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    瑤藥皂布葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

    2022-01-27 05:28:22劉華東劉安韜盧月妹
    中國民族民間醫(yī)藥 2021年24期
    關(guān)鍵詞:蒽醌浸出物灰分

    張 婷 劉華東* 劉安韜 盧月妹

    1.廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院,廣西 南寧 530023;2.右江民族醫(yī)學(xué)院,廣西 百色 533000

    瑤醫(yī)藥是我國民族醫(yī)藥的重要組成部分,具有理論簡潔、簡單實用、療效確切、療法別具一格等特點[1-2]。皂布葉是瑤醫(yī)藥常用藥材之一,廣泛分布于廣西、廣東、云南等西南各省及自治區(qū),為鼠李科尼泊爾鼠李Rhamnusnapelensis(Wall.)Laws的全株,別名葉青、泡角等,民間用于祛風(fēng)除濕,利水消脹,主治風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、慢性肝炎、肝硬化腹水等病癥[3-4]。在瑤醫(yī)中具有祛風(fēng)除濕、行氣止痛的功效,用于崩閉悶(風(fēng)濕痛、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、播沖(跌打損傷)和碰腦(骨折)等病癥。皂布葉中主要成分為黃酮和蒽醌等多酚類化合物[5],劉安韜等[5]對皂布葉的研究表明,皂布葉有良好的抗痛風(fēng)作用。為了更好地開發(fā)和利用其資源,研究建立了瑤藥皂布葉藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),分別對水分、總灰分和浸出物進(jìn)行了測定,并采用紫外-可見分光光度法測定藥材中總蒽醌的含量,研究結(jié)果為完善皂布葉藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供技術(shù)依據(jù)。

    1 儀器與材料

    1.1 儀器 TU-1901紫外-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司);賽多利斯分析天平BSA8201(賽多利斯上海貿(mào)易有限公司);XS204電子天平(梅特勒-托利多國際貿(mào)易上海有限公司);KQ2200E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);DFT-100高速粉碎機(大德藥械有限公司);SX2-8-16型馬弗爐(上海力辰邦西儀器科技有限公司);HH-S2數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠); DHG-9055A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海吉眾儀器有限公司);98-I-b電熱套(天津泰斯特儀器有限責(zé)任公司)。

    1.2 藥品與試劑 1,8-二羥基蒽醌(批號:110829-9702,中國食品藥品檢定研究院);醋酸鎂、95%乙醇、無水乙醇、甲醇和氯仿等均為分析純。

    12批次皂布葉樣品采收于廣西武鳴縣,靖西縣等地,干燥粉碎后備用。詳見表1。

    表1 皂布葉樣品信息表

    圖1皂布葉植物圖

    圖2 皂布葉植物墨線圖(摘自《中國植物志》)

    2 方法與結(jié)果

    2.1 水分、總灰分和浸出物的測定

    2.1.1 測定方法 水分測定照《中國藥典》(2020年版)四部通則0832水分測定法“第二法”測定;總灰分測定照《中國藥典》(2020年版)四部通則2302灰分測定法“總灰分測定法”測定。文獻(xiàn)[4]表明,皂布葉中主要含有蒽醌和黃酮類化合物,極性相對較大,因此用水溶性浸出物和醇(95%乙醇)溶性浸出物來考察皂布葉中所含活性成分含量。照《中國藥典》(2020年版)四部通則2201浸出物測定法中熱浸法測定水溶性浸出物和醇溶性浸出物。

    2.1.2 測定結(jié)果 12批樣品的水分、總灰分和浸出物的測定結(jié)果見表2。根據(jù)測定結(jié)果,12批藥材水分?jǐn)M定為不得超過13%,總灰分?jǐn)M為不得超過6.0%,水溶性浸出物擬不低于15.0%,醇溶性浸出物含量擬為不低于12.0%。

    2.2 總蒽醌含量測定 皂布葉中主要成分為蒽醌類化合物[4],采用紫外-可見分光光度法,醋酸鎂-甲醇顯色,測定皂布葉中總蒽醌含量。

    2.2.1 蒽醌標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制(0.1037 mg/mL) 精密稱取10.37 mg 1,8-二羥基蒽醌,至100 mL量瓶,加甲醇適量溶解,用甲醇稀釋至刻度。

    2.2.2 醋酸鎂-甲醇溶液的配制(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%) 稱取2.50 g醋酸鎂溶于500 mL甲醇中,儲于棕色瓶中保存?zhèn)溆谩?/p>

    表2 皂布葉樣品水分、總灰分及浸出物測定結(jié)果 (n=3,%)

    2.2.3 樣品溶液的制備 取0.2 g樣品粉末,精密稱定,置100 mL錐形瓶中,精密量取50%甲醇50 mL,超聲(常溫)30 min,放冷,補足重量。過濾,精密量取25 mL濾液置蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,加 3.0 mol/L 鹽酸15 mL,水浴水解30 min,放冷,用乙酸乙酯10 mL分兩次萃取,合并萃取液蒸干,加甲醇溶解,轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶,加甲醇至刻度。精密量取1 mL至50 mL量瓶,加4 mL醋酸鎂-甲醇顯色,用甲醇稀釋至刻度。

    2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密量取蒽醌標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL置于 50 mL 容量瓶中,分別加入醋酸鎂-甲醇溶液至 4 mL,搖勻顯色,加甲醇至刻度,以試劑空白為參比,在230 nm 處測定吸光度(A)。以1,8-二羥基蒽醌濃度(C)為橫坐標(biāo)(mg/mL),吸光度(A)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并擬合回歸方程。如圖3所示。從圖3可知,得醋酸鎂-甲醇法測定蒽醌的回歸方程為:A=0.78C+0.0419,R2=0.9962,在0.002074~0.01037 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

    圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與回歸方程圖

    2.2.5 樣品含量測定 對12個批次皂布葉樣品(1~12號)進(jìn)行干燥粉碎后,采用“2.2.3”進(jìn)行供試品溶液的配制,照紫外-可見分光光度法,在230 nm波長下測定其吸光度,以標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算其含量。結(jié)果見表3。

    由表3可知,皂布葉中總蒽醌的含量最高可達(dá)52.44 mg/g,最低為23.08 mg/g,平均含量為 37.64 mg/g;對照藥材采收表,皂布葉藥材在9~10月份含量達(dá)到較高值,隨著植物開花結(jié)果,全株藥材的蒽醌物質(zhì)含量有下降趨勢,一般在1~2月降到最低。皂布葉藥材總蒽醌含量擬不低于20.0 mg/g。

    表3 12個批次皂布葉樣品總蒽醌含量

    3 討論

    3.1 研究基礎(chǔ) 作者前期對皂布葉藥材進(jìn)行了性狀和顯微鑒別研究[7],研究表明皂布葉藥材莖表面有大量皮孔,葉含色素類物質(zhì),干燥后呈灰黑色。皂布葉藥材的莖髓薄壁細(xì)胞壁有念珠狀增厚并有紋孔,藥材粉末中含有豐富的石細(xì)胞和草酸鈣簇晶,為藥材性狀和顯微鑒別提供了依據(jù),本研究進(jìn)一步補充了藥材質(zhì)量研究數(shù)據(jù)。

    3.2 藥材檢查數(shù)據(jù)的確定 皂布葉樣品之間的水分、總灰分、浸出物和含量測定結(jié)果有一定的差異,與樣品的采收時間有一定的關(guān)系。根據(jù)測定結(jié)果,12批樣品的質(zhì)量較穩(wěn)定,考慮到廣西氣候較為濕潤,故建議將藥材水分?jǐn)M定為不得過13.0%;總灰分不得高于6%,水浸出物和醇浸出物不得低于15%和12%。

    3.3 含量測定方法考察 皂布葉中化學(xué)成分以多酚類為主,其中的蒽醌類成分顯示出良好的抗炎,抑菌和抗氧化等[8-11]和抗痛風(fēng)活性[6]。因此,針對藥材中總蒽醌建立測定方法,并對樣品制備方法進(jìn)行考察,包括超聲提取的溫度,時間和提取溶劑及顯色應(yīng)用等,最終確定提取條件為常溫超聲50%甲醇提取30 min,藥材取樣0.2 g時,用醋酸鎂顯色劑4 mL。12個批次皂布葉藥材的總蒽醌含量在23.08~52.44 mg范圍內(nèi),建議皂布葉藥材總蒽醌含量應(yīng)不少于20.0 mg/g;

    3.4 測定方法存在的問題 采用紫外-可見分光光度法進(jìn)行含量測定具有較好的專屬性和廣泛的應(yīng)用范圍,在確定吸收波長條件下可以實現(xiàn)快速偵測。但由于光譜法本身的條件限制,測定樣品的濃度過高會影響測定的準(zhǔn)確度,另外會有同吸收峰的物質(zhì)所干擾,影響準(zhǔn)確度。高效液相色譜(HPLC)主要利用物質(zhì)理化性質(zhì)上的差異進(jìn)行分離和定量測定。HPLC專屬性強,準(zhǔn)確度更高,但在含量測定中,對樣品的組分的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)的明確性要求較高,測定成分更明確,所需時間長。研究主要針對皂布葉藥材中蒽醌類成分進(jìn)行測定,而不是單體成分,測定方法便捷,結(jié)果穩(wěn)定可靠,可以作為皂布葉藥材質(zhì)量控制的方法。在以后的研究中,課題組將進(jìn)一步深入研究該藥材的藥效成分,建立專屬性更強的測定方法。

    綜上所述,研究在前期研究基礎(chǔ)上增加了皂布葉藥材的水分、總灰分和浸出物等檢查項,建立了測定藥材總蒽醌含量的方法,完善了皂布葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),可為該藥材的全面質(zhì)量控制提供依據(jù)。

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