MiRNA在增生性瘢痕和纖維化疾病中的作用研究進(jìn)展▲

李文濤 徐明鵬 黎雨 譚小玉 檀森 柳廣南

廣西醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，南寧市 530007

【提要】 微小核糖核酸(miRNA)是高度保守的內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA，廣泛調(diào)控靶基因表達(dá)，在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、凋亡、分化,以及機(jī)體代謝等一系列生命過程中發(fā)揮著重要作用。近年來，miRNA已成為診斷和治療增生性瘢痕、纖維化疾病的研究熱點(diǎn)，有望成為高特異性生物標(biāo)志物、評(píng)估療效的新靶標(biāo)，更從分子機(jī)制上為揭示疾病的發(fā)生發(fā)展提供一種全新的思路和方向?，F(xiàn)將miRNA在皮膚瘢痕、氣管瘢痕、心肺肝腎纖維化疾病中的研究進(jìn)展介紹如下。

增生性瘢痕是在各種致傷因素作用下，損傷創(chuàng)面在愈合過程發(fā)生的病理性修復(fù)，涉及一系列炎癥反應(yīng)、細(xì)胞分化增殖、胞外基質(zhì)堆積和組織結(jié)構(gòu)重建等復(fù)雜病理生理改變，表現(xiàn)為以成纖維細(xì)胞為主的效應(yīng)細(xì)胞過度增殖和以Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白為主的細(xì)胞外基質(zhì)大量沉積[1]。纖維化可發(fā)生于多種臟器中，在致病因素刺激下，正常組織細(xì)胞萎縮、凋亡或異常死亡后，被過度增殖的成纖維細(xì)胞所替代，形成排列紊亂的膠原纖維，產(chǎn)生大量細(xì)胞外基質(zhì)堆積，導(dǎo)致器官結(jié)構(gòu)、功能異常[2]。因此，瘢痕和纖維化屬于同一種病理過程，其根本核心實(shí)質(zhì)是損傷-修復(fù)失衡，組織修復(fù)過度或失控導(dǎo)致結(jié)締組織和膠原纖維增生，瘢痕、纖維化形成，持續(xù)進(jìn)展可致組織器官結(jié)構(gòu)破壞、功能衰竭。目前皮膚瘢痕[3-4]、氣管瘢痕[5-6]、心肺肝腎纖維化[7-10]疾病是臨床治療上一大難題，其致死率、致殘率逐年上升，嚴(yán)重威脅人類健康和生命。如何抑制或逆轉(zhuǎn)器官瘢痕、纖維化的形成是當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究的重要課題。

微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是高度保守的內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA，直接結(jié)合靶基因mRNA 3′UTR，從而抑制或降解mRNA轉(zhuǎn)錄翻譯，廣泛調(diào)控靶基因表達(dá)，在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、凋亡、分化，以及機(jī)體代謝等過程中發(fā)揮著重要作用[11-12]。近年來，隨著高通量測(cè)序技術(shù)、生物信息學(xué)的迅猛發(fā)展，深入認(rèn)識(shí)非編碼RNA(non-coding RNA，ncRNA)后發(fā)現(xiàn)miRNA不僅與多種增生性瘢痕和纖維化疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，同時(shí)還在疾病治療中表現(xiàn)出巨大潛力，成為研發(fā)抗瘢痕增生、纖維化形成藥物的新靶點(diǎn)[13-14]。現(xiàn)將miRNA在皮膚瘢痕、氣管瘢痕、心肺肝腎纖維化疾病中的作用研究進(jìn)展介紹如下。

1 MiRNA的概述

MiRNA是一類長(zhǎng)約18～25個(gè)核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA。1993年，Lee等[15]在研究線蟲早期發(fā)育的實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用定位克隆法發(fā)現(xiàn)第一個(gè)不編碼蛋白質(zhì)的miRNA，即Lin-4，作為負(fù)性調(diào)節(jié)因子參與線蟲發(fā)育。2002年，Science雜志把miRNA的發(fā)現(xiàn)評(píng)為十大科技突破之首。隨著越來越多的功能miRNA被發(fā)現(xiàn)，miRNA和mRNA之間交互分子效應(yīng)作用成為研究熱點(diǎn)，標(biāo)志著一個(gè)基因調(diào)控新領(lǐng)域的到來[16]。據(jù)推測(cè)人類基因組中大約有50%的DNA可轉(zhuǎn)錄為RNA，僅有2%左右的RNA參與蛋白質(zhì)翻譯，其中4 000多個(gè)miRNA調(diào)控60%的基因轉(zhuǎn)錄，即1個(gè)miRNA可調(diào)控200多個(gè)靶基因，而1個(gè)mRNA也可受多個(gè)miRNA調(diào)節(jié)，形成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[17-18]。miRNA由于在人體血清、組織和其他體液中均有表達(dá)，且表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定、時(shí)效較長(zhǎng)，故其有望成為疾病高特異度、高靈敏度的生物標(biāo)志物，并可用于監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展和療效評(píng)價(jià)。

2 MiRNA在增生性瘢痕中的作用

2.1 MiRNA與皮膚瘢痕 皮膚瘢痕是研究最為廣泛的增生性瘢痕之一，是整形外科、皮膚科一直以來面臨的棘手問題。創(chuàng)傷后皮膚愈合修復(fù)，結(jié)締組織異常增生，突出皮膚表面，且質(zhì)地實(shí)韌，向周圍正常皮膚侵襲性生長(zhǎng)，具有類似腫瘤的生物學(xué)特性，因此又被稱為“瘢痕瘤”。Guo等[19]采用微陣列分析正常皮膚和皮膚瘢痕組織差異miRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)兩種組織間有152個(gè)miRNA表達(dá)存在差異，其中82個(gè)呈上調(diào)表達(dá)、70個(gè)呈下調(diào)表達(dá)。Li等[20]在皮膚瘢痕組織中鑒定出：miR152、miR23b-3p、miR31-5p、miR320c、miR30a-5p和miR-H7呈顯著上調(diào)表達(dá)，miR4328、miR145-5p、miR143-3p呈顯著下調(diào)表達(dá)，對(duì)其靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)和富集分析后發(fā)現(xiàn)，上述miRNA主要富集在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β和絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的調(diào)控。

皮膚瘢痕形成經(jīng)歷炎癥期、肉芽組織增生期、瘢痕修復(fù)期三個(gè)階段，無論哪個(gè)階段出現(xiàn)調(diào)控失衡，均可發(fā)生病理性修復(fù)，形成增生性瘢痕。miRNA幾乎參與了以上每個(gè)階段，其主要調(diào)控炎癥因子、細(xì)胞因子釋放，通過轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1，人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(protein kinase B,AKT)等信號(hào)通路，改變成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、肌成纖維細(xì)胞過度增殖、分化、遷移、凋亡，以及上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transdifferentiation，EMT)等生物學(xué)功能，加劇細(xì)胞外基質(zhì)堆積，最終形成瘢痕。Naqvi等[21]研究發(fā)現(xiàn)，上調(diào)miRNA-24、miRNA142-3p、miRNA-30b表達(dá)后，炎癥因子腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-6和IL-12 p40的合成和釋放受到抑制，并且大大減弱單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞對(duì)大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌的吞噬作用，從而減輕炎癥反應(yīng)。Li等[22]在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1誘導(dǎo)皮膚瘢痕成纖維細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)，膠質(zhì)瘢痕組織和成纖維細(xì)胞中的miRNA-21、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)顯著上調(diào)，而Smad7表達(dá)受到抑制，此結(jié)果提示：miRNA-21可能抑制Smad7表達(dá)，激活轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1/miRNA-21/Smad7信號(hào)通路，最后促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成。Yan等[23]轉(zhuǎn)染miRNA21-5p模擬物到角質(zhì)形成細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)：miRNA21-5p上調(diào)表達(dá)促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，同時(shí)vimentin和snail2表達(dá)上調(diào)、E-cadherin表達(dá)下調(diào)，由此推測(cè)：miRNA21-5p通過PTEN/AKT信號(hào)通路影響角質(zhì)形成細(xì)胞的生物學(xué)功能并調(diào)控EMT表型。因此，有學(xué)者[19]用miRNA-21拮抗劑阻斷皮膚瘢痕成纖維細(xì)胞miRNA-21表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖受到抑制，成纖維細(xì)胞的凋亡加速，纖維化相關(guān)基因的表達(dá)減少，以及膠原蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)的沉積；且其進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，miRNA-21拮抗劑還可顯著地改善兔耳瘢痕的嚴(yán)重程度、減少膠原蛋白沉積，說明下調(diào)miRNA-21對(duì)治療兔耳增生性瘢痕具有良好療效，這為皮膚瘢痕的治療提供新的分子靶標(biāo)。

2.2 MiRNA與氣管瘢痕 在致病因素作用下氣管受到損傷后，經(jīng)過一系列病理性修復(fù)、瘢痕形成，最終導(dǎo)致氣管狹窄，常以呼吸困難為主要臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重者出現(xiàn)窒息進(jìn)而危及生命。氣管結(jié)核、氣管插管或氣管切開是氣管瘢痕狹窄的主要原因；熱消融術(shù)、冷凍術(shù)、球囊擴(kuò)張和支架置入術(shù)等呼吸介入治療，或者胸外科的狹窄段氣管切除并端端吻合治療，這些內(nèi)科介入治療和外科手術(shù)治療，都可對(duì)氣管造成二次損傷，患者術(shù)后仍可發(fā)生氣道再狹窄[24]。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于良性氣管狹窄相關(guān)研究大多集中在病例報(bào)告和診療方法上，對(duì)其涉及的發(fā)病機(jī)制探索甚少[25]。近年來隨著科學(xué)技術(shù)水平不斷提高，miRNA與氣管瘢痕狹窄的相關(guān)性研究逐漸受到關(guān)注。葉乃郗等[26]應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測(cè)8例良性氣管瘢痕狹窄患者的氣管狹窄瘢痕組織和正常氣管黏膜組織中miRNA127-3p表達(dá)水平后發(fā)現(xiàn)：氣管瘢痕狹窄組織中miRNA127-3p呈顯著低表達(dá)；miRNA127-3p過表達(dá)可下調(diào)絲裂原活化蛋白激酶4表達(dá)，抑制氣道瘢痕成纖維細(xì)胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)，影響成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化，最終可抑制氣管瘢痕增生。王新[27]使用生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)Gene Expression Omnibus數(shù)據(jù)庫(kù)和ArrayExpress數(shù)據(jù)庫(kù)中174個(gè)肺纖維化樣本進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，纖維化肺組織中miRNA320a-3p呈下調(diào)表達(dá)，臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)miRNA320a-3p在氣管瘢痕組織中亦呈低表達(dá)，進(jìn)一步行功能及分子實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)miRNA320a-3p可通過下調(diào)STAT3，調(diào)控轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1誘導(dǎo)氣管上皮細(xì)胞增殖、遷移及EMT作用。

3 MiRNA在纖維化疾病中的作用

3.1 MiRNA與心肌纖維化 心肌纖維化是指正常心肌組織細(xì)胞萎縮、凋亡或異常死亡后，在炎癥、氧化應(yīng)激等因素刺激下，成纖維細(xì)胞過度增殖并向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，促使細(xì)胞外基質(zhì)過度堆積、心肌間質(zhì)重構(gòu)的現(xiàn)象，是誘發(fā)心律失常和心功能衰竭等嚴(yán)重并發(fā)癥的主要原因之一[28]。研究[29]表明：各種原因?qū)е碌男募±w維化都伴隨著一系列特定miRNA的表達(dá)變化。Yu等[30]在用血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)大鼠心臟成纖維細(xì)胞纖維化的體外實(shí)驗(yàn)中觀察到miRNA99b-3p表達(dá)顯著上調(diào)。轉(zhuǎn)染miRNA99b-3p模擬物至心臟成纖維細(xì)胞后，纖連蛋白、Ⅰ型膠原蛋白、波形蛋白和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白分泌增加，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖和遷移，可能通過調(diào)控糖原合成酶激酶-3β的表達(dá)，導(dǎo)致其下游促纖維化效應(yīng)因子Smad3激活，促使心肌細(xì)胞纖維化。另一項(xiàng)研究[31]結(jié)果顯示，miRNA-214表達(dá)水平與心肌纖維化嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。在大鼠心腔注射miRNA-214前體和抑制劑來調(diào)節(jié)心肌miRNA-214的表達(dá)，結(jié)果顯示：miRNA-214可下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶-1，Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白，以及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1的表達(dá)，減輕心肌細(xì)胞外基質(zhì)堆積、膠原蛋白錯(cuò)亂排序，抑制心肌重塑，具有保護(hù)心肌的作用。Thum等[32]研究證實(shí)：miRNA-21可以下調(diào)Spry1表達(dá)，激活細(xì)胞外信號(hào)調(diào)控的蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)/絲裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信號(hào)通路，促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞活化并釋放大量生長(zhǎng)因子。進(jìn)一步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：沉默miRNA-21后，心臟ERK/MAPK酶活性降低，心臟間質(zhì)纖維化受到抑制，且心臟功能障礙有所減輕。因此，miRNA-21有望成為治療心肌纖維化的潛在新靶標(biāo)。

3.2 MiRNA與肺纖維化 肺纖維化是以肺泡上皮細(xì)胞損傷、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、纖維細(xì)胞增生轉(zhuǎn)化、細(xì)胞外基質(zhì)沉積、最終纖維化形成為特征的一種進(jìn)行性呼吸困難的間質(zhì)性肺疾病。研究表明，miRNA在肺纖維化的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。Wang等[33]通過輻射誘導(dǎo)肺纖維化發(fā)現(xiàn)在纖維化的肺組織中miRNA155-5p表達(dá)下調(diào)，且其表達(dá)水平與肺纖維化的形成呈負(fù)相關(guān)。敲除miRNA155-5p的功能靶基因糖原合酶激酶-3β，可增強(qiáng)p65(核因子κB 的亞基)的磷酸化，逆轉(zhuǎn)EMT作用，這說明：下調(diào)miRNA155-5p介導(dǎo)糖原合酶激酶-3β/核因子κB信號(hào)傳導(dǎo)有助于減輕小鼠肺纖維化。在一項(xiàng)博來霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化模型研究中[34]，肺纖維化小鼠的肺組織中miRNA-21表達(dá)顯著上調(diào)，從博來霉素給藥第3天開始肺組織中miRNA-21上調(diào)表達(dá)，在給藥第14天達(dá)到最高水平，并持續(xù)呈高表達(dá)24 d天以上，說明miRNA-21上調(diào)表達(dá)參與肺纖維化的整個(gè)過程。進(jìn)一步進(jìn)行分子實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，miRNA-21可能下調(diào)Smad7、Spry1、PTEN表達(dá)，影響轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1/Smad、ERK、FAK/AKT信號(hào)通路，促使成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖、遷移、侵襲，增強(qiáng)膠原蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶分泌與堆積，最終導(dǎo)致不可逆的肺纖維化[34]。相反，纖維化肺組織中miRNA-29b呈低表達(dá)，可以減輕博萊霉素誘導(dǎo)的纖維化和炎癥反應(yīng)，降低膠原蛋白表達(dá)，改善小鼠肺纖維化[35]。從以上研究中，我們發(fā)現(xiàn)miRNA通過調(diào)控編碼基因的表達(dá)，發(fā)揮促纖維化或抗纖維化作用，可能成為治療肺纖維化的新方法。同時(shí)，miRNA可以與非編碼基因中環(huán)狀RNA(circular RNA，circRNA)、長(zhǎng)鏈ncRNA(long ncRNA, lncRNA)相互作用。Li等[36]發(fā)現(xiàn)：miRNA29b-2-5p 是circ949、circ057和lnc865、lnc556 直接靶向的miRNA，而miRNA29b-2-5p結(jié)合STAT3，可影響STAT3磷酸化，抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖、遷移和EMT作用。因此circ949、circ057和lnc865、lnc556與miRNA29b-2-5p形成復(fù)雜而龐大的競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA(competing endogenous RNA，ceRNA)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，彼此相互作用，在轉(zhuǎn)錄層面上調(diào)控SRAT3表達(dá)，參與肺纖維化的進(jìn)程。

3.3 MiRNA與肝纖維化 肝纖維化是指在病毒、酒精、自身免疫、寄生蟲等致病因素作用下，肝星狀細(xì)胞過度增殖，造成肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生、彌漫性細(xì)胞外基質(zhì)過度堆積，導(dǎo)致肝臟結(jié)構(gòu)和功能異常的病理過程。miRNA在肝纖維化發(fā)病機(jī)制中起著重要作用[37]：miRNA-942在活化肝星狀細(xì)胞中呈高表達(dá)，且在慢性乙型肝炎患者中，miRNA-942表達(dá)隨肝纖維化的進(jìn)展而增加，這提示miRNA-942可以作為一種評(píng)估肝纖維化分級(jí)的生物標(biāo)志物。同時(shí)，miRNA-942可與過氧化物酶體增生物激活受體(peroxisome proliferator-activated receptor，PPAR)γ 3′UTR直接結(jié)合，過表達(dá)或敲除miRNA-942后，相應(yīng)抑制或促進(jìn)PPARγ的表達(dá)。這提示，miRNA-942可能通過抑制PPARγ表達(dá)促進(jìn)肝星狀細(xì)胞活化，或可成為肝纖維化重要治療靶點(diǎn)。另一項(xiàng)研究[38]采用定量實(shí)時(shí)PCR法檢測(cè)150例丙肝患者和50名健康人群血清miRNA-21、miRNA-199、miRNA-448和miRNA-181c表達(dá)水平后發(fā)現(xiàn)：丙肝患者血清miRNA-21、miRNA-199、miRNA-448和miRNA-181c水平與健康人群相比有差異；在肝纖維化晚期丙肝患者中，血清miRNA-199表達(dá)顯著上調(diào)、miRNA-448表達(dá)顯著下調(diào)。這提示miRNA-199和miRNA-448可作為監(jiān)測(cè)肝纖維化進(jìn)展的生物標(biāo)志物。此外，孫浩男等[39]指出：lncRNA Malat1可與miRNA-195結(jié)合，miRNA-195可與Smad7結(jié)合。進(jìn)一步研究后證實(shí)：lncRNA Malat1可上調(diào)miRNA-195表達(dá)，影響Smad7表達(dá)，減弱Smad7對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1/Smads信號(hào)通路抑制作用，從而促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的活化、增殖。這說明miRNA-195與lncRNA Malat1和靶基因Smad7之間形成ceRNA，參與肝纖維化。

3.4 MiRNA與腎纖維化 腎纖維化是指受損腎組織被過度增殖和分化的成纖維細(xì)胞代替的一種病理改變。miRNA的發(fā)現(xiàn)為評(píng)估與治療腎纖維化提供全新視角。Chandrasekaran等[40]研究發(fā)現(xiàn)：miRNA-146a、miRNA-192d、miRNA-215的表達(dá)在腎組織中較在其他組織中顯著上調(diào)，其中miRNA-192d在腎皮質(zhì)中的表達(dá)水平是腎髓質(zhì)中的20倍。Bai等[41]使用單側(cè)輸尿管梗阻誘導(dǎo)小鼠腎纖維化后發(fā)現(xiàn)： 使miRNA27b-3p過表達(dá)后，平滑肌肌動(dòng)蛋白、Ⅲ型膠原蛋白、纖連蛋白、纖維連接蛋白、Fas、caspase 8、caspase 3表達(dá)下降。雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miRNA27b-3p與STAT1 3′非編碼區(qū)存在互補(bǔ)序列，兩者結(jié)合后，STAT1表達(dá)下調(diào)。由此可知：miRNA27b-3p可通過下調(diào)STAT1、平滑肌肌動(dòng)蛋白和Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)減輕小鼠單側(cè)輸尿管梗阻導(dǎo)致的腎纖維化作用。Bao等[42]研究發(fā)現(xiàn)：抑制miRNA-21表達(dá)可通過阻斷PTEN/AKT信號(hào)通路阻止免疫球蛋白A腎病患者足細(xì)胞和腎小管細(xì)胞纖維化，從而逆轉(zhuǎn)免疫球蛋白A腎病的進(jìn)展。

4 總結(jié)與展望

綜上所述，miRNA是高度保守的非編碼單鏈RNA分子，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因表達(dá)，參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化，以及機(jī)體代謝等生命過程。目前miRNA在診斷和治療皮膚瘢痕、氣管瘢痕等增生性瘢痕和心肺肝腎纖維化疾病中取得巨大進(jìn)步，有望成為高特異性生物標(biāo)志物和評(píng)估療效新靶標(biāo)。但研究亦表明，miRNA的表達(dá)具有組織功能特異性、個(gè)體發(fā)育時(shí)序性的差異，而調(diào)控的基因不同，作用機(jī)理不同，導(dǎo)致miRNA的生物功能不同，且其與非編碼 lncRNA、circRNA之間相互作用形成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，這些均給miRNA的研究帶來更多的挑戰(zhàn)。因此，研究miRNA時(shí)應(yīng)根據(jù)其在不同細(xì)胞、組織層面，以及個(gè)體所處的發(fā)育不同階段，從多個(gè)層面和維度全面地揭示miRNA復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)制，為研究疾病的發(fā)生和發(fā)展提供一種新的方向和思路。