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    血清 LXA4、Tim-1、NF-κB 表達(dá)變化在過敏性紫癜早期診斷及病情評估中的應(yīng)用價值

    2022-01-10 11:30:36譚微鄒佳麗陳婷劉文麗周瓊楊金婷唐艷
    關(guān)鍵詞:紫癜尿蛋白過敏性

    譚微,鄒佳麗,陳婷,劉文麗,周瓊,楊金婷,唐艷

    (攀枝花市中心醫(yī)院,四川 攀枝花 617067)

    過敏性紫癜是兒童時期較常見的變態(tài)反應(yīng)性疾病之一,臨床主要表現(xiàn)為非血小板減少性紫癜、關(guān)節(jié)腫痛、腹痛及腎臟受累等,隨病情發(fā)展可出現(xiàn)紫癜性腎炎,大多患兒預(yù)后良好,若患兒病情遷延,病理類型較為嚴(yán)重,可發(fā)展為慢性腎炎,嚴(yán)重者甚至可造成腎功能衰竭,威脅患兒生存質(zhì)量[1-4]。目前,過敏性紫癜確切病因、發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚,臨床多認(rèn)為在環(huán)境因素影響下,凝血纖溶功能異常、基因多態(tài)性、遺傳易感性及多種炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子廣泛參與下,機(jī)體細(xì)胞及體液免疫失衡誘發(fā)過敏性紫癜[5-6]。脂氧素(LX)A4作為一種內(nèi)源性抗炎脂質(zhì)介質(zhì),在炎性反應(yīng)消退過程中發(fā)揮重要作用[7-8];T細(xì)胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白(Tim)-1為輔助性T細(xì)胞(Th)1/Th2特異性表面標(biāo)志之一Tim家族成員,參與T細(xì)胞分化及免疫調(diào)節(jié)[9-10];核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB屬于Rel家族,可誘導(dǎo)趨化因子、細(xì)胞因子、黏附分子蛋白表達(dá),在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及急性期反應(yīng)中有重要作用[11-12]。本研究通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法檢測過敏性紫癜患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平,探討其對過敏性紫癜發(fā)病及病情進(jìn)展中的可能作用。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核同意,選取2017年5月—2019年4月我院初診過敏性紫癜患兒76例作為觀察組,均為首次發(fā)病,且病程在1周以內(nèi),未經(jīng)免疫抑制劑、腎上腺糖皮質(zhì)激素或抗組胺藥等藥物治療,參照《小兒過敏性紫癜診療指南》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[13],并經(jīng)臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查或病理活檢確診,排除同時合并皮肌炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、天皰瘡等自身免疫性疾?。话橛心[瘤或其他嚴(yán)重系統(tǒng)疾??;患有其他過敏性疾病;其中男35例,女41例,年齡3~13歲,平均(7.84±2.41)歲;病情程度:輕度26例,中度28例,重度22例。另選取同期來我院接受健康體檢的無自身免疫性疾病及家族史、無過敏性疾病史的健康兒童76例作為對照組,其中男37例,女39例,年齡3~14歲,平均(8.15±3.26)歲。2組在性別、年齡方面相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究受檢者及監(jiān)護(hù)人知情同意本研究。

    1.2 方法

    1.2.1 標(biāo)本采集 無菌條件下,所有受檢者均抽取3mL空腹外周靜脈血,置于普通離心管內(nèi),3000r/min,離心半徑為8 cm,離心5 min,血清置入Eppendorf管內(nèi),儲存于-80℃冰箱內(nèi)待檢。

    1.2.2 血清指標(biāo)監(jiān)測 采用雙抗體夾心ELISA檢測血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平,試劑盒購自上海西塘生物科技有限公司,嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作,并以酶標(biāo)測定儀(北京普析儀器有限責(zé)任公司)于波長450 nm處測定各個實(shí)驗(yàn)標(biāo)本光密度(OD)值,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)一步測量每個標(biāo)本細(xì)胞因子濃度水平。

    1.3 觀察指標(biāo) ①對比2組血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平;②采用受試者工作曲線(ROC)評估血清指標(biāo)對過敏性紫癜的診斷價值;③對比不同病情程度患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平;④Spearman分析血清指標(biāo)水平與過敏性紫癜患兒病情程度的相關(guān)性;⑤對過敏性紫癜患兒密切隨訪6個月,6個月時根據(jù)患兒是否存在腎臟受累分為紫癜腎組與非紫癜腎組,對比紫癜腎與非紫癜腎患兒血清指標(biāo)水平與24h尿蛋白定量;⑥Spearman分析血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平與24 h尿蛋白定量的相關(guān)性。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù),計(jì)數(shù)資料用 n(%)表示,卡方檢驗(yàn),計(jì)量資料用(±s)表示,t檢驗(yàn),采用Spearman進(jìn)行相關(guān)性分析,并以采用ROC分析診斷價值,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 2組血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平 觀察組血清 LXA4、Tim-1、NF-κB 水平高于對照組(P<0.05),見表1。

    表1 2組患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平對比 (±s)

    表1 2組患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平對比 (±s)

    組別 n LXA4(nmol/L) Tim-1(ng/L) NF-κB(μmol/L)觀察組 76 67.78±7.86 284.69±11.62 44.67±10.52對照組 76 53.21±6.85 122.41±14.85 18.36±8.94 t 12.183 75.028 16.614 P<0.001 <0.001 <0.001

    2.2 ROC評估血清指標(biāo)對過敏性紫癜的診斷價值分別繪制各指標(biāo)單一、聯(lián)合診斷過敏性紫癜的ROC曲線,顯示各指標(biāo)聯(lián)合診斷過敏性紫癜的曲線下面積(AUC)為 0.899(95%CI為 0.839~0.942),高于血清LXA4、Tim-1、NF-κB單一預(yù)測的AUC面積0.806(95%CI為 0.734~0.865)、0.774(95%CI為 0.699~0.838)、0.817(95%CI為 0.746~0.875),采取各指標(biāo)聯(lián)合診斷過敏性紫癜的敏感度為86.84%,特異度為80.26%。見圖 1、2。

    圖1 單一指標(biāo)診斷

    圖2 聯(lián)合指標(biāo)診斷

    2.3 不同病情程度患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平 不同病情程度過敏性紫癜患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

    表2 不同病情程度患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平對比 (±s)

    表2 不同病情程度患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平對比 (±s)

    組別 n LXA4(nmol/L) Tim-1(ng/L) NF-κB(μmol/L)輕度 26 59.63±7.12 224.96±11.26 34.29±9.87中度 28 66.24±8.12 280.37±13.95 42.31±10.17重度 22 79.37±8.51 360.74±14.16 59.94±11.34 F 37.940 637.064 37.230 P<0.001 <0.001 <0.001

    2.4 血清指標(biāo)水平與過敏性紫癜患兒病情程度的相關(guān)性 過敏性紫癜患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平與其病情程度呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05),見表3。

    表3 血清指標(biāo)水平與過敏性紫癜患兒病情程度的相關(guān)性

    2.5 紫癜腎與非紫癜腎組血清指標(biāo)水平與24 h尿蛋白定量 紫癜腎組血清LXA4水平低于非紫癜腎組,Tim-1、NF-κB、24 h 尿蛋白定量水平高于非紫癜腎組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表 4。

    表4 紫癜腎與非紫癜腎組血清指標(biāo)水平與24 h尿蛋白定量對比 (±s)

    表4 紫癜腎與非紫癜腎組血清指標(biāo)水平與24 h尿蛋白定量對比 (±s)

    2 4 h尿蛋白定量(m g)紫癜腎組 2 3 5 7.9 6±6.9 2 4 1 9.3 7±1 3.2 5 4 7.8 9±8.0 2 1 8 4 8.6 2±2 6 0.8 7非紫癜腎組 5 3 7 2.0 4±8.1 6 2 2 6.2 4±1 2.5 9 4 3.2 1±7.3 5 6 2 5.9 7±2 7 7.8 6 t 7.2 1 8 6 0.4 7 6 2.4 8 1 1 7.9 4 2 P<0.0 0 1 <0.0 0 1 0.0 1 5 <0.0 0 1組別 n L X A 4(n m o l/L)T i m-1(n g/L)N F-κ B(μ m o l/L)

    2.6 血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平與24 h尿蛋白定量的相關(guān)性 紫癜腎患兒血清LXA4水平與24 h尿蛋白定量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.474,P<0.001),Tim-1、NF-κB水平均與24 h尿蛋白定量呈正相關(guān)關(guān)系(r1=0.591,r2=0.575,P<0.001)。見圖 3~5。

    圖3 LXA4水平與24 h尿蛋白定量相關(guān)性

    圖4 Tim-1水平與24 h尿蛋白定量相關(guān)性

    圖5 NF-κB水平與24 h尿蛋白定量相關(guān)性

    3 討論

    過敏性紫癜作為一種侵犯皮膚及其他器官毛細(xì)血管、細(xì)小動脈的非血小板減少性過敏性血管炎,好發(fā)于學(xué)齡前兒童,據(jù)相關(guān)調(diào)查顯示,約75%過敏性紫癜患兒為10歲以下兒童,嚴(yán)重影響兒童成長發(fā)育及生存質(zhì)量[14-15]。近年來,大量研究證明,免疫炎性反應(yīng)在過敏性紫癜發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用[16-17]。

    LXA4屬于LXs家族成員,大量研究表明,其在支氣管肺炎、關(guān)節(jié)炎、腎臟疾病等多種疾病發(fā)病及病情進(jìn)展中發(fā)揮重要抗炎及促炎消退作用[18-19]。本研究亦顯示,過敏性紫癜患兒血清LXA4水平高于對照組,且隨病情加重,血清LXA4水平隨之升高,提示過敏性紫癜患兒血管炎性反應(yīng)過程中,LXA4合成原料花生四烯酸代謝異常增加,致使血清中LXA4水平升高。紫癜性腎炎主要病理變化為腎小球毛細(xì)血管壁及系膜區(qū)大量沉積以免疫球蛋白(Ig)A為主的免疫復(fù)合物,進(jìn)而引起血管炎性反應(yīng)變化,造成蛋白尿及血尿。本研究中紫癜腎患兒血清LXA4水平低于非紫癜腎患兒,提示紫癜腎病程中抗炎介質(zhì)LXA4合成不足與患兒腎臟損傷發(fā)生密切相關(guān),提示LXA4的抗炎機(jī)制可能減輕紫癜腎的腎臟損傷程度,監(jiān)測其水平變化有助于預(yù)測過敏性紫癜患者腎臟損害。

    Tim-1作為Tim基因家族重要成員,其分子可選擇性表達(dá)在CD4+T細(xì)胞表面,主要表達(dá)在分化后的Th2細(xì)胞上,結(jié)合配體后,可誘導(dǎo)Th2活化增殖,促進(jìn)細(xì)胞因子釋放、誘導(dǎo)Th2型免疫應(yīng)答,其可通過某種途徑調(diào)控免疫系統(tǒng),有免疫調(diào)節(jié)作用。大量研究指出,過敏性紫癜患兒細(xì)胞、體液免疫失衡,主要表現(xiàn)為免疫功能低下,而T淋巴細(xì)胞作為參與細(xì)胞免疫的主要細(xì)胞,與過敏性紫癜發(fā)生、發(fā)展有一定相關(guān)性[20-21]。本研究中,觀察組患兒血清Tim-1水平明顯高于對照組,且隨患兒病情程度增加,其水平隨之升高,提示Tim可能參與過敏性紫癜發(fā)生、發(fā)展過程。另有研究表明,過敏性紫癜患兒體內(nèi)存在T細(xì)胞功能紊亂,Th2優(yōu)勢活化、Th1/Th2失衡,促進(jìn)IgA、IgE過度分泌,從而介導(dǎo)紫癜性腎炎[22]。本研究中紫癜腎患兒血清Tim-1水平明顯高于非紫癜腎,且Tim-1表達(dá)水平與患兒24 h尿蛋白定量呈正相關(guān)關(guān)系,充分證實(shí)上述觀點(diǎn),說明Tim-1可作為判斷過敏性紫癜患兒預(yù)后的預(yù)警指標(biāo)。

    NF-κB被認(rèn)為是炎性反應(yīng)中心環(huán)節(jié),參與炎性細(xì)胞因子表達(dá)及炎性反應(yīng)延續(xù)、擴(kuò)大。本研究檢測過敏性紫癜患兒血清NF-κB水平,發(fā)現(xiàn)觀察組血清NF-κB水平高于對照組,且血清NF-κB水平與患兒病程程度呈正相關(guān)關(guān)系,推測NF-κB參與過敏性紫癜小血管炎性反應(yīng),且其表達(dá)與疾病嚴(yán)重程度有關(guān)。金汶等[23]提出,NF-κB可通過調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子分泌及細(xì)胞分化協(xié)同參與過敏性紫癜發(fā)病過程。進(jìn)一步研究表明,NF-κB作為細(xì)胞內(nèi)的一種重要核轉(zhuǎn)錄因子,可通過調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞發(fā)育、成熟、抗原提呈及刺激Th細(xì)胞分化等功能參與過敏性紫癜發(fā)病過程[24]。本研究通過對比紫癜腎與非紫癜腎NF-κB水平,發(fā)現(xiàn)紫癜腎患兒血清NF-κB水平高于非紫癜腎患兒,且與24 h尿蛋白定量水平呈正相關(guān)關(guān)系,推測原因可能是NF-κB水平越高,促使白細(xì)胞介素(IL)-1B、腫瘤壞死因子(TNF)-α、IL-6、IL-8等多種細(xì)胞因子分泌增加,致使炎性反應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大,最終導(dǎo)致更為嚴(yán)重的腎小球炎性損傷改變。提示監(jiān)測過敏性紫癜患兒NF-κB水平,有助于預(yù)測患兒腎臟損傷。

    此外,本研究通過ROC評估血清LXA4、Tim-1、NF-κB對過敏性紫癜的診斷價值,發(fā)現(xiàn)血清LXA4、Tim-1、NF-κB聯(lián)合診斷過敏性紫癜的AUC為0.899(95%CI為0.839~0.942),明顯高于單一指標(biāo)診斷,敏感度為86.84%,特異度為80.26%,提示臨床同時監(jiān)測血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平,有助于提高過敏性紫癜診斷價值,為臨床治療提供依據(jù)。

    綜上,過敏性紫癜患兒血清 LXA4、Tim-1、NF-κB呈異常高表達(dá)狀態(tài),表達(dá)水平隨患者病情加重而升高,且在過敏性紫癜早期診斷及病情評估方面有重要價值。

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