止瀉方劑與腸道菌群關(guān)聯(lián)性探析*

王雪，朱林平

1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，天津 300150

隨著科研技術(shù)的發(fā)展，腸道細(xì)菌的種類被日益 豐富，人們對(duì)其作用的認(rèn)識(shí)也越來越明晰。大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)，止瀉方劑能明顯調(diào)整腸道菌群生物活性，改善臨床癥狀，一些腸道菌群也具有減毒增效作用。目前的研究一般都是通過ERIC-PCR技術(shù)記錄益生菌及有害菌數(shù)量變化來反映中藥的抑菌作用，但對(duì)其抑菌機(jī)制的研究較少。本文以此著手，從菌群活性、抗感染機(jī)制、中藥在生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)化等方面，探討常用止瀉方劑與腸道菌群的關(guān)聯(lián)性，現(xiàn)論述如下。

1 中藥復(fù)方對(duì)腸道菌群的影響

中藥復(fù)方可明顯增加有益菌數(shù)量，減少有害菌數(shù)量。目前已知的殺菌、抑菌機(jī)制為：①破壞菌體細(xì)胞壁、細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，使菌體內(nèi)蛋白質(zhì)、AKP等胞質(zhì)內(nèi)容物外流，從而導(dǎo)致細(xì)菌死亡［1］；②阻斷菌體蛋白合成路徑，使細(xì)菌代謝功能紊亂，從而抑制細(xì)菌生長［2］；③為有益菌生長提供適宜的腸道內(nèi)環(huán)境，并促使其在胃腸道黏膜表面黏附定植，再利用菌群間的競爭性排斥作用，間接拮抗有害菌生長［3］。現(xiàn)以下列方劑為例，闡述常用止瀉方劑對(duì)腸道菌群的影響及其抗感染機(jī)制。

1.1葛根芩連湯葛根芩連湯具有解表清里的功效，是治療濕熱泄瀉的首選方劑。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）能清除體內(nèi)生成的過量自由基，過氧化氫酶（catalase，CAT）能催化H2O2分解為H2O和O2，防止細(xì)胞膜被過氧化，丙二醛（malondialdehyde，MDA）是造成細(xì)胞膜損傷的物質(zhì)基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)，葛根芩連湯能明顯上調(diào)直腸組織中的SOD、CAT活性水平，降低MDA含量，發(fā)揮防治直腸炎的作用［4］。余林中等［5］研究發(fā)現(xiàn)，方中黃連、炙甘草組合能明顯降低小腸推進(jìn)率，減少腹瀉次數(shù)。黃芩具有退熱作用，與葛根配伍則藥效增強(qiáng)；炙甘草能減輕胃腸道實(shí)質(zhì)性損害。劉茜明等［6］用氨芐西林灌胃建立巴馬小型豬抗生素相關(guān)性腹瀉模型，采用葛根芩連湯治療14 d后，對(duì)其不同腸段的細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)多樣性進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)較建模之初，乳酸桿菌、雙歧桿菌等有益菌數(shù)量明顯增多，金黃色葡萄球菌、大腸桿菌，1型、2型志賀菌，腸炎桿菌數(shù)量明顯減少。由此可見，葛根芩連湯具有抗菌、抑制腸道蠕動(dòng)、解熱消炎作用［7］。

1.2保和丸保和丸載于《丹溪心法》，具有增加胃腸運(yùn)動(dòng)、提高胃蛋白酶活性、促進(jìn)消化液分泌、抗感染、降血脂等作用，主要用于治療消化不良、急慢性胃腸炎、腹瀉屬食積內(nèi)停者，其蕩滌積垢而止瀉的作用機(jī)制屬“通因通用”治法。方中山楂可消肉食油膩之積，神曲化酒食陳腐之積，萊菔子除谷面之積。在其有效成分中，有機(jī)酸能夠促進(jìn)消化腺活動(dòng)、幫助食物的吸收，改善患者的食欲；橙皮苷能增強(qiáng)腸道平滑肌的收縮運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)胃排空和小腸推進(jìn)；連翹苷的專屬性較強(qiáng)，主要清除食積產(chǎn)生的熱能［8］。已知消化酶如淀粉酶、蛋白酶主要由腸道自身分泌，纖維素酶、木聚糖酶需要依靠腸道微生物才能產(chǎn)生，其活性可以間接反映相應(yīng)腸道微生物的變化。有學(xué)者通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，保和丸能下調(diào)木聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶和蔗糖酶活性水平，促進(jìn)梭菌目、脫硫弧菌目、產(chǎn)氫細(xì)菌目菌群數(shù)量，減少擬桿菌目、芽孢肝菌目、乳桿菌目、伯克氏菌目等菌群數(shù)量［9-10］。

1.3參苓白術(shù)散漿細(xì)胞是胃腸道黏膜固有層的重要成分之一，它能產(chǎn)生大量分泌型IgA，這是胃腸道防止細(xì)菌入侵的主要物質(zhì)，一旦此過程障礙，致使分泌型IgA缺乏，就會(huì)引起胃腸道內(nèi)有害菌過度繁殖，導(dǎo)致疾病發(fā)生［11］，這恰合“百病皆由脾胃衰而生”理論。參苓白術(shù)散出自《太平惠民合劑局方》，方中山藥健脾益氣、補(bǔ)肺脾腎，山藥多糖可提高昆明種小鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量，降低腸桿菌與腸球菌，使腸道微生態(tài)趨于平穩(wěn)［12］。白術(shù)、茯苓可降低模型小鼠的腸道pH值，明顯促進(jìn)小腸上皮細(xì)胞修復(fù)，改善腸蠕動(dòng)功能，對(duì)腸道正常菌群均有扶植作用，并可提高雙歧桿菌的黏附性［13］。薏苡仁提取物在體外能促進(jìn)乳桿菌、雙歧桿菌等益生菌生長，抑制有害菌生長［14］。楊旭東等［15］采用參苓白術(shù)散灌胃脾虛小鼠，發(fā)現(xiàn)其益生菌數(shù)量逐漸恢復(fù)正常，腸壁肌層厚度顯著增加，紊亂的腸黏膜微絨毛、腫脹化線粒體均有顯著改善。蔣雨琪等［16］發(fā)現(xiàn)，參苓白術(shù)散能明顯改善腹瀉患兒降鈣素原、sIgA含量、血清二胺氧化酶及糞便球／桿菌比例水平。保和丸的止瀉機(jī)制有：①增加SOD活性，下調(diào)MDA含量，緩解腸黏膜損傷；②下調(diào)促炎細(xì)胞因子［腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-8、IL-6］水平，上調(diào)抗感染細(xì)胞因子水平，從而增強(qiáng)腸道免疫功能；③下調(diào)血漿金屬蛋白酶（由腸黏膜基質(zhì)細(xì)胞和炎性細(xì)胞產(chǎn)生，過度表達(dá)會(huì)促成結(jié)腸黏膜損害和炎癥發(fā)生）水平，改善腸黏膜通透性；④通過促進(jìn)Occludin蛋白表達(dá)，下調(diào)Caspase-8蛋白水平而加速受損腸黏膜的修復(fù)，通過增加AQP4蛋白表達(dá)，改善機(jī)體水液代謝功能而達(dá)到止瀉目的；⑤通過減少p38MAPK蛋白含量，抑制炎癥損傷和細(xì)胞凋亡［17］。

1.4四神丸四神丸出自《證治準(zhǔn)繩》，是治療脾腎陽虛泄瀉的經(jīng)典方劑，它可從機(jī)械、免疫及化學(xué)屏障、腸道菌群等方面維持腸道黏膜屏障的完整性，通過調(diào)節(jié)腸上皮細(xì)胞的增殖與凋亡，調(diào)節(jié)Rho／ROCK、TLRs／NF-kB及Ghrelin-CaM-MLCK信號(hào)通路，改善腸道功能［18］。王迪等［19］研究發(fā)現(xiàn)，乙酰膽堿、氯化鋇可引起腸道痙攣，使腸管平滑肌活動(dòng)量增加，從而導(dǎo)致腹瀉，四神丸對(duì)其有明顯的抑制作用，可降低脂質(zhì)過氧化所致細(xì)胞毒性，消除腸黏膜炎癥。王曉東等［20］用四神丸灌胃脾虛小鼠后，小鼠腸道內(nèi)桿菌、類桿菌、球菌、乳酸桿菌數(shù)量逐漸恢復(fù)正常，腸黏膜炎癥改善。

1.5痛瀉要方目前，較明確的腹瀉機(jī)制包括腸組織中促炎因子的過度表達(dá)、5-羥色胺信號(hào)系統(tǒng)的異常、胃腸道菌群平衡失調(diào)以及內(nèi)臟高敏感等［21］。痛瀉要方是治療肝郁脾虛型腹瀉的經(jīng)典名方，出自《丹溪心法》，方中白術(shù)含有蒼術(shù)酮、白術(shù)內(nèi)醋、揮發(fā)油等化合物及多糖，對(duì)多種有害菌有不同程度的抑制作用，并能提高小鼠血液中白細(xì)胞吞噬各種病菌的能力。防風(fēng)有較強(qiáng)的抑菌作用，能有效抑制綠膿桿菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌的生長［22］。陳皮可以抑制胃潰瘍，輕度抵抗幽門螺旋桿菌，改善胃腸蠕動(dòng)，促進(jìn)胃排空［23］。痛瀉要方止瀉的作用機(jī)制為：①調(diào)控腸道神經(jīng)介質(zhì)與免疫細(xì)胞間的關(guān)系；②調(diào)控外周神經(jīng)叢初級(jí)感覺神經(jīng)元的敏感性；③降低肥大細(xì)胞MC相關(guān)因子的表達(dá)，減少肥大細(xì)胞產(chǎn)生；④降低中樞促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子CRF表達(dá)，以降低內(nèi)臟高敏感性，促進(jìn)腸上皮屏障重建與黏膜修復(fù)［24］。另外，研究者發(fā)現(xiàn)，痛瀉要方還具有調(diào)控腦-腸互動(dòng)、糾正胃腸激素水平、提高免疫力、抑制腸道平滑肌收縮及保護(hù)腸黏膜屏障等多種功能［25-26］。

1.6其他低劑量應(yīng)用黃連解毒湯對(duì)雙歧桿菌和乳酸桿菌的生長起促進(jìn)作用，對(duì)條件致病性的生長起抑制作用。而長期高劑量服用黃連解毒湯，則會(huì)產(chǎn)生類似濫用抗生素的破壞作用，使腸道組織受損［27］。補(bǔ)中益氣湯能增強(qiáng)小鼠腸黏膜的免疫功能，使腸道益生菌如枯草芽孢桿菌、腸球菌數(shù)量得到提升［28］。大黃牡丹皮湯可以提高保加利亞乳酸桿菌整體的繁殖水平，顯著提高代謝產(chǎn)物L(fēng)乳酸、D乳酸的分泌量［29］。健脾清腸湯可以降低大腸桿菌含量，增加雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益菌數(shù)量［30］。

2 腸道菌群對(duì)于中藥在體內(nèi)代謝的生物轉(zhuǎn)化機(jī)制

正常情況下，腸道黏膜菌群的表層以腸球菌和大腸埃希菌為主；中層以類桿菌為主；深層以乳酸桿菌和雙歧桿菌為主［31］。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌對(duì)病原菌入侵有較好的抵御作用，能維持腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定［32］。雙歧桿菌通過促進(jìn)B淋巴細(xì)胞分化成熟，提高自然殺傷細(xì)胞殺傷力，加速T淋巴細(xì)胞增殖，從而使宿主建立的免疫系統(tǒng)趨于完備［33］。而條件致病菌如產(chǎn)氣莢膜梭菌，則通過產(chǎn)生內(nèi)毒素來抑制機(jī)體免疫功能，從而導(dǎo)致機(jī)體疾病的發(fā)生。

黃芩苷是黃芩中黃酮苷的主要成分，不能直接吸收，而是在腸道菌群的作用下轉(zhuǎn)化為代謝產(chǎn)物黃芩素后被吸收，在體內(nèi)重新結(jié)合，從而發(fā)揮藥物作用［34］。葛花的主要異黃酮成分是尼泊爾鳶尾異黃酮，張國哲［35］發(fā)現(xiàn)，其在腸道菌群的作用下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生代謝產(chǎn)物鷹嘴豆芽素A，從而發(fā)揮作用。人參的主要活性成分是人參皂苷，它的生物活性很低，在人體內(nèi)的代謝主要通過雙歧桿菌、梭菌等菌群的作用［36］。烏頭堿在人腸內(nèi)細(xì)菌的環(huán)境下易發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，使具有較高毒性的雙酯型生物堿轉(zhuǎn)化為相對(duì)應(yīng)的單酯型和脂類生物堿，從而降低毒性［37］。華蟾毒精、羥基華蟾毒精可由人腸內(nèi)細(xì)菌分別代謝為去乙?；A蟾毒精和去乙?；u基華蟾毒精，原形化合物能有效抑制癌細(xì)胞活性，而其代謝產(chǎn)物無活性［38］，這提示腸道菌群可使藥物的某些成分喪失藥用價(jià)值，也提示含有華蟾毒精等成分的抑癌制劑除口服外，存在更有效的給藥途徑。

3 結(jié)語

止瀉方劑與腸道菌群的關(guān)聯(lián)性可簡單概括為彼此的雙向調(diào)節(jié)作用。一方面，腸道菌群與中藥復(fù)方發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，將不能被機(jī)體直接吸收的成分轉(zhuǎn)化為可被吸收的效用成分，進(jìn)而幫助中藥復(fù)方發(fā)揮作用；另一方面，中藥復(fù)方不僅可破壞細(xì)菌細(xì)胞壁、細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，阻斷其蛋白質(zhì)合成，抑制有害菌生長，還可促使優(yōu)勢(shì)菌群在胃腸道黏膜表面黏附定植，恢復(fù)菌群動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。因此，臨床采用止瀉方劑可調(diào)整腸道菌群活性，改善菌群紊亂造成的一系列臨床癥狀。目前，關(guān)于止瀉方劑選擇性殺滅有害菌的分子生物學(xué)的作用機(jī)制尚未明確，且無菌動(dòng)物造模方法難以達(dá)到理想水平。今后應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。