津島鏈霉菌JT-2F對三七根腐病菌的抑制作用

宋利沙 蔣妮 張占江 陳乾平 馮世鑫

摘要：【目的】明確津島鏈霉菌JT-2F對三七根腐病菌的抑制作用，為三七根腐病的生物防治提供理論依據(jù)?！痉椒ā坎捎闷桨遛卓购蜑V紙條法測定津島鏈霉菌（Streptomyces tsukiyonensis）菌株JT-2F對三七根腐病菌和3種三七葉部病害病原菌的的抑制作用，并采用離體塊根刺傷接種法測定菌株JT-2F對三七根腐病菌的防治效果;利用酶聯(lián)免疫分析（ELISA）法測定菌株JT-2F發(fā)酵液中蛋白酶、纖維素酶和幾丁質(zhì)酶等酶活性。【結(jié)果】菌株JT-2F對三七根腐病菌具有較強的拮抗作用，其抑菌率達76.47%，對3種三七葉部病害病原菌也有明顯的抑制效果，抑菌率均超過80.00%。菌株JT-2F的發(fā)酵液對病原菌菌絲有明顯的抑制作用，使菌絲體畸形、膨大變粗，并呈串珠形狀。產(chǎn)酶能力測定結(jié)果顯示，菌株JT-2F可分泌幾丁質(zhì)酶、蛋白酶和纖維素酶，可破壞病原菌菌絲體，并抑制病原菌生長。離體防效試驗結(jié)果顯示，菌株JT-2F發(fā)酵原液對離體三七塊根根腐病的防效達78.43%。【結(jié)論】津島鏈霉菌菌株JT-2F對三七根腐病菌有較好的抑制作用，具有較好的生防開發(fā)潛力。

關(guān)鍵詞： 三七;根腐病菌;津島鏈霉菌;抑制作用

中圖分類號： S435.672 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2021）08-2133-07

Inhibitory of antagonistic Streptomyces tsukiyonensis JT-2F to Fusarium solani of Panax notoginseng（Burk.） F.H. Chen

SONG Li-sha1， JIANG Ni1*， ZHANG Zhan-jiang1*， CHEN Qian-ping1， FENG Shi-xin1

（Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants， Nanning ?530023， China）

Abstract：【Objective】The inhibitory effect of Streptomyces tsukiyonensis JT-2F against Fusarium solani of Panax notoginseng（Burk.） F.H. Chen was clarified to provide theoretical basis for biological control of root rot of P. notoginseng. 【Method】The inhibition effect of S. tsukiyonensis JT-2F on F. solani and three P. notoginseng leaf disease pathogens was determined by plate antagonism and filter paper method， and the control effect of JT-2F strain on P. notoginseng root rot was determined by in vitro root tuft injury inoculation method， ?enzyme-linked immunoassay （ELISA） was used to determine the activities of protease， cellulase and chitinase in fermentation broth. 【Result】The results showed that JT-2F had a strong antagonistic effect on F. solani， and its inhibition rate reached 76.47%. The control effect of strain JT-2F on three JT-2F strains fermentation broth had obvious inhibitory effect on the pathogenic mycelium， which made the mycelium deformed， enlarged and thickened， and in a string ofbeads shape.JT-2F strain could secrete protease， cellulase and chitinase to destroy the mycelia and inhibit the growth of the pathogen. In vitro control effect test showed that JT-2F fermentation broth showed 78.43% control effect of in vitro P. notoginseng root rot. 【Conclusion】S. tsukiyonensis JT-2F strain can inhibit the growth of F. solani of P. notoginseng， and has potential in bio-control development.

Key words： Panax notoginseng（Burk.） F.H. Chen;Fusarium solani; Streptomyces tsukiyonensis;inhibiting effect

Foundation item： Guangxi Natural Science Foundation Joint Funding Cultivation Project（2019GXNSFAA245040）; The Fund for Local Science and Technology Development Guided by the Chinese Government（Guike ZY20198010）; Youth Science Fundation of Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants（Guiyaoji 201801）; Guangxi Botanical Garden Science and Technology Innovation Team Project （2019007）

0 引言

【研究意義】三七[Panax notoginseng （Burk.） F.H. Chen]為五加科人參屬多年生植物，是我國特有的大品種中藥材，主要分布于廣西和云南等地，具有散瘀止血、消腫定痛、降血脂等功效（國家藥典委員會，2020）。目前，根腐病是三七種植面臨的重要問題，主要集中在由鐮孢屬真菌（Fusarium spp.）引起的根腐病（董鮮等，2018;張晉豪等，2020），其發(fā)病原因復(fù)雜，防治難度較大。當(dāng)前三七根腐病的防治以化學(xué)藥劑為主，但長期使用化學(xué)農(nóng)藥易使病菌產(chǎn)生抗、耐藥性（丁中等，2001;張明亮等，2019），使防治效果下降，甚至對環(huán)境造成污染，產(chǎn)生的農(nóng)藥殘留也嚴(yán)重影響中藥材的質(zhì)量安全，危害人類健康。相比于化學(xué)防治技術(shù)，微生物防治植物病害因具有高效、安全、環(huán)保的優(yōu)點，已逐漸成為植物病害防治的重要方法之一，是目前國內(nèi)外研究重點，也是未來有機中藥材生態(tài)種植的發(fā)展趨勢?！厩叭搜芯窟M展】放線菌由于能產(chǎn)生大量結(jié)構(gòu)多樣的具有抗菌活性的抗生素，且存在于不同類型的土壤和水中，菌種資源更豐富，因而在生物防治的應(yīng)用中更為廣泛和有效（Lee and Hwang，2002;Jung et al.，2018）。目前，放線菌用于防治作物病害的研究已有較多報道。宗兆鋒等（2002）研究發(fā)現(xiàn)，從番茄葉片上分離獲得的放線菌對7種病原真菌（大麗輪枝菌、擴展青霉菌、膠孢炭疽病菌、灰葡萄孢菌、褐孢霉菌、粉紅聚端孢菌和梨狀毛霉菌）具有不同程度的抑制效果;董美玉等（2008）研究表明，從土壤中分離到的放線菌ZY105對黃瓜灰霉病菌的抑制效果最好，抑制率達85%;申哲等（2008）和涂璇等（2008）研究發(fā)現(xiàn)，淡紫灰鏈霉菌對番茄早疫病菌和灰霉病菌、柑桔炭疽病菌及黃瓜炭疽病菌等多種植物病原菌均有很好的拮抗作用;劉琴等（2020）研究表明，使用婁徹氏鏈霉菌SR-1102的100倍液灌根對番茄枯萎病的防治效果達72. 84%;牛紅杰等（2020）從黃瓜根際土壤分離得到1株小鏈霉菌，該菌對黃瓜枯萎病菌（尖孢鐮刀菌、茄病鐮刀菌和立枯絲核菌）具有一定的抑制作用;湯曼利（2020）研究表明，海洋放線菌梅久蘭鏈霉菌F28對海洋細(xì)菌副溶血弧菌和創(chuàng)傷弧菌均具有較強的抑制作用，并對其他8種病原菌具有廣譜抑菌活性。放線菌對中藥材根腐病抑制作用的研究有少量報道，強薇等（2014）研究發(fā)現(xiàn)，從人參根際土壤中篩選出的7株放線菌對人參根腐病的拮抗率達65.11%;杜用璽等（2020）研究表明，3株放線菌及其發(fā)酵液對丹參根腐病病原菌具有一定的抑制作用，其抑制率超過60%?！颈狙芯壳腥朦c】本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)1株放線菌津島鏈霉菌（Streptomyces tsukiyonensis）JT-2F對三七根腐病菌具有很強的拮抗作用（Song et al.，2020），但尚未就該菌對三七根腐病菌的抑制作用開展研究?！緮M解決的關(guān)鍵問題】采用平板拮抗和濾紙條法測定菌株JT-2F對三七根腐病菌和3種三七葉部病害病原菌的抑制作用，初步研究菌株JT-2F發(fā)酵液對三七根腐病菌的抑制作用，評價其對三七根腐病菌的抑制效果;在光學(xué)顯微鏡下觀察菌株JT-2F對三七根腐病菌抑制作用的影響;利用酶聯(lián)免疫分析（ELISA）法測定菌株JT-2F發(fā)酵液中蛋白酶、纖維素酶和幾丁質(zhì)酶活性，以驗證菌株JT-2F對三七根腐病菌的抑制作用;進一步開展離體塊根防效研究，從表觀上證明津島鏈霉菌菌株JT-2F對三七根腐病的防治作用，為三七根腐病的防控提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

1. 1. 1 供試菌株 供試三七葉部病害病原菌包括三七灰霉病菌（Botrytis cinerea）、三七黑斑病菌（Alternaria panax）和三七炭疽病菌（Colltetorrichum gloeosporioides），根部病害病原菌為三七根腐病菌（F. solani），均由廣西藥用植物園植物病理研究室保存提供。供試津島鏈霉菌JT-2F為廣西藥用植物園植物病理研究室保存鑒定的菌株，菌株登錄號MK368447。

1. 1. 2 培養(yǎng)基 采用高氏一號培養(yǎng)基培養(yǎng)放線菌。參考仇艷肖（2010）的方法，分別制備含幾丁質(zhì)、羧甲基纖維素鈉和酪蛋白的培養(yǎng)基，以檢測菌株是否具有幾丁質(zhì)酶、纖維素酶和蛋白酶的活性。幾丁質(zhì)培養(yǎng)基：膠體幾丁質(zhì)5.0 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01 g，KH2PO4 0.3 g，K2HPO4 0.7 g，ZnSO4 0.001 g，瓊脂20.0 g，H2O 1000 mL，pH 7.2～7.4。羧甲基纖維素鈉（CMC）培養(yǎng)基：CMC-Na 5.0 g，MgSO4·7H2O 0.1 g，（NH4）2SO4 0.5 g，K2HPO4 0.25 g，瓊脂20.0 g，H2O 1000 mL。酪蛋白培養(yǎng)基：取5.0 g脫脂奶粉加入到50 mL蒸餾水中，另稱1.5 g瓊脂溶于50 mL蒸餾水，將2種溶液分開滅菌，待冷至45～50 ℃時，將2種溶液混勻倒平板，即成牛奶平板。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 菌株JT-2F對三七根腐病菌及其葉部病害病原菌的抑制作用測定 采用平板對峙法測定菌株JT-2F對三七根腐病菌及其葉部病害病原菌的抑菌效果，采用濾紙條法復(fù)篩（張瑾等，2014）。平板對峙法：將直徑為0.5 cm的病原菌組織塊置入PDA培養(yǎng)基中心，在其兩側(cè)等距離處接種菌株JT-2F組織塊，以只接種病原菌為對照，每處理3個重復(fù);待對照長滿整個平皿時，測量菌落直徑，計算抑制率。抑制率（%）=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/對照菌落直徑×100。濾紙條法：對菌株JT-2F進行發(fā)酵，取直徑為5 mm的3個菌餅接種于裝有高氏一號液體培養(yǎng)基（100 mL）的三角瓶（250 mL）中，于28 ℃下180 r/min搖床培養(yǎng)3 d，制備種子液，然后按10%的接種量接種于裝有100 mL液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在28 ℃下180 r/min搖床培養(yǎng)7 d后，于10000 r/min離心15 min，用微孔濾膜（0.22 μm）過濾，制得上清液為無菌發(fā)酵液;在PDA培養(yǎng)基中心接種三七根腐病菌菌餅，在菌餅兩側(cè)等距離放置經(jīng)發(fā)酵液浸沒過的無菌濾紙條，以無菌水作對照，3次重復(fù);抑制率計算參照平板對峙法。

1. 2. 2 菌株JT-2F發(fā)酵液對致病菌的拮抗作用測定

發(fā)酵液的制備方法參考1.2.1濾紙條法。采用含毒介質(zhì)法測定發(fā)酵液對病原菌的抑制作用。取適當(dāng)比例發(fā)酵液與50 ℃左右的PDA培養(yǎng)基混勻，倒平板，用于拮抗病原菌試驗。用鑷子挑取三七根腐病菌和處理菌株菌落的菌絲，制玻片。在光學(xué)顯微鏡下分別觀察處理菌株和對照菌株菌絲體的形態(tài)特征，并拍照統(tǒng)計。

1. 2. 3 菌株JT-2F產(chǎn)酶能力測定 參照仇艷肖（2010）、劉洋等（2016）的方法進行菌株JT-2F產(chǎn)酶能力初篩。挑取菌株JT-2F菌塊分別置于幾丁質(zhì)、羧甲基纖維素鈉和酪蛋白培養(yǎng)基上，觀察有無透明圈產(chǎn)生，若產(chǎn)生透明圈，則表明有幾丁質(zhì)酶、纖維素酶和蛋白酶產(chǎn)生;采用酶聯(lián)免疫分析法測定產(chǎn)酶菌株制得的發(fā)酵液中各種酶活性（宋利沙等，2019）;用酶標(biāo)儀在450 nm波長處測定不同酶活的吸光度（OD），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測指標(biāo)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度或酶活。

1. 2. 4 菌株JT-2F對三七根腐病菌的離體防效試驗

采用刺傷接種法（方中達，1998）測定菌株JT-2F對離體三七塊根根腐病菌的防效。選取大小一致的3年生三七塊根，先用自來水沖洗干凈，75%酒精表面消毒后無菌水沖洗、晾干，置于超凈工作臺用無菌接種針在塊根上刺1個直徑為6 mm的圓形接種面，將拮抗菌株的發(fā)酵濾液原液和稀釋液（分別稀釋10、20、50、100和200倍）分別涂抹在傷口處，然后在傷口處接種三七根腐病菌菌餅（直徑7 mm），對照涂抹無菌水，每處理3次重復(fù)，5 d后測量并記錄病斑面積，計算防效。病斑面積和防效計算公式參考薛應(yīng)鈺等（2020）。

1. 3 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0計算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，并進行單因素方差分析（one-way ANOVA）。

2 結(jié)果與分析

2. 1 菌株JT-2F對三七根腐病菌的拮抗作用

從圖1和圖2可看出，菌株JT-2F對三七根腐病菌有明顯的抑制作用，抑菌率達76.47%（表1）。菌株JT-2F對三七葉部病害病原菌也有明顯的抑制效果，抑菌率均超過80.00%，其中對三七黑斑病菌的抑制率達87.06%，顯著高于對其他三七病害病原菌的抑菌率（P<0.05，下同）（表1），表明菌株JT-2F具有廣譜抑菌性。

2. 2 菌株JT-2F發(fā)酵液對三七根腐病菌菌絲的抑制作用

在光學(xué)顯微鏡下，觀察到受菌株JT-2F影響的三七根腐病菌菌絲生長畸形，菌絲膨大變粗，呈串珠形狀，而正常菌絲光滑、細(xì)直（圖3），表明菌株JT-2F發(fā)酵液對病原菌菌絲的抑制作用明顯。

2. 3 菌株JT-2F產(chǎn)酶能力測定結(jié)果

菌株JT-2F的產(chǎn)酶能力測定結(jié)果見圖4。圖4-A～圖4-C均有明顯的水解圈，表明菌株JT-2F分別能產(chǎn)生和分解培養(yǎng)基成分的3種酶，包括幾丁質(zhì)酶、纖維素酶和蛋白酶;取該菌株的無菌發(fā)酵液測定3種酶的活性，結(jié)果顯示，幾丁質(zhì)酶、纖維素酶和蛋白酶的活性分別為177.49、89.01和444.92 U/L。說明菌株JT-2F能產(chǎn)生纖維素酶、幾丁質(zhì)酶和蛋白酶等水解酶。

2. 4 菌株JT-2F對三七根腐病菌的離體防效測定結(jié)果

菌株JT-2F對三七根腐病菌的離體防效測定結(jié)果（表2和圖5）表明，隨著發(fā)酵液稀釋倍數(shù)的增加防效相應(yīng)降低，其中，發(fā)酵原液的防效最高，達78.43%，顯著高于其他液稀釋倍數(shù)處理，當(dāng)發(fā)酵液稀釋至50倍時防效降至55.10%，稀釋至100和200倍時防效分別下降至30.83%和26.29%，防治效果不理想。

3 討論

鏈霉菌能產(chǎn)生多種抗生素，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、工業(yè)和醫(yī)療衛(wèi)生行業(yè)，在植物病害生物防治方面也發(fā)揮著重要作用（薛應(yīng)鈺等，2020）。本課題組前期從腫節(jié)風(fēng)健康植株的根際土壤中分離得到1株鏈霉菌，經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定為津島鏈霉菌（Song et al.，2020），該菌對三七根腐病菌及其他三七葉部病害病原菌均具有較好的抑制作用。申哲等（2008）、涂璇等（2008）、顏霞等（2020）研究表明，淡紫灰鏈霉菌（S. lavendulae）gCLA4對番茄早疫病菌和灰霉病菌、柑桔炭疽病菌、黃瓜炭疽病菌、玉米彎孢病菌、小麥赤霉病菌、棉花枯萎病菌、辣椒疫病菌、小麥紋枯病菌、棉花立枯病菌、油菜菌核病菌、蘋果樹腐爛病菌及獼猴桃潰瘍病菌等多種植物病原菌均有很好的拮抗作用，具有較好的生防開發(fā)價值;胡夢君等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，放線菌菌株1331的10%和20%發(fā)酵稀釋液對南方根結(jié)線蟲2齡幼蟲48 h的校正死亡率分別達88.97%和100.00%，可有效抑殺南方根結(jié)線蟲，具有潛在生防價值;雷艷娟等（2020）從13種荒漠植物中分離出533株內(nèi)生放線菌，其中有74株鏈霉菌對尖孢鐮刀菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌等6種靶標(biāo)菌具有較好的抗菌活性;錢瑤等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，鏈霉菌IMS002的發(fā)酵液及其產(chǎn)生的化合物Borrelidin對尖孢鐮刀菌具有良好的抑菌效果和抑制活性;孫洪寶等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，生防鏈霉菌A02對西瓜枯萎病的防治效果達68.23%，且接種鏈霉菌A02可增加西瓜幼苗株高、莖粗、鮮重和干重。本研究結(jié)果表明，津島鏈霉菌菌株JT-2F對藥用植物三七根腐病具有良好的抑制作用和離體防效，但菌株JT-2F對三七根腐病菌的抗病分子機制、對其他種類三七根腐病病原菌抑菌效果，以及是否能促進植物生長發(fā)育等還需進一步探究。

放線菌能產(chǎn)生豐富的次生代謝產(chǎn)物，常能通過液體發(fā)酵產(chǎn)生拮抗活性物質(zhì)來誘導(dǎo)對植物病害的抗性。本研究中菌株JT-2F液體發(fā)酵原液使三七根腐病菌菌絲生長畸形，菌絲膨大變粗，呈串珠形狀，表明產(chǎn)生了抗生類物質(zhì)。此外，菌株JT-2F產(chǎn)酶能力測定結(jié)果顯示均有透明的水解圈，表明菌株JT-2F能分泌幾丁質(zhì)酶、纖維素酶和蛋白酶等水解酶。據(jù)文獻報道，菌株產(chǎn)生水解酶可破壞致病真菌的細(xì)胞壁，使其菌絲體結(jié)構(gòu)溶解死亡，從而達到防病的作用（仇艷肖，2010）。杜用璽等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，生防鏈霉菌屬zyzx-001菌株及其發(fā)酵液均可對丹參根腐病病原菌產(chǎn)生較強的抑制作用;郭景紅等（2020）研究表明，玫瑰黃鏈霉菌（Strempomyces roseoflavus）的代謝產(chǎn)物對多種重要的植物病原菌均具有較強的抑制作用，從發(fā)酵液提取誘抗粗蛋白，發(fā)現(xiàn)其可誘導(dǎo)黃瓜葉片中活性氧（ROS）的積累和多種氧化酶（過氧化物酶、超氧化物歧化酶和多酚氧化酶）等抗病相關(guān)酶活性的顯著提高，通過實時熒光定量PCR測定，發(fā)現(xiàn)誘抗粗蛋白還可誘導(dǎo)黃瓜葉片中PR-1a、PR-3、PR-9和NPR1等抗病相關(guān)基因上調(diào)表達;甄丹妹等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，玫瑰黃鏈霉菌菌株活性代謝產(chǎn)物可誘導(dǎo)黃瓜產(chǎn)生抗病性的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。本研究進行了菌株JT-2F發(fā)酵液對三七根腐病離體防效試驗及其產(chǎn)生細(xì)胞壁水解酶的初步研究，后續(xù)尚需在盆栽和田間等復(fù)雜環(huán)境中驗證鏈霉菌的生防效果，有關(guān)菌株JT-2F對病原真菌細(xì)胞壁破壞和菌絲體溶解機制等也有待深入研究。

4 結(jié)論

津島鏈霉菌菌株JT-2F對三七根腐病菌有較好的抑制作用，發(fā)酵原液對離體三七塊根根腐病具有良好的防治效果，并能產(chǎn)生多種抗菌活性物質(zhì)，具有較好的生防開發(fā)潛力。

參考文獻：

丁中，劉峰，王會利，吳春先，慕立義. 2001. 番茄灰霉菌的多重抗藥性研究[J]. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，32（4）： 452-456. [Ding Z，Liu F，Wang H L，Wu C X，Mu L Y. 2001. Studies on multiple fungicide resistance to Botaytis cinerea[J]. Journal of Shandong Agricultural University （Natu-ral Science），32（4）：452-456.] doi：10.3969/j.issn.1000-2324.2001.04.009.

董美玉，許鳳春，張玲玲，黃劍. 2008. 一株拮抗放線菌ZY105菌株發(fā)酵液抗菌譜及穩(wěn)定性的研究[J]. 貴州大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），25（6）： 652-655. [Dong M Y，Xu F C，Zhang L L，Huang J. 2008. The study of antimicrobial spectrum and stability of the fermentation extacts produced by actinomycete strain ZY105[J]. Journal of Guizhou University（Natural Sciences），25（6）：652-655.] doi：10.3969/j.issn.1000-5269.2008.06.026.

董鮮，馬曉惠，陳傳嬌，耿連用，楊志慧，魯榮昌，徐福榮. 2018. 三七根腐病尖孢鐮刀菌分離鑒定及致病作用研究[J]. 中藥材，41（1）： 8-12. [Dong X，Ma X H，Chen C J，Geng L Y，Yang Z H，Lu R C，Xu F R. 2018. The isolation and identification of Fusarium oxysporum and the study about its pathogenesis effect on Panax notoginseng[J]. Journal of Chinese Medicinal Materials，41（1）： 8-12.] doi： 10.13863/j.issn1001-4454.2018.01.002.

杜用璽，蔣靖怡，王鐵霖，孫楷，張燕，郭蘭萍. 2020. 拮抗丹參根腐病病原菌的丹參根際放線菌篩選研究[J]. 中國植保導(dǎo)刊，40（9）： 17-22. [Du Y X，Jiang J Y，Wang T L，Sun K，Zhang Y，Guo L P. 2020. Screening of antagonism rhizosphere actinomycetes on Salvia miltiorrhiza root rot[J]. China Plant Protection，40（9）：17-22.] doi：10.3969/j.issn.1672-6820.2020.09.003.

方中達. 1998. 植病研究方法[M]. 第3版. 北京： 中國農(nóng)業(yè)出版社：193-194. [Fang Z D. 1998. Research methods on plant diseases[M]. The 3rd Edition. Beijing：China Agriculture Press： 193-194.]

國家藥典委員會. 2020. 中華人民共和國藥典一部[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社：12-13. [China Pharmacopoeia Committee. 2020. Chinese pharmacopoeia，the first part[M]. Beijing：China Medicine Science and Technology Press：12-13.]

郭景紅，韓興，甄丹妹，孟慶芳，康占海，王冰，李亞寧，劉大群. 2020. 玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63誘抗粗蛋白對黃瓜的誘抗作用[J]. 中國生物防治學(xué)報，36（2）：272-279. [Guo J H，Han X，Zhen D M，Meng Q F，Kang Z H，Wang B，Li Y N，Liu D Q. 2020. Induced resistance of crude protein produced by Streptomyces roseoflavus Men-myco-93-63 to cucumber disease[J]. Chinese Journal of Biological Control，36（2）：272-279.] doi：10.16409/ j.cnki.2095-039x.2020.02.013.

胡夢君，胡先奇，劉沛，梁艷，楊艷梅. 2020. 放線菌菌株1331發(fā)酵工藝優(yōu)化及對南方根結(jié)線蟲的作用效果[J]. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)），35（2）： 213-220. [Hu M J，Hu X Q，Liu P，Liang Y，Yang Y M. 2020. Optimization of the fermentation conditions of actinomycete strain 1331 and its effects on Meloidogyne incognita[J]. Journal of Yunnan Agricultural University（Natural Science），35（2）：213-220.] doi：10.12101/j.issn.1004-390X（n）.20180 5023.

雷艷娟，夏占峰，曾紅，張利莉. 2020. 新疆13種荒漠植物根內(nèi)生放線菌多樣性及其抗菌活性篩選[J]. 塔里木大學(xué)學(xué)報，32（3）：1-13. [Lei Y J，Xia Z F，Zeng H，Zhang L L. 2020. Diversity and antimicrobial activity of the endophytic actinomycetes from the root of 13 desert plants in Xinjiang[J]. Journal of Tarim University，32（3）：1-13.] doi：10.3969/j.issn.1009-0568.2020.03.001.

劉琴，徐健，祁建杭，劉懷阿，李傳明，韓光杰，徐彬，陸玉榮，孫俊. 2020. 婁徹氏鏈霉菌SR-1102對番茄枯萎病的防效及根際微生物的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，36（5）：1133-1138. [Liu Q，Xu J，Qi J H，Liu H E，Li C M，Han G J，Xu B，Lu Y R，Sun J. 2020. Control effect of Streptomyces rochei SR-1102 on Fusarium wilt of tomato and the impact on rhizosphere microorganisms[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences，36（5）：1133-1138.] doi： 10. 3969/j.issn.1000-4440.2020.05.009.

劉洋，朱天輝，鄭磊，張靜，蘭浩洋，郭志斌. 2016. 一株內(nèi)生拮抗細(xì)菌的分離鑒定及其抗菌機理研究[J]. 植物保護，42（1）： 33-39.[ Liu Y，Zhu T H，Zheng L，Zhang J，Lan H Y，Guo Z B. 2016. Isolation，identification and antimicrobial mechanism of an endophytic antagonisitic bacterium[J]. Plant Protection，42（1）：33-39.] doi：10.3969/j.issn. 0529-1542.2016.01.006.

牛紅杰，荊玉玲，郭榮君，李世東. 2020. 具防病并提高植物耐旱功能的小鏈霉菌HS57的篩選[J]. 植物保護，46（3）：131-137. [Niu H J，Jing Y L，Guo R J，Li S D. 2020. Scree-ning of Streptomyces parvus HS57 with the biocontrol function and ability to enhance the plants tolerance to water shortage stress[J]. Plant Protection，46（3）：131-137.] doi：10.16688/j.zwbh.2019224.

錢瑤，潘園園，李二偉，賈慧慧，魏艷敏，劉鋼. 2020. 鏈霉菌IMS002的分類鑒定及其抗真菌活性物質(zhì)解析[J]. 微生物學(xué)報，60（1）：60-68. [Qian Y，Pan Y Y，Li E W，Jia H H，Wei Y M，Liu G. 2020. Classification of Streptomyces sp. IMS002 and identification of its antifungal metabolite[J]. Acta Microbiologica Sinica，60（1）：60-68.] doi：10. 13343/j.cnki.wsxb.20190094.

強薇，郭帥，張愛華，雷鋒杰，匙坤，王壯，王二歡，張連學(xué). 2014. 人參根際土壤中拮抗人參病害微生物的篩選[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，35（5）：76-81. [Qiang W，Guo S，Zhang A H，Lei F J，Shi K，Wang Z，Wang E H，Zhang L X. 2014. Screening antagonistic microorganisms against ginseng diseases from Panax ginseng rhizosphere soil[J]. Journal of South China Agricultural University，35（5）：76-81.] doi：10.7671/j.issn.1001-411X.2014.05.013.

仇艷肖. 2010. 黃瓜灰霉病高效拮抗菌的篩選鑒定及其作用研究[D]. 保定：河北師范大學(xué). [Qiu Y X. 2010. Scree-ning and identification of effective antagonistic bacteria against Botrytis cinerea of cucumber and its effects[D]. Baoding： Doctoral Dissertation of Hebei Normal University.]

申哲，黃麗麗，涂璇，程晶晶，康振生. 2008. 植物內(nèi)生放線菌活性物質(zhì)防治獼猴桃潰瘍病[J]. 中國生物防治學(xué)報，24（4）： 329-334. [Shen Z，Huang L L，Tu X，Cheng J J，Kang Z S. 2008. Control effect of kiwifruit bacterial canker by active metabolites from plant endophytic actinomycetes[J]. Chinese Journal of Biological Control，24（4）：329-334.] doi：10.16409/j.cnki.2095-039x.2008.04. 016.

宋利沙，蔣妮，藍(lán)祖栽，張占江，郭曉云. 2019. 腫節(jié)風(fēng)炭疽病拮抗真菌篩選及作用機理研究[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報，50（10）： 2214-2221. [Song L S，Jiang N，Lan Z Z，Zhang Z J，Guo X Y. 2019. Screening and mechanism of fungi antagonistic to Colletotrichum dematium of Sarcandra glabra（Thunb.）[J]. Journal of Southern Agriculture，50（10）：2214-2221.] doi：10.3969/j.issn.2095-1191.2019.10. 10.

孫洪寶，李茂營，吳慧玲，郭紹貴，張潔，任毅，張海英，宮國義，許勇. 2020. 生防菌鏈霉菌對西瓜枯萎病防治及幼苗生長的影響[J]. 科學(xué)技術(shù)與工程，20（13）： 5074-5079. [Sun H B，Li M Y，Wu H L，Guo S G，Zhang J，Ren Y，Zhang H Y，Gong G Y，Xu Y. 2020. Biocontrol and plant growth promoting effects of Streptomyces against Fusarium wilt in watermelon[J]. Science Technology and Enginee-ring，20（13）：5074-5079.] doi：10.3969/j.issn.1671-1815. 2020.13.008.

湯曼利，李舒馨，彭云，陳瑩瑩，王亞楠，馬桂，暴增海. 2020. 一株具有抑菌和氨氮降解功能的海洋放線菌篩選與鑒定[J]. 水產(chǎn)科學(xué)，40（4）：610-617. [Tang M L，Li S X，Peng Y，Chen Y Y，Wang Y N，Ma G，Bao Z H. 2020. Screening and identification of a marine actinomycete with antibacterial and ammonia-nitrogen degradation functions[J]. Fisheries Science，40（4）：610-617.] doi：10. 16378/j.cnki.1003-1111.20044.

涂璇，黃麗麗，高小寧，姚敏，劉巍，阿里馬斯，王美英，康振生. 2008. 黃瓜內(nèi)生放線菌的分離、篩選及其活性菌株鑒定[J]. 植物病理學(xué)報，38（3）： 244-251.[Tu X，Huang L L，Gao X N，Yao M，Liu W，Ali M S，Wang M Y，Kang Z S. 2008. Endophytic actinomycetes of cucumber： Isolation，antagonistic activity and identification[J]. Acta Phytopathologica Sinica，38（3）：244-251.] doi：10.13926/j.cnki.apps.2008.03.013.

薛應(yīng)鈺，李發(fā)康，李培，趙娜，徐秉良. 2020. 蘋果樹腐爛病菌拮抗放線菌JPD-1的篩選及鑒定[J]. 植物保護學(xué)報，47（1）：134-142. [Xue Y Y，Li F K，Li P，Zhao N，Xu B L. 2020. Screening and identification of antagonistic actinomycetes JPD-1 against the pathogen Valsa mali[J]. Acta Phytophylacica Sinica，47（1）：134-142.] doi：10.13802/j.cnki.zwbhxb.2020.2019041.

顏霞，武立清，李燕芳，黃麗麗. 2020. 淡紫灰鏈霉菌gCLA4壞死誘導(dǎo)蛋白基因的克隆表達及功能[J]. 微生物學(xué)通報，47（5）： 1452-1459.[Yan X，Wu L Q，Li Y F，Huang L L. 2020. Expression and characterization of necrosis-indu-cing protein from Streptomyces lavendulae gCLA4[J]. Microbiology China，47（5）：452-1459.] doi：10.13344/j.microbiol.china. 190212.

張瑾，張樹武，徐秉良，古麗君，薛應(yīng)鈺. 2014. 長枝木霉菌抑菌譜測定及其抑菌作用機理研究[J]. 中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報，22（6）： 661-667. [Zhang J，Zhang S W，Xu B L，Gu L J，Xue Y Y. 2014. Determining antifungal spectrum and mechanim of Trichoderma longibrachiatum in vitro[J]. Chinese Journal of Eco-Agriculture，22（6）： 661-667.] doi：10.3724/SP.J.1011.2014.31183.

張晉豪，楊俊，姬廣海，王彥芳，張榮琴，代真林，劉棋，魏蘭芳. 2020. 云南三七根腐病病原細(xì)菌的鑒定[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報，51（3）：586-592. [Zhang J H，Yang J，Ji G H，Wang Y F，Zhang R Q，Dai Z L，Liu Q，Wei L F. 2020. Bacterial pathogen identification of Panax notoginseng root rot in Yunnan Province[J]. Journal of Southern Agriculture，51（3）：586-592.] doi：10.3969/j.issn.2095-1191. 2020.03.014.

張明亮，張淼丹，閆新武，孫長江，顧敬敏，崔子寅，韓文瑜. 2019. 貂源銅綠假單胞菌耐藥性及生物學(xué)特性[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，48（5）： 122-129. [Zhang M L，Zhang M D，Yan X W，Sun C J，Gu J M，Cui Z Y，Han W Y. 2019. Resistance and biological characteristics of Pseudomonas aeruginosa from mink[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences，48（5）：122-129.] doi：10.15933 /j.cnki.1004-3268.2019.05.018.

甄丹妹，韓興，郭景紅，孟慶芳，李亞寧，劉大群. 2020. 玫瑰黃鏈霉菌活性代謝產(chǎn)物RM誘導(dǎo)黃瓜抗病性的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑[J]. 植物保護學(xué)報，47（2）： 332-338. [Zhen Z D，Han X，Guo J H，Meng Q F，Li Y N，Liu D Q. 2020. Signal transduction pathway of disease resistance induced by active metabolites RM of Streptomyces roseoflavus in cucumber[J]. Journal of Plant Protection，47（2）：332-338.] doi： 10.13802/j.cnki.zwbhxb.2020.2019060.

宗兆鋒，喬宏萍，何杞真. 2002. 2株重寄生菌的分離和對靶標(biāo)菌的抑制作用[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報，11（4）： 1-3. [Zong Z F，Qiao H P，He Q Z. 2002. Isolation of 2 strains of hyperparasite and its inhibiting effects on target pathogens [J]. Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica，11（4）： 1-3.] doi：10.3969/j.issn.1004-1389.2002.04.001.

Jung S J，Kim N K，Lee D H，Hong S I，Lee J K. 2018. Screening and evaluation of Streptomyces species as a potential biocontrol agent against a wood decay fungus Gloeophyllum trabeum[J]. Mycobiology，46（2）：138-146. doi：10.1080/12298093.2018.1468056.

Lee J Y，Hwang B K. 2002. Diversity of antifungal actinomycetes in various vegetative soils of Korea[J]. Canadian Journal of Microbiology，48（5）：407-417. doi：10.1139/w02-025.

Song，L S，Jiang N，Wei S G，Lan Z Z ，Pan L M. 2020. Isolation，screening，and identification of actinomycetes with antifungal and enzyme activity assays against Colletotrichum dematium of Sarcandra glabra[J]. Mycobiology，48（1）： 37-43. doi： 10.1080/12298093.2020.1716604.

（責(zé)任編輯 麻小燕）

收稿日期：2020-12-28

基金項目：廣西自然科學(xué)基金聯(lián)合資助培育項目（2019GXNSFAA245040）;中央引導(dǎo)地方科技發(fā)展專項（桂科ZY20198010）;廣西藥用植物園青年基金項目（桂藥基201801）;廣西藥用植物園科技創(chuàng)新團隊項目（2019007）

通訊作者：蔣妮（1979-），https：//orcid.org/0000-0001-8319-4338，副研究員，主要從事中藥材病蟲害防治研究工作，E-mail：jiangni292@126.com;張占江（1976-），https：//orcid.org/0000-0002-0497-529X，博士，副研究員，主要從事藥用植物高質(zhì)量栽培繁育工作，E-mail： zzj1811@163.com

第一作者：宋利沙（1987-），https：//orcid.org/0000-0002-4502-0879，博士，主要從事中藥材病蟲害防治研究工作，E-mail：lishasong@126.com