電針大腦中動(dòng)脈閉塞模型大鼠血清減輕體外新生乳鼠神經(jīng)細(xì)胞的缺糖低氧損傷的作用研究

李笑笑，李姝潔，董健健，韓永升，3

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，安徽 合肥 230012；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)神經(jīng)病學(xué)研究所，安徽 合肥 230038；3.安徽省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，安徽 合肥 230031)

缺血性腦卒中主要是由血管阻塞導(dǎo)致大腦特定區(qū)域的血液供應(yīng)減少而引發(fā)，其病理生理涉及一系列有害級(jí)聯(lián)信號(hào)的激活，包括興奮性毒性損傷、氧化和亞硝化應(yīng)激、神經(jīng)炎癥等[1]。重組組織型靜脈纖溶酶原激活劑阿替普酶(recombinant tissue type plasminogen activator，rt-PA)溶栓和機(jī)械取栓是當(dāng)前治療缺血性腦卒中的兩大主要策略，但二者均有一定的局限性，臨床獲益者較少[2-3]。

電針是傳統(tǒng)針刺與電流刺激的結(jié)合，其可通過(guò)多途徑、多靶點(diǎn)有效治療缺血性腦卒中[4-5]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，電針通過(guò)上調(diào)腦組織內(nèi)神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43(growth associated protein-43，GAP-43)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、突觸囊泡蛋白(synaptophysin，SYN)表達(dá)水平，下調(diào)勿動(dòng)蛋白A(neurite outgrowth inhibitor-A，Nogo-A)表達(dá)水平，促進(jìn)局灶性腦梗死大鼠神經(jīng)和運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)[6-8]，對(duì)神經(jīng)血管單元有保護(hù)作用[9]，且該作用與激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路密切相關(guān)[10]。“針刺血清”是受“中藥血清學(xué)”的啟發(fā)，為克服體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的局限性而提出的一種新的研究思路?！搬槾萄濉敝傅氖菍⑨槾烫幚砗蟛杉难遄鳛樾?yīng)物質(zhì)加入另一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)中，同體內(nèi)或體外器官、組織、細(xì)胞或分子等靶目標(biāo)接觸，通過(guò)它們功能或形態(tài)學(xué)的改變，直接地觀察針刺處理后產(chǎn)生的效應(yīng)[11]。現(xiàn)為進(jìn)一步驗(yàn)證電針對(duì)缺血性腦卒中的治療作用以及可能的作用機(jī)制，本研究以前期發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)，通過(guò)糖氧剝奪/復(fù)氧(oxygen-glucose deprivation and reoxygenation，OGD/R)構(gòu)建腦神經(jīng)細(xì)胞的體外缺血模型，并將采集的“電針血清”作為效應(yīng)物質(zhì)加入體外培養(yǎng)的皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞中，觀察“電針血清”對(duì)體外神經(jīng)細(xì)胞缺糖低氧損傷的作用及可能的作用機(jī)制，將體內(nèi)研究與體外驗(yàn)證相結(jié)合，從宏觀和微觀層面揭示針刺治療缺血性腦卒中的作用機(jī)制，為臨床治療提供新的理論依據(jù)。

1 材料

1.1 試劑 DMEM/F12培養(yǎng)基(批號(hào) AG29643149)：美國(guó)Hyclone公司；Neurobasal(批號(hào) 2239681)、胎牛血清(批號(hào) 2305262RP)、B-27 Supplement(50×)(批號(hào) 2060739)：美國(guó)Gibco公司；阿糖胞苷(批號(hào) 4091021)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)檢測(cè)試劑盒(批號(hào) BC0025)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)檢測(cè)試劑盒(批號(hào) BC0175)：北京索萊寶科技有限公司；兔抗Wnt1多克隆抗體(批號(hào) 251822)：成都正能生物；兔抗β連環(huán)蛋白(β-catenin)多克隆抗體(批號(hào) 8480)、兔抗神經(jīng)細(xì)胞核抗原(neuronal nuclear protein，NeuN)多克隆抗體(批號(hào) 24307)：美國(guó)CST公司；兔抗糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase,3β,GSK-3β)多克隆抗體(批號(hào) ab32391)：英國(guó)Abcam公司；辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L)(批號(hào) ZB-2301)：北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 試劑配制 神經(jīng)細(xì)胞種板液：DMEM/F12培養(yǎng)基+1%雙抗+10% Gibco胎牛血清，完全神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基：Neurobasal 49 mL+B-27添加劑(50×)1 mL+雙抗250 μL+L-谷氨酸15 mg。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 生物安全柜(BSC-1300 Ⅱ A2)：蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；CO2培養(yǎng)箱(GOLD-SIM W200IR)：美國(guó)SIM公司；熒光倒置相差顯微鏡(OLYMPUS CKX41)：日本Olympus公司；解剖顯微鏡(XTZ-D型)：上海光學(xué)儀器一廠；全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(Bio Tek Epoch2)：美國(guó)Biotek公司；電泳儀(Powerpac Basic)：美國(guó)伯樂公司；電針儀(G6805-2A)：上海華誼醫(yī)用儀器有限公司；一次性無(wú)菌針灸針(13 mm×0.18 mm)：吳江云龍醫(yī)療器械有限公司。

2 方法

2.1 “電針血清”的制備 選擇SPF級(jí)健康雄性SD大鼠36只，2～3月齡，體質(zhì)量250～300 g，購(gòu)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司[生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(魯)2019-0003]。大鼠于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房飼養(yǎng)，環(huán)境溫度為24～26 ℃，相對(duì)濕度為50%～60%，保持通風(fēng)，12 h光照，自由攝食、飲水，喂養(yǎng)7 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、電針組，每組12只。依據(jù)肖宗宇等電凝法[12]復(fù)制大腦中動(dòng)脈閉塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)大鼠模型。對(duì)照組僅打開顱骨不進(jìn)行電凝，模型組于模型復(fù)制后常規(guī)飼養(yǎng)，電針組于模型復(fù)制后以電針刺激“百會(huì)”“水溝”、雙側(cè)“三陰交”、雙側(cè)“內(nèi)關(guān)”穴，疏密波，2/100 Hz，2～4 V，留針30 min，連續(xù)7 d。7 d后采用10%水合氯醛(1 mL/kg)麻醉各組大鼠，無(wú)菌條件下腹主動(dòng)脈采血，靜置3 h，待血清充分析出后，3 000 r/min離心15 min，0.22 μm濾器過(guò)濾分裝，56 ℃滅活30 min，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 原代皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞的分離與培養(yǎng) 參考文獻(xiàn)[13]，將多聚賴氨酸工作液鋪六孔板，PBS洗板備用。超凈臺(tái)內(nèi)分離新生24 h內(nèi)SD大鼠乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞，采用胰酶消化，神經(jīng)細(xì)胞種板液終止消化，200目篩網(wǎng)過(guò)篩，濾液以800 r/min，離心5 min，棄上清，神經(jīng)細(xì)胞種板液重懸細(xì)胞3次，分別以1 800、2 000、2 500 r/min離心5 min，棄上清；最后以(1×106～1×107)/mL密度重懸細(xì)胞并接種于6孔板內(nèi)。待細(xì)胞貼壁后，采用完全神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基半量換液，以阿糖胞苷抑制非皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)。每2～3 d用完全神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基半量換液1次。7 d后，采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法鑒定神經(jīng)細(xì)胞。

2.3 實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)方法 將原代皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、“電針血清”組。模型組先以含對(duì)照組大鼠血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h，再以用無(wú)糖、無(wú)血清培養(yǎng)基置換，并于5% CO2、1% O2、94% N2、37 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h，2 h后將培養(yǎng)基更換成無(wú)血清含糖培養(yǎng)基，并于5% CO2、37 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，建立OGD/R模型。對(duì)照組先以含對(duì)照大鼠血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h，然后更換為無(wú)血清含糖培養(yǎng)基并置于5% CO2、37 ℃的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)?！半娽樠濉苯M先以含“電針血清”的培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h，再進(jìn)行糖氧剝奪2 h，最后復(fù)糖復(fù)氧24 h。

2.4 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

2.4.1 “電針血清”濃度的確定 將原代皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞分為對(duì)照組、“電針血清”組。對(duì)照組和“電針血清”組分別以無(wú)血清培養(yǎng)基，含5%、10%、15%、20%“電針血清”的培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h，然后各組進(jìn)行糖氧剝奪2 h后復(fù)糖復(fù)氧24 h處理。干預(yù)結(jié)束后，每組繼續(xù)加入培養(yǎng)液容積10%的細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(cell counting kit-8，CCK-8)溶液，并置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育1.5 h。孵育結(jié)束后，各組分別吸取100 μL的培養(yǎng)液于96孔板中，同時(shí)設(shè)置空白組即僅加入100 μL PBS。采用酶標(biāo)儀測(cè)定各組在450 nm處的吸光度(A)，并計(jì)算各組神經(jīng)細(xì)胞的生存率。神經(jīng)細(xì)胞生存率=[A(“電針血清”組)-A(空白組)]/[A(對(duì)照組)-A(空白組)]。通過(guò)比較各組神經(jīng)細(xì)胞的生存率確定“電針血清”干預(yù)的最適濃度。

2.4.2 MTT法檢測(cè)各組神經(jīng)細(xì)胞的存活率 將皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞接種于96孔板內(nèi)，待細(xì)胞貼壁后去除原培養(yǎng)液。依據(jù)不同干預(yù)方法處理后，MTT法檢測(cè)各組神經(jīng)細(xì)胞存活率。

2.4.3 TUNEL法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡率 將皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞接種于置有細(xì)胞爬片的6孔板內(nèi)，待細(xì)胞長(zhǎng)滿80%～90%時(shí)，吸棄原培養(yǎng)液，并按照分組依據(jù)進(jìn)行干預(yù)。干預(yù)結(jié)束后PBS清洗兩遍，多聚甲醛室溫固定20 min。嚴(yán)格按照TUNEL染色試劑盒說(shuō)明書步驟操作，最后在熒光顯微鏡下觀察攝片。使用Image J分析照片，采用Graphpad prism 9軟件作圖，神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)以TUNEL陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞與所有神經(jīng)細(xì)胞的比值表示。

2.4.4 乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)漏出水平和SOD活性、MDA水平的檢測(cè) 取各實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)液100 μL，依據(jù)LDH檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作，在酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度值；分別收集各組細(xì)胞，依據(jù)SOD檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作，在酶標(biāo)儀560 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度值，根據(jù)公式計(jì)算出各組細(xì)胞SOD活性；依據(jù)MDA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作，在酶標(biāo)儀450、532、600 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度值，根據(jù)公式計(jì)算出各組細(xì)胞MDA含量。

2.4.5 Western blot法檢測(cè)各組目的蛋白表達(dá)水平 收集各組細(xì)胞，加入PMSF和RIPA裂解液混合，冰浴搖床上裂解30 min，每10 min混勻一次。4 ℃、12 000 r/min離心30 min，取上清，加入蛋白上樣緩沖液后，立即采用100 ℃水浴加熱8 min，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。以BCA-微孔酶標(biāo)儀法檢測(cè)各組蛋白樣品濃度。以12%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白，然后將蛋白轉(zhuǎn)移到NC膜上。用含5%脫脂奶粉的PBST封閉液常溫?fù)u床封閉4 h或4 ℃搖床孵育過(guò)夜。用PBST于搖床洗滌3遍，與一抗抗體常溫?fù)u床孵育4 h或4 ℃搖床孵育過(guò)夜(β-actin 1∶1 000、Wnt1 1∶1 000、GSK-3β 1∶5 000、β-catenin 1∶1 000、NeuN 1∶1 000)，PBST緩沖液洗滌3次，將NC膜與二抗(1∶10 000)在室溫?fù)u床孵育1.5 h。使用ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒進(jìn)行曝光，運(yùn)用Image J軟件分析條帶灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參蛋白灰度值的比值作為該蛋白的表達(dá)量。

3 結(jié)果

3.1 “電針血清”對(duì)原代神經(jīng)細(xì)胞OGD/R后生存率的影響 CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，OGD/R后，15%“電針血清”組神經(jīng)細(xì)胞的存活率最高，其值為(3.19±0.14)%，與其他濃度血清干預(yù)下的存活率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。故以15%“電針血清”作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的體外干預(yù)濃度。見圖1。

注：與其他各濃度“電針血清”組比較，*P<0.05

3.2 “電針血清”對(duì)OGD/R誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的抑制作用 OGD/R后神經(jīng)細(xì)胞生存率顯著降低，而“電針血清”干預(yù)后，神經(jīng)細(xì)胞生存率顯著升高(P<0.05)。TUNEL染色結(jié)果提示，對(duì)照組僅有少量神經(jīng)細(xì)胞凋亡，模型組神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著增多，而“電針血清”組神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著減少(P<0.05)。結(jié)果提示“電針血清”對(duì)OGD/R誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡有顯著的抑制作用。見圖2。

注：A.對(duì)照組；B.模型組；C.“電針血清”組；藍(lán)色熒光代表所有細(xì)胞核，綠色熒光代表TUNEL陽(yáng)性核；與對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05

3.3 “電針血清”減輕OGD/R后神經(jīng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷作用 與對(duì)照組比較，模型組SOD活性顯著降低(P<0.05)，MDA、LDH含量增多(P<0.05)；與模型組比較，“電針血清”組SOD活性顯著升高(P<0.05)，MDA、LDH含量顯著減少(P<0.05)。以上結(jié)果表明，OGD/R后神經(jīng)細(xì)胞SOD活性下降，自由基增多，促進(jìn)MDA產(chǎn)生和LDH漏出，引發(fā)神經(jīng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷，而“電針血清”干預(yù)后可起到逆轉(zhuǎn)作用。見圖3。

注：A.對(duì)照組；B.模型組；C.“電針血清”組；與對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05

3.4 “電針血清”對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的作用 與對(duì)照組比較，模型組Wnt-1、GSK-3β、β-catenin、NeuN蛋白表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)，提示OGD/R誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞損傷，且Wnt/β-catenin信號(hào)通路被抑制；與模型組比較，“電針血清”組Wnt-1、β-catenin、NeuN蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)，GSK-3β表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)，提示“電針血清”激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路并減輕神經(jīng)細(xì)胞損傷。見圖4。

注：A.對(duì)照組；B.模型組；C.“電針血清”組；與對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05

4 討論

缺血性腦卒中引起腦組織損傷的分子機(jī)制復(fù)雜多樣，涉及多個(gè)損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生[14]。氧化應(yīng)激是腦卒中重要的生理病理機(jī)制，也是腦缺血再灌注損傷觸發(fā)級(jí)聯(lián)反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[15]。活性氧(reactive oxygen species，ROS)、活性氮(reactive nitrogen species，RNS)被證實(shí)是急性缺血性腦卒中組織損傷的重要遞質(zhì)[16]。MDA是ROS作用于脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化的終產(chǎn)物，也是反映氧化應(yīng)激最常用的生物學(xué)指標(biāo)[17]。腦卒中患者血漿MDA水平較健康人明顯升高[18]。LDH廣泛分布于各類細(xì)胞中，是穩(wěn)定的胞漿酶，當(dāng)細(xì)胞膜損傷時(shí)快速釋放到細(xì)胞外，常被用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞損傷或細(xì)胞死亡[19]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組SOD活性顯著降低，LDH、MDA水平顯著升高，細(xì)胞凋亡明顯增多，提示OGD/R誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激損傷并引發(fā)細(xì)胞凋亡。

針刺對(duì)缺血性腦血管病有著良好的治療效果，可通過(guò)改善腦血流、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性、減輕炎癥反應(yīng)、調(diào)控相關(guān)基因及蛋白的表達(dá)等多個(gè)途徑保護(hù)血管和神經(jīng)細(xì)胞[20]。以往對(duì)針刺效應(yīng)的研究大多通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)完成，并不能直觀表明針刺臨床有效性的作用機(jī)制?！搬槾萄濉备拍畹奶岢觯龠M(jìn)了針刺體外實(shí)驗(yàn)的發(fā)展。當(dāng)前“針刺血清”的研究范圍涉及多個(gè)系統(tǒng)，具有延緩衰老、抗感染、抗癌等臨床療效[21]。本實(shí)驗(yàn)在課題組前期研究的基礎(chǔ)上，將采集的“電針血清”加入體外皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)，以觀察“電針血清”的效應(yīng)。結(jié)果顯示，“電針血清”組干預(yù)后神經(jīng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平顯著降低，神經(jīng)細(xì)胞凋亡明顯減少，提示電針干預(yù)后產(chǎn)生的效應(yīng)物質(zhì)具有抗氧化應(yīng)激、抗凋亡的作用。相關(guān)研究[22-23]也發(fā)現(xiàn)，針刺在治療缺血性腦卒中過(guò)程中參與調(diào)控氧化還原分子信號(hào)通路，激活固有抗氧化酶系統(tǒng)，抑制ROS的過(guò)度生成，修復(fù)ROS攻擊的DNA、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)，抑制ROS通路引起的細(xì)胞凋亡和自噬?！搬槾萄濉睂?duì)多種體外神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均有積極影響，具有保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞、修復(fù)神經(jīng)系統(tǒng)損傷的作用[24]。ROS蓄積和Ca2+超載是缺血再灌注損傷病理學(xué)中相互交織的兩個(gè)主要因素，Ca2+超載可以通過(guò)多種機(jī)制引起ROS的增加，而ROS增多可以促進(jìn)肌漿網(wǎng)中Ca2+的釋放[25]。研究[26-28]表明，腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高，“針刺血清”干預(yù)不僅能降低正常神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，同時(shí)能減少缺血區(qū)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量?；诖?，筆者推測(cè)“電針血清”的某種活性成分可能是通過(guò)緩解Ca2+超載，進(jìn)而減輕神經(jīng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。

Wnt/β-catenin信號(hào)通路是當(dāng)前研究最多的經(jīng)典Wnt通路，β-catenin是調(diào)控該通路的關(guān)鍵部分[29]。Wnt/β-catenin信號(hào)通路與中樞神經(jīng)系統(tǒng)關(guān)系密切，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)血管化、血腦屏障形成和胚胎發(fā)育成熟的基礎(chǔ)，腦卒中發(fā)生后出現(xiàn)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的失調(diào)，激活該通路可促進(jìn)缺血損傷后神經(jīng)血管的修復(fù)[30]。NeuN是一種僅在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的蛋白質(zhì)，廣泛用于神經(jīng)細(xì)胞分化的免疫組織化學(xué)研究，常用來(lái)評(píng)估生理病理過(guò)程中神經(jīng)細(xì)胞的功能狀態(tài)[31]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白Wnt-1、GSK-3β、β-catenin、NeuN表達(dá)水平顯著降低，提示OGD/R引起Wnt/β-catenin信號(hào)通路的失調(diào)和神經(jīng)細(xì)胞損傷；而“電針血清”組Wnt-1、β-catenin、NeuN表達(dá)水平顯著升高，GSK-3β表達(dá)水平顯著降低，提示“電針血清”激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路并減輕神經(jīng)細(xì)胞損傷。該發(fā)現(xiàn)與課題組前期研究結(jié)果一致[10]。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)以“針刺血清”的理論研究方法為基礎(chǔ)，將電針治療后所得的效應(yīng)血清加入體外培養(yǎng)的原代皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)，排除體內(nèi)復(fù)雜的生化影響，在體外單一環(huán)境下觀察神經(jīng)細(xì)胞的改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，“電針血清”在一定程度上提高氧化應(yīng)激相關(guān)生物學(xué)指標(biāo)SOD的活性，降低MDA、LDH水平，減少神經(jīng)細(xì)胞損傷，具有抗氧化、抗凋亡作用，且該作用與激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)從體外微觀角度證實(shí)了電針的治療作用，但由于“電針血清”的有效成分復(fù)雜多樣，其具體的效應(yīng)物質(zhì)和作用靶點(diǎn)仍需要進(jìn)一步深入探究。