的結(jié)構(gòu)域和基序組成，這可能與MYB轉(zhuǎn)錄因子功能和調(diào)控作用方式有關(guān)。如：R2R3-MYB和3R-MYB通過R2、R3 MYB結(jié)構(gòu)域特異結(jié)合DNA序列，而1R-MYB一般僅含1個(gè)MYB保守結(jié)構(gòu)域，可能以不同的方式結(jié)合到DNA序列上，如與端粒結(jié)合，在維持染色體穩(wěn)定性中具有重要作用[26-27]。

已有較多研究表明，MYB轉(zhuǎn)錄因子參與調(diào)控植物黃酮類次生代謝產(chǎn)物合成，PpMYB10.1是紅皮桃(Prunus persica)花青素積累的主要調(diào)節(jié)因子，并激活PpUFGT轉(zhuǎn)錄[28]；擬南芥AtMYB12和葡萄(Vitis vinifera)VvMYBF1被鑒定為黃酮醇特異性激活劑，AtMYB12轉(zhuǎn)化至轉(zhuǎn)基因番茄(Solanum lycopersicum)中可以產(chǎn)生大量的黃酮醇[29-31]。黃芩中黃酮類成分的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究仍比較薄弱，Yuan等[13-14]研究人員前期從黃芩cDNA中篩選出19個(gè)SbMYB，并通過轉(zhuǎn)基因煙草實(shí)驗(yàn)證明了SbMYB2、SbMYB7和SbMYB8可影響轉(zhuǎn)基因煙草中黃酮類化合物相關(guān)基因(NtPAL1、NtPAL2、NtC4H和NtUFGT)的轉(zhuǎn)錄水平從而影響黃酮類化合物的積累。目前黃芩中黃芩素、野黃芩素、漢黃芩素及其糖苷類黃酮成分的生物合成途徑及關(guān)鍵酶已經(jīng)解析，本研究通過Cor函數(shù)計(jì)算SbMYB與黃酮類化合物生物合成結(jié)構(gòu)基因間的相關(guān)性，并預(yù)測(cè)它們之間潛在的PPI關(guān)系，構(gòu)建了基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，從而預(yù)測(cè)到SbMYB轉(zhuǎn)錄因子與黃酮類化合物合成通路上結(jié)構(gòu)基因間潛在的調(diào)控關(guān)系?？赡軈⑴c黃酮類化合物生物合成的43個(gè)SbMYB轉(zhuǎn)錄因子中，38個(gè)SbMYB可能參與正調(diào)控，9個(gè)SbMYB可能參與負(fù)調(diào)控。

通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子對(duì)代謝途徑上關(guān)鍵酶活性的調(diào)控作用，從整體角度調(diào)控代謝途徑以獲得高產(chǎn)量目標(biāo)產(chǎn)物具有重要的科學(xué)價(jià)值。然而轉(zhuǎn)錄因子如何調(diào)控植物次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成與積累是一個(gè)復(fù)雜的研究體系，如蘋果(Malusdomestica)中MdMYB308L可以與MdbHLH33相互作用，增強(qiáng)其與MdCBF2和MdDFR啟動(dòng)子結(jié)合，正向調(diào)控蘋果花青素的積累，蘋果的泛素連接酶(MdMIEL1)還可以與MdMYB308L互作，促進(jìn)MdMYB308L降解從而負(fù)調(diào)控花青素積累[32]，因此，揭示其復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)與調(diào)控模式是未來的一項(xiàng)重要任務(wù)。本研究為黃芩中參與黃酮類成分生物合成調(diào)控的MYB轉(zhuǎn)錄因子篩選提供重要參考，在后續(xù)研究中，要結(jié)合先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)，強(qiáng)化對(duì)重要SbMYB轉(zhuǎn)錄因子的機(jī)制解析。