微膠囊飼料替代生物餌料對(duì)大黃魚稚魚消化酶活性的影響

梁 萍

（福建省淡水水產(chǎn)研究所，福建福州 350002）

大黃魚（Pseudosciaena crocea）屬硬骨魚綱、鱸形目、石首魚科、黃魚屬，又名黃花魚，其肉味鮮美，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，受到廣大群眾的喜愛。 近40 年來，由于過度捕撈，造成大黃魚資源逐漸枯竭。 隨著人工育苗獲得成功，大黃魚開始規(guī)?；B(yǎng)殖。飼喂大黃魚魚苗所用的生物餌料比如輪蟲、鹵蟲、橈足類的缺點(diǎn)越發(fā)明顯，如成本過高、成分和產(chǎn)量不穩(wěn)定及容易攜帶病原微生物等， 導(dǎo)致大黃魚魚苗產(chǎn)量和質(zhì)量降低， 無法滿足規(guī)?；缟a(chǎn)的需求，嚴(yán)重制約了大黃魚養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展（于海瑞，2003）。 有些發(fā)達(dá)國家和地區(qū)，如美國、日本和歐洲等先后開展了海水魚仔稚魚營養(yǎng)生理和微粒子飼料的研究，已取得一些效果。人工微粒飼料能減少生物餌料所帶來的高成本、高危險(xiǎn)疾病危害，實(shí)現(xiàn)大黃魚苗種生產(chǎn)規(guī)?；?微膠囊技術(shù)是一種通過特定的方法與設(shè)備將天然或合成高分子成膜材料包覆固體、 液體或氣體等形成微小粒子的技術(shù)（于海瑞，2006），微膠囊飼料可以保護(hù)被包覆的物質(zhì)不受環(huán)境條件的影響，具有屏蔽芯材顏色、氣味，降低生物毒性，改變物質(zhì)性質(zhì)，延長揮發(fā)性物質(zhì)的儲(chǔ)藏時(shí)間，使釋放物質(zhì)持續(xù)進(jìn)入外界，隔離不可混合的化合物等功能（曾祥玲等，2005）。因此研制開發(fā)營養(yǎng)平衡、 高效的優(yōu)質(zhì)人工微粒飼料成為養(yǎng)殖大黃魚產(chǎn)業(yè)鏈中一個(gè)亟待解決的問題。 本試驗(yàn)在小水體飼養(yǎng)條件下研究微膠囊飼料替代部分生物餌料對(duì)大黃魚仔稚魚消化酶活性的影響，以期為海水魚仔稚魚微粒子飼料的研發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚苗 試驗(yàn)用魚為10 日齡的大黃魚稚魚，初始體重（2.62±0.24）mg/尾，取自寧德市富發(fā)水產(chǎn)有限公司，選擇大小均勻，體表無損傷且活力強(qiáng)的魚苗作為試驗(yàn)用魚。

1.2 飼料原料 本試驗(yàn)所用微膠囊飼料由福建省淡水水產(chǎn)研究所水產(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)與飼料研究室研發(fā)并制作。

微膠囊飼料芯材的主要原料：魚粉、魷魚漿、牡蠣、飼料酵母、海藻多糖、復(fù)合維生素、復(fù)合礦物質(zhì)、誘食劑、蛋黃等。壁材的主要原料：辛烯基琥珀酸淀粉鈉（變性淀粉）、明膠。表面活性劑包括司班80 和吐溫。 生物餌料及微膠囊飼料的常規(guī)營養(yǎng)成分見表1。

表1 生物餌料和微膠囊飼料的常規(guī)營養(yǎng)成分（干重）%

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)設(shè)4 個(gè)處理，每個(gè)處理3 個(gè)重復(fù)。 試驗(yàn)組為使用微膠囊飼料替代25%、50%、75%的生物餌料，對(duì)照組為100%生物餌料。 飼養(yǎng)試驗(yàn)于2015 年3 ～4 月進(jìn)行，養(yǎng)殖周期32 d。 采用虹吸的方式將大池內(nèi)的10 日齡大黃魚稚魚隨機(jī)分養(yǎng)在12 個(gè)相同的玻璃鋼圓桶中。 經(jīng)過32 d的小水體養(yǎng)殖試驗(yàn)， 隨機(jī)選取不同替代組的大黃魚稚魚于福建省淡水水產(chǎn)研究所營養(yǎng)試驗(yàn)室進(jìn)行相關(guān)消化酶活性的測(cè)定。

1.4 取樣及樣品分析 試驗(yàn)期間（25 日齡），從各試驗(yàn)處理桶中隨機(jī)取3 份， 每份200 尾稚魚裝入采樣試管內(nèi)；試驗(yàn)結(jié)束（42 日齡）時(shí)，從處理組內(nèi)隨機(jī)取樣200 尾裝入采樣試管內(nèi)。 將樣本放在液氮罐超低溫運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室，取大黃魚稚魚前段、后段，分別進(jìn)行蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性的測(cè)定。

總蛋白酶含量、 胃蛋白酶活力、 胃淀粉酶活力、 胰蛋白酶活力和脂肪酶活力采用試劑盒進(jìn)行測(cè)定， 試劑盒購自南京建成生物工程研究所。 計(jì)算公式如下：

總蛋白濃度＝（測(cè)定OD 值-空白OD 值）/（標(biāo)準(zhǔn)OD 值-空白OD 值）×標(biāo)準(zhǔn)品濃度×樣本稀釋倍數(shù)；

組織中胃蛋白酶活力＝（測(cè)定OD 值-對(duì)照OD值）/（標(biāo)準(zhǔn)OD 值-空白OD 值）×標(biāo)準(zhǔn)品濃/反應(yīng)時(shí)間×反應(yīng)液總體積/取樣量/待測(cè)樣本蛋白濃度；

淀粉酶活力＝（空白OD 值-測(cè)定OD 值）/空白OD 值×0.4×0.5/10×30 min/7.5 min/（取樣量×待測(cè)樣本蛋白濃度）；

胰蛋白酶活性＝[測(cè)定 （A2-A1）-空白 （A2-A1）]/（20 min×0.003）×反應(yīng)總體積/樣本取樣量/（樣本中蛋白濃度×樣本取樣量）；

脂肪酶活力＝（A1-A2）/AS×標(biāo)準(zhǔn)管的濃度×反應(yīng)液總體積/取樣量/反應(yīng)時(shí)間/待測(cè)樣本蛋白濃度。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 13.0 軟件對(duì)所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析， 若各處理組之間差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05），則進(jìn)行Turkey 多重比較。試驗(yàn)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 25 日齡大黃魚稚魚消化酶活性 由表2 可知，在25 日齡時(shí)，大黃魚稚魚前段胃蛋白酶活力在50%替代組最高，每組之間差異均不顯著（P＞0.05），后段與前段情況相同；前段胃淀粉酶活力測(cè)定結(jié)果顯示，0%和25%與75%替代組差異顯著（P＜0.05），其余各組之間差異不顯著，后段胃淀粉酶活力在25%替代組最高，其余各組之間差異不顯著（P＞0.05）；前段胰蛋白酶活力各組之間的差異均不顯著（P＞0.05），后段胰蛋白酶活力呈逐步上升趨勢(shì)，對(duì)照組與50%和75%替代組差異均極顯著（P＜0.01）；大黃魚稚魚的前段脂肪酶活力在25%替代組最高，對(duì)照組與25%替代組差異顯著（P＜0.05），25%替代組與75%替代組差異極顯著（P＜0.01），其余組差異均不顯著（P＞0.05），后段脂肪酶活力隨替代水平的提高逐步降低， 對(duì)照組與50%和75%替代組均差異極顯著 （P＜0.01），25%替代組與50%和75%替代組均差異極顯著（P＜0.01），其余組差異均不顯著（P＞0.05）。

表2 25 日齡、42 日齡大黃魚稚魚消化酶活性

2.2 42 日齡大黃魚稚魚消化酶活性 42 日齡時(shí)，大黃魚稚魚的前段胃蛋白酶活力在50%替代組最高， 對(duì)照組與其他幾組均差異不顯著 （P＞0.05），25%替代組與50%替代組差異顯著 （P＜0.05），其余組差異均不顯著（P＞0.05）。 后段胃蛋白酶活力對(duì)照組最高，50%替代組略有升高，對(duì)照組與其他各組的差異極顯著（P＜0.01），其余各組之間差異不顯著（P＞0.05）；前段胃淀粉酶活力在50%替代組最高， 對(duì)照組與25%替代組差異顯著（P＜0.05），25%替代組與75%替代組差異極顯著（P＜0.01），其余組差異均不顯著（P＞0.05）。 后段胃淀粉酶活力在50%替代組最高，各組之間的差異性均不顯著（P＞0.05）。前段胰蛋白酶活力在50%替代組最高， 對(duì)照組與50%替代組差異極顯著（P＜0.01），對(duì)照組與75%替代組差異顯著（P＜0.05），25%替代組與50%替代組差異顯著 （P＜0.05），其余組差異都不顯著（P＞0.05）；后段胰蛋白酶活力隨著微囊料替代水平的升高有上升的趨勢(shì)，對(duì)照組分別與50%和75%替代組差異顯著（P＜0.05），25%替代組與75%替代組差異顯著（P＜0.05），其余組差異均不顯著（P＞0.05）；前段脂肪酶活力在50%替代組之前先升高后下降，對(duì)照組與50%替代組差異顯著（P＜0.05），其余均不顯著（P＞0.05）。后段脂肪酶活力隨著微膠囊飼料替代比例的增加呈現(xiàn)先升高后下降趨勢(shì)，50%替代組與75%替代組差異性顯著（P＜0.05），其余各個(gè)替代組差異均不顯著（P＞0.05）。

3 討論

仔稚魚發(fā)育階段消化酶活性的變化主要由兩個(gè)原因造成：（1）餌料組成成分的影響；（2）不同消化器官生長和發(fā)育的影響。常青等（2005）報(bào)道，半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevi）在仔魚發(fā)育早期即可檢出酸性蛋白酶和堿性蛋白酶的活性， 堿性蛋白酶的2 個(gè)極低值分別出現(xiàn)在仔魚開口期和仔稚魚的轉(zhuǎn)變期， 從孵化后23 d 左右胃腺出現(xiàn)時(shí)，酸性蛋白酶的活性開始明顯升高。 飼料營養(yǎng)成分對(duì)養(yǎng)成階段魚類的消化酶活性影響很大， 林建斌等（2008）研究表明，采用9 種不同能量蛋白質(zhì)比的飼料投喂點(diǎn)帶石斑魚（Epinephlus Coioide）幼魚，分析比較不同營養(yǎng)水平的飼料對(duì)點(diǎn)帶石斑魚體內(nèi)消化酶活性的影響， 隨著飼料中能量蛋白質(zhì)比的增加， 點(diǎn)帶石斑魚胃腸道脂肪酶活性呈現(xiàn)出增強(qiáng)的趨勢(shì)，在飼料中同一淀粉含量下，不同能量蛋白質(zhì)比的變化， 未引起胃腸道淀粉酶活性呈現(xiàn)規(guī)律性變化。隨著飼料中蛋白質(zhì)含量的提高，胃腸道蛋白酶活性也隨著增強(qiáng)。

本試驗(yàn)中，25 日齡大黃魚稚魚， 從0%替代組（對(duì)照組）到75%替代組前段、后段總蛋白含量隨著替代水平的上升而升高；胃蛋白酶活力在50%替代比例達(dá)到最高；胃淀粉酶活力同樣在50%替代比例達(dá)到最高水平；胰蛋白酶活力由各組之間差異性是否顯著判斷得出其在50%替代組的時(shí)候達(dá)到最高；脂肪酶活性隨著替代水平的上升而降低，在替代比例50%時(shí)活性較強(qiáng)；42 日齡大黃魚稚魚胃蛋白酶活性在50%替代比例達(dá)到最高水平；胃淀粉酶活性同樣在50%替代比例達(dá)到最高； 胰蛋白酶活性、脂肪酶活性在50%替代比例達(dá)到最高水平。

在小水體飼養(yǎng)試驗(yàn)中， 大黃魚均處于低存活率狀態(tài)，即使是天然生物餌料喂養(yǎng)，大黃魚的存活率也不高， 合理的替代水平能同時(shí)提高大黃魚稚魚的生長速度和存活率，與生物餌料組對(duì)比，微粒飼料營養(yǎng)全面，彌補(bǔ)了其營養(yǎng)不平衡的缺陷（林建斌，2005）。 部分替代的飼養(yǎng)方法在保證大黃魚稚魚正常生長和存活的同時(shí)， 給其一個(gè)適應(yīng)的過程去轉(zhuǎn)化餌料， 且在前期階段能夠提高對(duì)微囊飼料的攝食成功率。 前期階段稚魚的消化系統(tǒng)發(fā)育尚不完全，所分泌的消化酶也不足，生物餌料可以較好地刺激其分泌并對(duì)其有所補(bǔ)充。

海藻多糖具有抗氧化、增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、抗凝血、抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用，作為一種免疫調(diào)節(jié)劑，可產(chǎn)生多種生理活性。本試驗(yàn)所用微膠囊飼料添加了海藻多糖，可顯著提高大黃魚仔稚魚相關(guān)消化酶活性及免疫力。陳勇等（2005）報(bào)道，飼料中添加多糖對(duì)異育銀鯽腸道和肝胰臟的蛋白酶、淀粉酶活性具有顯著性影響，異育銀鯽攝食適量殼聚糖能提高其消化酶活性，甘露聚糖、低聚果糖能夠提高異育銀鯽腸道和肝胰臟消化酶活性。

本研究表明，當(dāng)微囊飼料代替50%的生物餌料時(shí)，所達(dá)到的消化酶活性強(qiáng)度較佳，50%替代組的結(jié)果顯示其取得了較好的消化性能， 并且各個(gè)酶活力的情況也明顯優(yōu)于75%替代組。 75%替代組的消化情況并不理想， 原因可能是由于微囊飼料的粒徑大小還有待調(diào)整， 粒徑的大小對(duì)大黃魚稚魚的進(jìn)食有一定的阻礙，并影響了其消化性能，也可能是微囊飼料的營養(yǎng)配方?jīng)]有適應(yīng)大黃魚本身消化系統(tǒng)的改變情況。對(duì)于本次試驗(yàn)結(jié)果，從消化酶角度分析， 使用微囊飼料替代部分生物餌料的方案是可行的。 本試驗(yàn)可為微囊飼料方面的改良提供一定的信息， 以后可以考慮將替代量進(jìn)一步具體化，提高微膠囊飼料的適口性，完善飼料的營養(yǎng)配方，加強(qiáng)對(duì)大黃魚仔稚魚養(yǎng)殖環(huán)境的管理，以期得到更好的試驗(yàn)結(jié)果。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，微囊飼料替代50%的生物餌料時(shí)消化酶活性強(qiáng)度最佳。 因此大黃魚育苗可在其10 日齡后使用微膠囊飼料替代25% ～50%的生物餌料進(jìn)行飼養(yǎng)， 用以解決生物餌料飼養(yǎng)大黃魚魚苗的不足。