高效液相色譜法測(cè)定綽森哈倫-8 散中梔子苷的含量

包冉，張冬梅 ，魏穎軒，那松巴乙拉，寶山

（1 包頭市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，內(nèi)蒙古 包頭；2 內(nèi)蒙古自治區(qū)國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特）

0 引言

綽森哈倫-8 散由寒制紅石膏、木香、紫草、梔子、齒葉草、天竺黃、甘草、人工牛黃八味藥材組成[1,2]。臨床功效清訌熱，用于血熱頭痛，口渴目赤，中暑。梔子功能為瀉火除煩、清熱利濕。梔子是方中主要藥味之一，梔子苷是梔子的主要指標(biāo)性成分之一，參照《中國(guó)藥典》2015 年版一部“梔子”項(xiàng)下含量測(cè)定方法，采用高效液相色譜法對(duì)本品中的梔子進(jìn)行了含量測(cè)定方法研究[3-5]。

1 儀器與試藥

儀器U3000 型高效液相色譜儀；隔膜真空泵(鞏義市英峪儀器廠)；KQ-250DB 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Heal Force NW15UV 型超純水系統(tǒng)；ADVENTURERTM 型電子天平（萬(wàn)分之 一）；Ohaus Discovery 型電子天平（十萬(wàn)分之一）；FW400A 型多功能粉碎機(jī)（材茂科技有限公司）。

梔子苷對(duì)照品（批號(hào)：110749-201919），由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；供試品三批（批號(hào)：20190911、20190912、20190913），由內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院提供，自制樣品一批（20190911）；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

采用Alltima C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，以乙腈-水溶液(15 ∶85) 為流動(dòng)相進(jìn)行流動(dòng)相條件摸索，流速1.0ml/min，柱溫33℃，進(jìn)樣量10μl。梔子苷峰的理論塔板數(shù)均大于1500，與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5。

2.2 溶液配制

2.2.1 對(duì)照品溶液的配制

取梔子苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含73μg 的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理40min（功率250kW，頻率40kHz），放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得[6,7]。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取梔子苷對(duì)照品約7.3mg，精密稱定，置100ml 量瓶中，加純甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻(梔子苷實(shí)際濃度為：0.0734mg/ml)，然后吸取上述溶液1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、12μl、15μl、20μl 分別進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)梔子苷的進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果梔子苷在進(jìn)樣體積在1μl-20μl 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為，Y=1.35223X+0.07817，R2=0.99996。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)供試品（批號(hào)：20190911）6 份，各約0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法處理并測(cè)定梔子苷含量，6 份供試品梔子苷平均含量為4.2821mg/g，RSD 為1.4%，表明方法重復(fù)性良好。

2.5 穩(wěn)定性考察

取同一份供試品（批號(hào)：20190911）溶液，分別于0h、2h、4h、5h、6h、7h、8h 進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，不同時(shí)間測(cè)定的峰面積RSD 為1.52%，試驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液中梔子苷含量在8h 內(nèi)基本穩(wěn)定不變。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

取同一份供試品（批號(hào)：20190911）0.5008g，按供試品溶液的制備方法操作，連續(xù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定梔子苷峰面積積分值，測(cè)定供試品含量，RSD 為0.90%。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

取供試品（批號(hào)：20190911）9 份，均約0.25g，精密稱定，其中1、2、3 號(hào)各精密加入用甲醇配制的梔子苷對(duì)照品溶液(梔子苷濃度：0.1083mg/ml)5ml，4、5、6 號(hào)各精密加入上述對(duì)照品溶液10ml，7、8、9 號(hào)各精密加入上述對(duì)照品溶液15ml，分別按上述供試液制備方法和色譜條件測(cè)定每份含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 梔子苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.8 專屬性實(shí)驗(yàn)

陰性對(duì)照試驗(yàn)：按上述對(duì)照品和供試品溶液的制備方法制備供試品溶液和對(duì)照品溶液。另取按處方比例并以相同工藝制備的缺梔子的陰性對(duì)照，按供試品溶液制備法制得陰性對(duì)照溶液[8]。在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液、供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)得結(jié)果為：陰性對(duì)照色譜中在與梔子苷對(duì)照品以及供試品色譜相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分對(duì)梔子苷的測(cè)定無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖1、2、3。

圖1 對(duì)照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性對(duì)照色譜圖

3 樣品含量測(cè)定

取本品按供試品溶液的制備方法處理并測(cè)定，三批樣品及自制樣品的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品中梔子苷的含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

參照《中國(guó)藥典》2015 年版一部“梔子”項(xiàng)下的流動(dòng)相比例進(jìn)行流動(dòng)相條件摸索，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，分離效果好，色譜峰對(duì)稱，故將流動(dòng)相定為以乙腈-水溶液(15 ∶85)。