臨床微生物檢驗(yàn)中涂片檢查應(yīng)用的方法及效果

廖學(xué)峰

（湘潭市中心醫(yī)院，湖南 湘潭411413）

涂片檢查是臨床微生物檢驗(yàn)中常用的方法，首先對(duì)標(biāo)本實(shí)施細(xì)菌培養(yǎng)，然后進(jìn)行涂片檢查，并指導(dǎo)臨床用藥。但細(xì)菌培養(yǎng)對(duì)時(shí)間有一定要求，培養(yǎng)后實(shí)施涂片檢查，通常會(huì)影響疾病的治療，進(jìn)而加重病情[1]。近年來(lái)，有研究顯示，原始標(biāo)本涂片檢查在細(xì)菌培養(yǎng)及臨床微生物檢驗(yàn)中應(yīng)用效果明顯，同時(shí)，也可引導(dǎo)細(xì)菌培養(yǎng)涂片檢查[2]。本研究探究臨床微生物檢驗(yàn)中涂片檢查的應(yīng)用效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料隨機(jī)抽取本院2018年5月至2019年5月收集的120例標(biāo)本，其中檢出微生物116例，包括痰液標(biāo)本37例，膿液標(biāo)本24例，尿液標(biāo)本44例，胸腹水標(biāo)本11例。

1.2 方法通過(guò)壓片法制取標(biāo)本，同時(shí)，做好涂片處理工作，采用無(wú)菌消毒棉簽篩選原始標(biāo)本，并將其放置于0.9%氯化鈉溶液中，通過(guò)無(wú)菌針均勻混合標(biāo)本與0.9%氯化鈉溶液，酒精燈輔助加熱稀釋?zhuān)科胖煤笞匀伙L(fēng)干，然后進(jìn)行革蘭染色與抗菌染色，同時(shí)，進(jìn)行鏡檢，每張涂片能觀察視野10個(gè)，準(zhǔn)確記錄相關(guān)結(jié)果[3]。然后于沙氏平板或者血平板中畫(huà)線接種，培養(yǎng)溫度調(diào)整為35℃，二氧化碳濃度調(diào)整為5%～10%，進(jìn)行18～72 h溫育，培養(yǎng)液包括GN增菌液、蛋白膠水、SC增菌液、復(fù)蘇凍干菌種及肉湯溶解，培養(yǎng)環(huán)境溫度調(diào)整為37℃，進(jìn)行24～120 h共培養(yǎng)，直至菌種渾濁生長(zhǎng)，出現(xiàn)菌膜[4]。通過(guò)Siemens MicroScan WalkAway系統(tǒng)分析儀鑒別標(biāo)本中的致病菌、微生物和優(yōu)勢(shì)菌落等，微生物鑒別過(guò)程中，重點(diǎn)篩查涂片鏡檢中可觀察到的病原菌。采用由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供的儀器和相應(yīng)試劑；采用德國(guó)西門(mén)子公司生產(chǎn)的微生物鑒定儀及配套的鑒定板條[5]。

1.3 觀察指標(biāo)分析微生物檢出狀況及不同類(lèi)型合格標(biāo)本涂片與培養(yǎng)陽(yáng)性符合率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用百分率（%）表示。

2 結(jié)果

2.1 微生物檢出狀況分析120例標(biāo)本中，檢出微生物116例，其中占比最高的是革蘭陰性菌，占比為68.10%；其次為革蘭陽(yáng)性菌，占比18.97%，最后是真菌，占比為12.93%，見(jiàn)表1。

表1 微生物檢出狀況分析

2.2 不同類(lèi)型合格標(biāo)本涂片與培養(yǎng)陽(yáng)性符合率經(jīng)涂片檢查、細(xì)菌培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，腹水、膿液、尿液及痰液陽(yáng)性符合率分別為75.00%、90.91%、70.00%和76.92%，見(jiàn)表2。

表2 不同類(lèi)型合格標(biāo)本圖片與培養(yǎng)陽(yáng)性符合率分析

3 討論

目前，臨床上實(shí)施的涂片鏡檢是指將每種標(biāo)本涂成薄片后實(shí)施革蘭氏染色，聯(lián)合顯微鏡對(duì)微生物形態(tài)直接觀察，涂片鏡檢功能：鑒別診斷細(xì)菌；被視為選擇的藥物敏感性制片；標(biāo)本合格判定；臨床早期診斷；病原菌鑒別；細(xì)菌鑒定質(zhì)量；對(duì)腹瀉菌群是否失調(diào)進(jìn)行檢查等，具體分析如下：①鑒別細(xì)菌：通過(guò)該方法實(shí)施涂片檢查，可準(zhǔn)確鑒別細(xì)菌類(lèi)型，然后以細(xì)菌類(lèi)型為依據(jù)，判斷疾病類(lèi)型。如痰液標(biāo)本，如果檢出葡萄球菌，大部分是肺結(jié)核。膿腫、胸膜炎、泌尿系統(tǒng)感染等是因特殊形態(tài)細(xì)菌向機(jī)體入侵導(dǎo)致的感染。原始涂片檢查在疾病診斷中應(yīng)用價(jià)值較高，可及早診斷。②標(biāo)本合格判定：如果標(biāo)本不合格，易造成微生物檢查結(jié)果誤差，對(duì)疾病的早期診斷及治療造成影響。原始標(biāo)本涂片檢查期間，有革蘭染色步驟。該方法實(shí)施期間，相關(guān)人員能對(duì)鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行觀察。如果該細(xì)胞數(shù)量較多，且存在部分膿細(xì)胞，說(shuō)明標(biāo)本不合格，需重新提取材料。③細(xì)菌鑒別。通過(guò)原始標(biāo)本涂片檢查方法，進(jìn)一步提高細(xì)菌鑒別準(zhǔn)確性[6]。

本研究結(jié)果顯示，120例標(biāo)本中，總計(jì)檢出116例微生物，微生物檢出率為96.67%，其中，革蘭陰性菌、革蘭陽(yáng)性菌、真菌檢出率分別為68.10%、18.97%和12.93%，不同類(lèi)型的合格標(biāo)本涂片與培養(yǎng)陽(yáng)性符合率較高。表明，標(biāo)本培養(yǎng)前涂片檢查與培養(yǎng)結(jié)果密切相關(guān)，以上述結(jié)果為依據(jù)及早為臨床提供報(bào)告，明確患者感染信息，以便及早治療疾病，避免病情治療被延誤，在臨床用藥指導(dǎo)中具有重要作用。此外，因臨床微生物檢驗(yàn)中存在一定特殊性，從采集標(biāo)本至檢驗(yàn)結(jié)果獲取需2～3 d，且操作繁瑣、復(fù)雜，具體包括抗菌藥物敏感性試驗(yàn)、病原學(xué)診斷等。在此過(guò)程中，隨著疾病的發(fā)展，很可能導(dǎo)致細(xì)微改變，因此，在標(biāo)本送至實(shí)驗(yàn)室后，首先需實(shí)施染色鏡檢，以便在短時(shí)間內(nèi)匯報(bào)鏡檢結(jié)果，為臨床醫(yī)生用藥指導(dǎo)提供參考[7]。同時(shí)，將不合格標(biāo)本排除，從不同方面促進(jìn)致病菌檢出率的提高，以便檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，盡可能的促進(jìn)治療效果的提高，減少住院時(shí)間和治療經(jīng)費(fèi)。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)涂片檢查、細(xì)菌培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，腹水、膿液、尿液及痰液陽(yáng)性符合率分別為75.00%、90.91%、70.00%和76.92%。由此分析，涂片檢查及細(xì)菌培養(yǎng)檢查準(zhǔn)確性較高，對(duì)于病情顯著者，可利用該方法更好的判斷疾病，并予以相應(yīng)的治療方法，以促進(jìn)患者及早恢復(fù)健康。

細(xì)菌培養(yǎng)后進(jìn)行涂片檢查可對(duì)培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行解釋?zhuān)?xì)菌培養(yǎng)期間，通常伴有微生物不生長(zhǎng)現(xiàn)象。以上問(wèn)題的發(fā)生可能是因患者服用抗生素。此外，培養(yǎng)條件不理想也會(huì)導(dǎo)致以上問(wèn)題的發(fā)生。通過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)后涂片檢查方法實(shí)施微生物檢驗(yàn)，同時(shí)，在病原菌類(lèi)型鑒別診斷中具有重要作用[8]。

但檢查期間仍需加強(qiáng)對(duì)有關(guān)問(wèn)題的關(guān)注。為提升涂片檢查結(jié)果準(zhǔn)確性，需加強(qiáng)對(duì)標(biāo)本質(zhì)量控制的重視。如血液標(biāo)本采集穿刺點(diǎn)、采集時(shí)間、采集期間患者狀態(tài)等，均會(huì)對(duì)標(biāo)本質(zhì)量造成影響。為保證良好的標(biāo)本質(zhì)量，一般情況下，在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集標(biāo)本。此外，穿刺點(diǎn)選擇，盡量選擇健康的上肢[9]。再如結(jié)合纖維支氣管鏡采集痰液標(biāo)本，有助于標(biāo)本合格率提高。但因有些醫(yī)院未采用該器械，因此，需對(duì)口腔進(jìn)行全面清潔，并對(duì)患者進(jìn)行有效指導(dǎo)，從而促進(jìn)標(biāo)本質(zhì)量的提高。尿液標(biāo)本采集期間，盡量提取尿液中端。標(biāo)本獲取時(shí)，會(huì)陰、尿道口和肛門(mén)等位置，需保證各個(gè)部位干凈，防止外部微生物浸入標(biāo)本中，影響涂片檢查結(jié)果[10]。

綜上所述，細(xì)菌培養(yǎng)前，實(shí)施微生物標(biāo)本涂片鏡檢，有助于送檢標(biāo)本質(zhì)量提高，盡可能避免培養(yǎng)結(jié)果誤差，從整體上促進(jìn)標(biāo)本培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率提高，值得臨床推廣運(yùn)用。