鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素方法學(xué)確認(rèn)

李佳 王謀琛

摘要：目的： 建立鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)移的細(xì)菌內(nèi)毒素方法學(xué)確認(rèn)。方法：采用《中國(guó)藥典》細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法-凝膠法。結(jié)果：鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液稀釋最大濃度為0.625mg/ml時(shí)，對(duì)鱟試劑檢查無(wú)干擾作用。結(jié)論：鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液在實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)移后，按此方法進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法是可行的。

關(guān)鍵詞：鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液;細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法;干擾試驗(yàn)

【中圖分類號(hào)】R97 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2107-2306（2021）14-01

一、目的

根據(jù)《鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)【細(xì)菌內(nèi)毒素】檢查項(xiàng)下規(guī)定，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)移的細(xì)菌內(nèi)毒素方法學(xué)確認(rèn)，確定樣品對(duì)不同廠家鱟試劑的最小不干擾倍數(shù)或最大不干擾濃度，以及樣品日常檢驗(yàn)的稀釋倍數(shù)或稀釋濃度。

二、試驗(yàn)方案：

1、試驗(yàn)依據(jù)：《鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

《中國(guó)藥典》細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法-凝膠法

2、限值：L=0.6 EU/mg

3、方法：選擇兩個(gè)廠家的鱟試劑分別進(jìn)行鱟試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)、干擾試驗(yàn)、細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)，試驗(yàn)溫度：37±1℃，試驗(yàn)保溫時(shí)間60±2min。

4、儀器和試藥：

恒溫水浴鍋、漩渦混合器、無(wú)熱原吸頭、移液槍、0.25 EU/ml鱟試劑（湛江安度斯生物有限公司、福州新北生化工業(yè)有限公司）、細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET）（均為湛江安度斯生物有限公司）、3批樣品（規(guī)格：100ml：左氧氟沙星0.5g與氯化鈉0.9g）。

三、試驗(yàn)操作及結(jié)果：

1、靈敏度復(fù)核試驗(yàn)

取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用BET水溶解稀釋，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加入兩廠家鱟試劑中，結(jié)果兩廠家鱟試劑靈敏度測(cè)定值λC均為0.25EU/ml，均在0.5～2.0λ之間，鱟試劑靈敏度復(fù)核合格，可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

2、干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)

2.1樣品有效稀釋（MVC）的計(jì)算

公式MVC=λ/L

其中：L為樣品限值L=0.6 EU/mg，λ為鱟試劑標(biāo)示靈敏度，取目前市售鱟試劑最小靈敏度λ=0.03EU/ml，確定最大稀釋倍數(shù)不得超過(guò)MVD=cL/λ0.03=100。

2.2試驗(yàn)操作

取細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，加樣品溶液稀釋，制成含2λ的供試品原液陽(yáng)性對(duì)照溶液;另取樣品，加BET水制成稀釋2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍的樣品溶液（NPC組1、NPC組2），分別取原液、稀釋2倍、4倍、8倍、16倍、32倍的樣品溶液，分別加入1.0EU/ml內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，即得含2λ的稀釋2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍的樣品陽(yáng)性對(duì)照溶液（PPC組1、 PPC組2）。采用兩個(gè)廠家的鱟試劑分別進(jìn)行試驗(yàn)，同時(shí)加BET水作陰性對(duì)照（NC），加2λ濃度內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液作陽(yáng)性對(duì)照（PC），結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1可見(jiàn)，樣品1的最大不干擾濃度為0.625mg/ml，在該濃度下樣品對(duì)鱟試劑檢查無(wú)干擾作用，可進(jìn)行正式干擾試驗(yàn)。

3、干擾試驗(yàn)

取3批樣品，根據(jù)干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，將樣品稀釋終濃度為0.625mg/ml做為3批樣品溶液。分別用兩廠家鱟試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn)，將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用0.625mg/ml樣品溶液溶解稀釋，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度平行做4管，作為干擾試驗(yàn)系列（Et系列）;另將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用BET水溶解稀釋，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度平行做4管，作為鱟試劑標(biāo)示靈敏度的對(duì)照系列（Es系列）;2管作為供試品溶液檢查（S），另外2管作為陰性對(duì)照（NC），結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可見(jiàn)，ES=0.25，在0.5λ～2.0λ之間，Et也在0.5 ES～2.0 ES之間，認(rèn)為樣品在該濃度時(shí)對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無(wú)干擾作用，符合細(xì)菌內(nèi)毒素檢查有效性的要求，可以確定樣品的最大不干擾濃度為0.625mg/ml。

4、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

取樣品3批，分別加BET水稀釋成濃度為0.625mg/ml的溶液，進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，結(jié)果樣品和陰性對(duì)照均為陰性，樣品陽(yáng)性和陽(yáng)性對(duì)照均為陽(yáng)性，表明實(shí)驗(yàn)有效。樣品管均為陰性，表明3批樣品中均未檢出細(xì)菌內(nèi)毒素，與干擾試驗(yàn)結(jié)果一致。

四、結(jié)論：

經(jīng)以上試驗(yàn)結(jié)果確定，樣品在最大不干擾濃度為0.625mg/ml的濃度下對(duì)兩個(gè)廠家鱟試劑不干擾。實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)移后，鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液按此方法進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)和質(zhì)量控制是可行的。

參考文獻(xiàn)：

[1]《中國(guó)藥典》細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法

[2]《中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法