溫度和鹽度脅迫對(duì)紅螯螯蝦蝦苗存活率和免疫酶活力的影響

張高偉，王宣朋，周翰林，吳 春

（江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 宿遷農(nóng)科所，江蘇 宿遷 223800）

紅螯螯蝦(Cherax quadricarinatus)，原產(chǎn)于澳大利亞熱帶水域，肉質(zhì)鮮美，營養(yǎng)豐富，含多種不飽和脂肪酸，是較為名貴的淡水經(jīng)濟(jì)蝦種，該蝦具有出肉率高、抗逆性強(qiáng)、生長速度快等優(yōu)良性狀［1-3］。近年來，克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)的市場(chǎng)不穩(wěn)定，存在高溫季節(jié)病害嚴(yán)重的問題，而紅螯螯蝦的價(jià)格較高且保持穩(wěn)定，同時(shí)能夠作為稻田養(yǎng)殖的優(yōu)良品種，可以在高溫季節(jié)完美代替克氏原螯蝦，填補(bǔ)淡水螯蝦高端市場(chǎng)的空白［4］。近年來，隨著國內(nèi)外學(xué)者的不斷探索和研究，紅螯螯蝦的養(yǎng)殖技術(shù)逐漸成熟，養(yǎng)殖模式不斷完善，人工繁育技術(shù)也日趨進(jìn)步，但苗種繁育相關(guān)的基礎(chǔ)研究仍較匱乏。

由于紅鰲鰲蝦是熱帶蝦類，在我國大部分地區(qū)自然水溫條件下繁殖培育的蝦苗無法在當(dāng)年被養(yǎng)成商品蝦，需要集中越冬養(yǎng)殖，產(chǎn)量較低且提高了養(yǎng)殖成本，需要開展紅鰲螯蝦工廠化人工繁殖。在人工繁殖過程中，溫度和鹽度的變化容易造成紅螯螯蝦蝦苗的生長速度緩慢和高死亡率的現(xiàn)象。急性的溫度和鹽度應(yīng)激會(huì)影響蝦類的機(jī)體活力和免疫功能，造成血細(xì)胞吞噬活性和免疫相關(guān)酶活性的降低，進(jìn)而導(dǎo)致蝦苗存活率降低［5-6］。免疫相關(guān)酶活性是評(píng)價(jià)逆境脅迫下甲殼類動(dòng)物生命狀態(tài)的重要指標(biāo)［7］。在凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)［8］、克氏原螯蝦［9］、葛氏長臂蝦(Palaemon gravieri)［10］、斑 節(jié) 對(duì) 蝦(Penaeus monodon)［11］、脊 尾 白 蝦(Exopalaemon carinicauda)［12］和 中 華 絨 螯 蟹(Eriocheir sinensis)［13］等研究中都已證實(shí)，溫度和鹽度變化會(huì)對(duì)甲殼類動(dòng)物的免疫指標(biāo)產(chǎn)生顯著影響。其原因可能是溫度和鹽度較大幅度的急性脅迫打破了甲殼動(dòng)物的代謝及能量供給平衡，使得機(jī)體對(duì)免疫防御的能量投入大大降低，進(jìn)而導(dǎo)致免疫相關(guān)酶活性下降，最終影響蝦體的生長存活［14］。因此，研究溫度和鹽度的適宜變化范圍是維持紅螯螯蝦蝦苗免疫功能正常運(yùn)轉(zhuǎn)的重要前提，對(duì)紅螯螯蝦人工繁殖和大規(guī)格苗種培育具有重要意義。

為探究紅螯螯蝦蝦苗對(duì)不同溫度和鹽度的適應(yīng)性，提高蝦苗在培育過程中的存活率，本研究分析了溫度和鹽度變化對(duì)紅螯螯蝦蝦苗存活和免疫相關(guān)酶活力的影響，并綜合評(píng)定了紅螯螯蝦蝦苗對(duì)溫、鹽變化的適應(yīng)和抗逆能力，探究了紅螯螯蝦蝦苗生長培育所需要的適宜溫度和鹽度條件，旨在為紅螯螯蝦的人工繁育和大規(guī)格苗種培育提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與來源

2022年3月在江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院宿遷農(nóng)科所孵化中心紅螯螯蝦自繁群體中，從脫離母體后培育15 d的個(gè)體中選取體表光滑、攝食良好、活力旺盛的苗種作為研究對(duì)象。試驗(yàn)開始之前，利用紫外殺菌循環(huán)水控溫養(yǎng)殖系統(tǒng)暫養(yǎng)2周，暫養(yǎng)期間，溫度控制在25 ℃，鹽度控制在0.5‰，每日投喂紅螯螯蝦專用配合飼料2次，暫養(yǎng)和試驗(yàn)環(huán)境均放置伊樂藻。暫養(yǎng)后挑選狀態(tài)良好且穩(wěn)定的紅螯螯蝦用于研究，每組試驗(yàn)隨機(jī)挑選50只個(gè)體進(jìn)行生長指標(biāo)的測(cè)定，測(cè)得其平均體長為（15.75±5.19）mm。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

為探究溫度和鹽度對(duì)紅螯螯蝦蝦苗存活率的影響，將蝦苗從暫養(yǎng)環(huán)境（25 ℃，鹽度0.5‰）直接轉(zhuǎn)移至6個(gè)溫度梯度（20、22、24、26、28、30 ℃）和6個(gè)鹽度梯度（0.1‰、1‰、2‰、3‰、4‰、5‰）處理組，各轉(zhuǎn)移 50只個(gè)體，每組均設(shè)置 3 個(gè)生物學(xué)重復(fù)，試驗(yàn)持續(xù) 15 d，每天記錄各組紅螯螯蝦的死亡個(gè)數(shù)。

為分析溫度和鹽度急性脅迫對(duì)紅螯螯蝦免疫相關(guān)酶活性的影響，將試驗(yàn)蝦苗從暫養(yǎng)環(huán)境（25 ℃，鹽度0.5‰）直接轉(zhuǎn)移至6個(gè)溫度梯度（20、22、24、26、28、30 ℃）和6個(gè)鹽度梯度（0.1‰、1‰、2‰、3‰、4‰、5‰）處理組，各轉(zhuǎn)移50只個(gè)體，進(jìn)行48 h溫度和鹽度的突變脅迫，分別于脅迫后4、8、12、24和48 h對(duì)各處理紅螯螯蝦的肝胰腺組織進(jìn)行取樣，用于SOD、LSZ和CAT的活力檢測(cè)，各個(gè)試驗(yàn)組每次隨機(jī)抽取3只個(gè)體進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 酶活性的測(cè)定

1.3.1 樣品處理準(zhǔn)確稱取一定重量的紅螯螯蝦肝胰腺組織，樣品處理按照胡益鳴等［30］的方法并加以改進(jìn)，制備獲得10%的組織勻漿，2500 r/min離心10 min后取上清，再稀釋至最佳取樣濃度，待測(cè)。

1.3.2 免疫相關(guān)酶活性的測(cè)定使用酶活測(cè)定試劑盒和BCA試劑盒（南京建成生物工程研究所有限公司）、酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)用于SOD、LSZ和CAT的活性檢測(cè)。

SOD活性的測(cè)定：將待測(cè)樣本、雙蒸水、酶工作液、酶稀釋液和底物應(yīng)用液分別按照操作說明混勻，37 ℃ 孵育20 min，在450 nm 處酶標(biāo)儀讀數(shù)；同時(shí)用BCA試劑盒測(cè)定其蛋白濃度，按公式計(jì)算出SOD活力。

LSZ活性的測(cè)定：分別按照標(biāo)準(zhǔn)將待測(cè)樣本、雙蒸水、溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液和應(yīng)用菌液混勻，37 ℃水浴15 min后，立即取出，置于0 ℃以下的冰水浴中3 min，然后逐管取出，倒入1 cm光徑比色皿中，530 nm處以雙蒸水調(diào)透光度至100%，比色，測(cè)各管的透光度T15，即37 ℃水浴15 min后的透光度值，按照公式計(jì)算LSZ的活性。具體操作步驟參照試劑盒說明書。

CAT活性的測(cè)定：首先根據(jù)說明書步驟確定待測(cè)液的最佳取樣濃度，然后將試劑1、試劑2和待測(cè)液分別混勻，準(zhǔn)確反應(yīng)1 min，最后將試劑3、試劑4和待測(cè)液分別混勻，將波長調(diào)到405 nm，光徑調(diào)到0.5 cm，雙蒸水調(diào)零，測(cè)定各管的吸光度值，按照公式計(jì)算CAT活力。具體方法參照試劑盒說明書。

（2）金融支持城鎮(zhèn)化建設(shè)的組織體系有待完善。國家為保障城鎮(zhèn)化建設(shè)的順利開展，通過相關(guān)的金融機(jī)構(gòu)利用金融工具進(jìn)行系列的金融服務(wù)。金融體系的常態(tài)化發(fā)展能夠表現(xiàn)出城鎮(zhèn)化發(fā)展過程中正常的金融需求。當(dāng)前，我國有政策性銀行、商業(yè)銀行、農(nóng)村合作金融三類性質(zhì)的金融機(jī)構(gòu)體系，依次在提供保障性購銷貸款、信貸業(yè)務(wù)、零售、農(nóng)村金融等領(lǐng)域提供金融服務(wù)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05為顯著性差異，P＜0.01為極顯著差異。采用GraphPad prism 6.0軟件進(jìn)行作圖分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度和鹽度脅迫對(duì)紅螯螯蝦存活率的影響

由圖1可知，隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長，各溫度組紅螯螯蝦的存活率均逐漸下降。到第 11天時(shí)，各溫度組存活率由大到小排序?yàn)?28 ℃＞30 ℃＞26 ℃ ＞24 ℃＞22 ℃＞20 ℃。到第12天時(shí)，20 ℃處理組的存活率降低到50%，而28 ℃處理組的存活率始終高于 90%。自第 9天起，28與20 ℃2組之間開始差異顯著（P＜0.05）；從第10天開始，22與 20 ℃ 2組之間呈極顯著差異（P＜0.01）；而 24、26和30 ℃ 3組之間一直無顯著性差異。

圖1 不同溫度脅迫下紅螯螯蝦的存活率

各鹽度組的紅螯螯蝦的存活率也隨時(shí)間的延長而逐漸下降, 但存活率均高于50%（圖2）。第5天時(shí)，各鹽度組存活率由大到小排序?yàn)?.1‰＞1‰ ＞2‰＞3‰＞4‰＞5‰。第12天時(shí)，5‰鹽度 組的存活率降低到56%，而0.1‰鹽度組的存活率始終高于90%。單因素方差分析表明，自第6天起，5‰與0.1‰鹽度組之間一直存在顯著差異（P＜ 0.05）；自第9天起，4‰與 0.1‰鹽度組之間一直存在顯著差異（P＜0.05）；到第12天，5‰鹽度組的存活率降至最低（56%）且極顯著低于其余處理組（P＜0.01）； 而1‰、2‰和3‰這3個(gè)鹽度組之間從始至終無顯著性差異。

圖2 不同鹽度脅迫下紅螯螯蝦的存活率

2.2 不同溫度脅迫對(duì)紅螯螯蝦免疫相關(guān)酶活力的影響

不同溫度脅迫下3種免疫相關(guān)酶活性變化如圖3所示。由圖3A可知，20、22和24 ℃ 3個(gè)處理組的SOD活性整體水平較低且相對(duì)穩(wěn)定。26和28 ℃處理組的SOD活性總體是隨著脅迫時(shí)間的延長而逐漸增強(qiáng)，30 ℃處理組整體呈現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢(shì)。24 h時(shí)，26、28和30 ℃處理組的SOD活性均達(dá)到最大值，分別為123.04、146.80和138.06 U/mg。

由圖3B可知，各處理組的LSZ活性整體上隨著脅迫時(shí)間的增加呈現(xiàn)出先升高后降低的變化趨勢(shì)。28和30 ℃處理組的響應(yīng)較其他處理組更為積極，其活性的變化幅度也高于其他處理組，且隨脅迫時(shí)間的增加而達(dá)到一個(gè)相對(duì)較高的穩(wěn)定活性，28和30 ℃處理組在48 h時(shí)的最高值分別為20 ℃處理組的2.69和2.34倍。20、22和 24 ℃處理組的LSZ活性均在8 h達(dá)到峰值，并隨著脅迫時(shí)間的增加逐漸降低，最后低于脅迫初始階段的酶活力，其中20 ℃組的LSZ活性在48 h時(shí)顯著低于其他脅迫時(shí)間的（P＜0.05）。

由圖3C可知，各處理組的 CAT 活性變化規(guī)律與LSZ相似，均大致呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢(shì)。20、22和24 ℃處理組的CAT活性均在8 h時(shí)達(dá)到峰值，并隨著脅迫時(shí)間的增加而逐漸降低，最后低于脅迫初始階段的酶活力，其中20 ℃組的LSZ活性在48 h時(shí)顯著低于其他脅迫時(shí)間的（P＜0.05）。26、28和30 ℃處理組均在 12 h達(dá)到峰值后逐漸下降。在48 h時(shí)，28和30 ℃處理組的CAT活性依然顯著低于脅迫初始階段，而24 ℃處理組在脅迫各個(gè)時(shí)期均未產(chǎn)生顯著性差異。

圖3 不同溫度脅迫下紅螯螯蝦免疫相關(guān)酶活性的變化

2.3 不同鹽度脅迫對(duì)紅螯螯蝦免疫相關(guān)酶活力的影響

不同鹽度脅迫下3種免疫相關(guān)酶活性變化如圖4所示。由圖4A可知，從脅迫4 h開始，4‰、5‰鹽度組的SOD活性開始升高，與脅迫2 h時(shí)差異顯著（P＜0.05），8 h到達(dá)峰值，隨后逐步下降。到48 h時(shí)5‰鹽度組的 SOD活性降到最低，與其他鹽度處理組形成顯著差異（P＜0.05）。3‰鹽度組的 SOD活性在8 h時(shí)達(dá)到峰值，然后隨著脅迫時(shí)間的增加而逐步降低，直到低于初始脅迫時(shí)的。0.1‰、1‰和2‰處理組的SOD 活性變化不大，在整個(gè)試驗(yàn)中3個(gè)處理組之間均無顯著差異。

由圖4B可知，與0.1‰、1‰和2‰3個(gè)鹽度組的LSZ活性變化不大，在整個(gè)試驗(yàn)中3個(gè)處理組間均無顯著差異。整體來看，3‰、4‰和5‰ 處理組的LSZ活性隨著脅迫時(shí)間的增加呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢(shì)，其中4‰和5‰處理組的響應(yīng)較其他處理組更為積極，且在48 h時(shí)與其他處理組均形成顯著性差異（P＜0.05）。

由圖4C可知，整體來看，各個(gè)鹽度處理組的CAT活性均隨著脅迫時(shí)間的增加呈現(xiàn)出先升高后降低的變化趨勢(shì)。0.1‰、1‰和2‰處理組的CAT活性普遍較低，在各試驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)均未達(dá)到顯著性差異。3‰、4‰、5‰處理組的 CAT活性逐漸上升，均在8 h達(dá)到最大值后開始下降，到48 h時(shí)顯著低于初始脅迫階段。1‰鹽度組在48 h時(shí)恢復(fù)至脅迫初始階段水平，5‰鹽度組在則48 h時(shí)高于脅迫初始階段水平。

圖4 不同鹽度脅迫下紅螯螯蝦免疫相關(guān)酶活性的變化

3 討論

紅螯螯蝦對(duì)機(jī)體溫度和滲透壓的自我調(diào)節(jié)能力較差，對(duì)外界溫度和鹽度的變化會(huì)發(fā)生較為強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)，因此，溫、鹽脅迫會(huì)對(duì)其生理生化功能產(chǎn)生消極影響，甚至導(dǎo)致死亡［15］。甲殼動(dòng)物應(yīng)對(duì)溫度和環(huán)境滲透壓的急性變化需要消耗大量能量，這會(huì)大大改變自身的代謝狀況，破壞其代謝及能量供給平衡，降低機(jī)體對(duì)免疫防御的能量投入，進(jìn)而影響蝦體的生長存活［16-18］。本試驗(yàn)采用單一變量的研究方法，將溫度或鹽度其中一個(gè)因子控制在正常范圍內(nèi)，分別探究了溫度和鹽度對(duì)紅螯螯蝦存活率和免疫相關(guān)酶活力的影響。

3.1 不同溫度和鹽度脅迫對(duì)紅螯螯蝦存活率的影響

在溫度脅迫試驗(yàn)中，隨著脅迫時(shí)間的增加，溫度降低幅度越大的試驗(yàn)組紅螯螯蝦存活率越低，這與胡潤豪等［10］對(duì)葛氏長臂蝦的研究結(jié)果相似；溫度增加的試驗(yàn)組中28 ℃處理組的存活率最高，隨著脅迫溫度的繼續(xù)上升，紅螯螯蝦的存活率開始下降，這與王天神等［19］在克氏原螯蝦上的研究結(jié)果相似，因此推測(cè)紅螯螯蝦生存的最適溫度在28 ℃左右。脅迫強(qiáng)度上升會(huì)加劇對(duì)甲殼類呼吸、攝食和免疫等功能的消極影響，降低其抗應(yīng)激能力，甚至引起死亡［20］。另一方面，隨著溫度的降低，紅螯螯蝦的存活率也逐漸降低，20 ℃脅迫48 h后的存活率僅有53%，這表明紅螯螯蝦對(duì)低溫和低溫突變的耐受性更差，這與紅螯螯蝦是熱帶蝦類，更適合較高水溫的特性有關(guān)。26、28和30 ℃溫度組在脅迫48 h后的存活率總體均高于80%，表明這個(gè)溫度范圍內(nèi)的紅螯螯蝦存活率較高，但是否適宜其生長發(fā)育仍需進(jìn)一步研究。在鹽度脅迫試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，紅螯螯蝦在0.1‰～2‰鹽度下的存活率較高，適宜紅螯螯蝦生存。0.1‰鹽度組在脅迫48 h后的存活率顯著高于5‰處理組，說明紅螯螯蝦對(duì)高鹽度變化的耐受性并不強(qiáng)，更適合低鹽度環(huán)境。

紅螯螯蝦自然棲息于淡水、河流、湖泊，在淡水中繁殖，對(duì)高鹽環(huán)境的耐受性較弱［21］。隨鹽度脅迫時(shí)間的增加，紅螯螯蝦存活率的下降速度不斷加快，表明脅迫強(qiáng)度和處理時(shí)間的增加會(huì)影響紅螯螯蝦對(duì)鹽度的耐受性，可能是因?yàn)榧t螯螯蝦為減輕鹽度變化帶來的影響，而消耗了大量能量來調(diào)節(jié)自身滲透壓，因此在苗種培育或者養(yǎng)殖過程中低鹽度的環(huán)境或較短的變化周期更有利于紅螯螯蝦的生長發(fā)育。

3.2 不同溫度和鹽度脅迫對(duì)紅螯螯蝦免疫相關(guān)酶活力的影響

溫度和鹽度的急性脅迫會(huì)導(dǎo)致水生動(dòng)物體內(nèi)活性氧(ROS)的過量累積，過量的ROS會(huì)攻擊水生動(dòng)物細(xì)胞膜中的多不飽和脂肪酸，引起脂質(zhì)過氧化，進(jìn)而使得細(xì)胞功能受損［22-24］。蝦類的抗氧化能力主要依靠非特異性免疫抗氧化酶 SOD和CAT發(fā)揮作用，這2種抗氧化酶能夠有效清除水生動(dòng)物機(jī)體內(nèi)過量的ROS，對(duì)維持ROS代謝平衡和降低氧化損傷起著重要的免疫保護(hù)作用［25］。在甲殼類簡單的免疫系統(tǒng)中，LSZ在吞噬細(xì)胞、消滅機(jī)體異物過程中發(fā)揮了重要的作用；此外LSZ還具有較強(qiáng)的抑菌作用，可以通過溶解細(xì)菌細(xì)胞膜的肽聚糖等結(jié)構(gòu)性物質(zhì)使細(xì)菌崩解，因此，LSZ的活性大小能夠較為準(zhǔn)確地衡量生物體的免疫狀態(tài)［26-28］。

26和28 ℃處理組的SOD活性隨著脅迫時(shí)間的增加呈現(xiàn)先上升后降低的變化趨勢(shì)，并且降低后的酶活性依然顯著高于對(duì)照組，說明較高溫度的脅迫可能先使得機(jī)體遭受氧化反應(yīng)，導(dǎo)致ROS積累，但隨著脅迫時(shí)間的延長，SOD活性在降低后更加穩(wěn)定，證明機(jī)體在此溫度下并未遭受損傷，反而對(duì)免疫活性產(chǎn)生了積極作用。20、22 和24 ℃處理組的SOD活性整體水平較低且相對(duì)穩(wěn)定，證明此范圍內(nèi)溫度并未對(duì)紅螯螯蝦的SOD活性產(chǎn)生顯著影響。各處理組的CAT活性整體上均呈現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢(shì)。20和22 ℃處理組的CAT活性均在處理8 h時(shí)達(dá)到峰值，并隨著脅迫時(shí)間的增加而逐漸降低，且20 ℃處理組的CAT活力顯著低于脅迫初始階段，這說明20 ℃的脅迫已經(jīng)對(duì)紅螯螯蝦產(chǎn)生了一定的機(jī)體損傷，導(dǎo)致其CAT活性無法再恢復(fù)到正常水平。其SOD與CAT的活性在經(jīng)歷溫度驟變后均出現(xiàn)隨著處理時(shí)間延長而呈先顯著增加又逐漸降低的變化規(guī)律，但CAT活性未降低至正常水平，推測(cè)CAT比SOD更易受溫度變化的影響。本文高溫脅迫試驗(yàn)的結(jié)果與高煥等［29］對(duì)脊尾白蝦T-AOC的研究結(jié)果有相似之處，即升溫與降溫對(duì)T-AOC活性影響有差異，這可能是由于溫度驟升導(dǎo)致ROS積累效應(yīng)強(qiáng)于溫度驟降，因此溫度升高脅迫的試驗(yàn)組需要更多時(shí)間消除ROS，屬于正常免疫調(diào)節(jié)范圍；不同的是，紅螯螯蝦的CAT活性在低溫脅迫下無法恢復(fù)到正常水平，這表明紅螯螯蝦對(duì)低溫的耐受能力更弱。LSZ活性隨著脅迫時(shí)間的增加整體呈現(xiàn)出先升高后降低的變化趨勢(shì)。28和30 ℃ 處理組的響應(yīng)比其他處理組更為積極，其活性變化幅度也高于其他處理組。20、22和 24 ℃處理組的LSZ活性在8 h時(shí)達(dá)到峰值，并隨脅迫時(shí)間的增加而逐漸降低，直至低于脅迫初始階段的酶活力。胡益鳴等［30］研究發(fā)現(xiàn)溫度急劇降低會(huì)改變細(xì)胞膜對(duì)溶酶體酶的滲透性，進(jìn)而影響免疫酶的釋放及其活性，推測(cè)本研究中20、22和24 ℃處理組在脅迫后的LSZ活性降低與此相關(guān)，較低的溫度影響了紅螯螯蝦的免疫功能，這勢(shì)必會(huì)影響紅螯螯蝦對(duì)侵襲病菌的抵御能力。Wang等［31］研究刺參時(shí)發(fā)現(xiàn)，溫度升高可以提高LSZ活性；而Paillard等［32］在研究溫度對(duì)菲律賓蛤仔脅迫影響的研究中發(fā)現(xiàn)溶菌酶活性與溫度呈負(fù)相關(guān)。本研究中溫度脅迫對(duì)LSZ活性的影響并無明顯的規(guī)律，與上述研究結(jié)果均不一致，這可能與研究對(duì)象親緣關(guān)系較遠(yuǎn)及試驗(yàn)方法的差異有關(guān)。

甲殼動(dòng)物需要調(diào)節(jié)自身的滲透壓來應(yīng)對(duì)外部水環(huán)境的鹽度波動(dòng)［33］。龍曉文等［34］發(fā)現(xiàn)隨水體鹽度的升高，雌性三疣梭子蟹肝胰腺中的SOD和CAT活性升高。本研究同樣發(fā)現(xiàn)，4‰和5‰鹽度組紅螯螯蝦SOD和CAT的活性在短時(shí)間內(nèi)顯著上升，而低鹽度對(duì)紅螯螯蝦免疫酶活性無顯著影響，表明高鹽度引起了紅螯螯蝦的氧化應(yīng)激反應(yīng)，其抗氧化酶響應(yīng)更加積極。4‰和5‰鹽度組的SOD活性從脅迫4 h后開始顯著上升，在8 h時(shí)到達(dá)峰值，隨后逐步下降，到48 h時(shí)5‰鹽度組的SOD活性下降到最低，與其他鹽度處理組形成顯著差異，表明5‰的鹽度水體會(huì)對(duì)紅螯螯蝦的免疫系統(tǒng)造成不可修復(fù)的損害。各個(gè)鹽度組的CAT活性隨著脅迫時(shí)間的增加總體上呈現(xiàn)出先升高后降低的變化趨勢(shì)。在鹽度過高時(shí)機(jī)體受自由基攻擊較強(qiáng)，從而加劇紅螯螯蝦肝胰腺中脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，這可能是導(dǎo)致高鹽組紅螯螯蝦存活率較低的原因。高鹽度脅迫雖然能提高紅螯螯蝦的CAT和SOD活性，但在鹽度初始脅迫階段紅螯螯蝦抗氧化能力的提高可能只是氧化損傷的一種反應(yīng)，如果隨著脅迫時(shí)間的增加其CAT和SOD活性低于初始水平，就可以證明高鹽度會(huì)加劇紅螯螯蝦的氧化損傷，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

LSZ為溶酶體酶，在吞噬細(xì)胞并且消滅和清除異物的過程中發(fā)揮著重要作用，此外LSZ還可以通過溶解細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖使細(xì)菌崩解，具有很強(qiáng)的抑菌作用。因此，LSZ的活性大小可被用于衡量生物體的免疫狀態(tài)［35-36］。本研究中各鹽度組的LSZ活性在不同時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)顯著性上升，這可能與紅螯螯蝦機(jī)體對(duì)鹽度脅迫產(chǎn)生應(yīng)激的保護(hù)反應(yīng)有關(guān)。3‰、4‰和5‰ 鹽度組的LSZ活性隨著脅迫時(shí)間的增加呈現(xiàn)出先升高后降低的變化趨勢(shì)，且在48 h時(shí)與其他處理組均形成顯著性差異。5‰ 鹽度組的LSZ活性最終顯著低于初始水平，說明鹽度變化已經(jīng)超出機(jī)體免疫酶的承受限度，其免疫機(jī)能遭到破壞。隨著處理鹽度的降低，LSZ活性均在4‰鹽度組出現(xiàn)顯著下降，表明4‰鹽度可能已接近紅螯螯蝦免疫酶的承受臨界點(diǎn)，由此推測(cè)LSZ活性下降也是導(dǎo)致紅螯螯蝦存活率降低的原因。

綜上所述，不同溫度和鹽度的脅迫均會(huì)對(duì)紅螯螯蝦的存活率和免疫相關(guān)酶活性產(chǎn)生顯著影響。在26～30 ℃和0.1‰～1‰鹽度下紅螯螯蝦的免疫調(diào)節(jié)靈敏迅速，其免疫相關(guān)酶活力在適應(yīng)環(huán)境之后也有顯著增高，表現(xiàn)出較強(qiáng)的適應(yīng)能力，存活率較高。而較低溫度和較高鹽度的長時(shí)間脅迫會(huì)使紅螯螯蝦的免疫調(diào)節(jié)紊亂，其免疫相關(guān)酶活性會(huì)發(fā)生不可逆的損傷，導(dǎo)致存活率降低。因此在紅螯螯蝦人工繁育和養(yǎng)殖生產(chǎn)中應(yīng)注意避開溫度和鹽度長期的大幅變化，尤其在人工孵化和苗種培育階段，需定期檢測(cè)紅螯螯蝦的免疫相關(guān)酶活性，這有助于了解機(jī)體的免疫能力和健康程度，對(duì)提高人工繁育的苗種存活率和養(yǎng)殖成功率具有重要意義。