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    銀耳多糖益生元效應的研究

    2021-04-14 03:03:16李國光
    現(xiàn)代食品 2021年3期
    關鍵詞:益生元銀耳沙門氏菌

    ◎ 李國光

    (上海輝文生物技術股份有限公司,上海 201318)

    銀耳在我國是最受歡迎的食用菌和藥用真菌之一,又稱為雪耳或者白蘑菇,現(xiàn)在市場上的銀耳幾乎都是是商業(yè)化栽培所得[1]。銀耳的子實體富含蛋白質(zhì)、多糖、膳食纖維、多種礦物質(zhì)、微量元素和維生素[2]。子實體中的銀耳多糖主要是酸性多糖,具有提高人體免疫[3]、抑制腫瘤[4]、抗衰老[5]及清除自由基[6]等生物學功能。有研究表明,子實體中提取的銀耳多糖主鏈為由α-(1,3)-糖苷鍵組成的甘露聚糖,主鏈的2,4,6 位上鏈接有葡萄糖、木糖、巖藻糖及葡萄糖醛酸等殘基組成的側鏈[7]。有研究者認為食用菌多糖是具有益生元效應的活性物質(zhì),如GUO等人利用銀耳多糖,以雞為研究的對象,通過對雞盲腸的分析發(fā)現(xiàn),多糖能夠發(fā)酵產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸,改善腸道內(nèi)微生物菌群的組成和活性。同時進行體外實驗,證明銀耳多糖能夠促進雙歧桿菌生長[8]。本研究利用體外實驗分析銀耳多糖益生元效應情況,為銀耳多糖益生元的進一步研究提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    銀耳多糖,MRS 液體培養(yǎng)基和MRS 瓊脂培養(yǎng)基,TPY 液 體 培 養(yǎng) 基 和TPY 瓊 脂 養(yǎng) 基,TSB 肉 湯液體培養(yǎng)基和TSA 瓊脂培養(yǎng)基。青春雙歧桿菌(編號:GDMCC1.278)、長雙歧桿菌嬰兒亞種(編號:GDMCC1.207)、嗜酸乳桿菌(編號:GDMCC1.208)、鼠李糖乳桿菌(編號:GDMCC1.325)、大腸桿菌(編號:GDMCC1.737)和沙門氏菌(編號:GDMCC1.237),所有菌株購自廣東省微生物菌種保藏中心。

    1.2 儀器與設備

    SX-BHC 生物安全柜(蘇州凈化設備有限公司)、恒溫培養(yǎng)箱(上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司)、搖床(上海世平實驗設備有限公司)、高壓蒸汽滅菌鍋(上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司)和pH 計(上海儀電科學儀器股份有限公司)。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 菌種活化

    凍干粉菌種活化,首次活化,干粉要全部用完,不能保留,干粉用盡量少的MRS、TYP、TSB 培養(yǎng)液溶解,接種在5 mL 液體培養(yǎng)基中,靜止培養(yǎng)。將雙歧桿菌接種于TPY 液體培養(yǎng)基,37 ℃厭氧培養(yǎng)48 h;乳酸菌接種于MRS 液體培養(yǎng)基,37 ℃培養(yǎng)24 h,。將大腸桿菌及沙門氏菌接種于肉湯液體培養(yǎng)基37 ℃培養(yǎng)24 h,分別涂片、染色、鏡檢,觀察菌體形態(tài)正確后,開始后續(xù)研究。

    1.3.2 不同濃度銀耳多糖對有益菌和有害菌的影響

    銀耳多糖為實驗室提取保存,用去離子無菌水配制成濃度為0.10%、0.05%、0.01%的液體,取一個96孔平板,在孔中加入90 μL 銀耳多糖溶液,分別接入10 μL 的青春雙歧桿菌、長雙歧桿菌嬰兒亞種、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、大腸桿菌和沙門氏菌菌液,放在厭氧搖床上培養(yǎng)37 ℃,24 h,取出OD600檢測(檢測前輕微晃動96 孔板)。

    1.3.3 不同益生元調(diào)節(jié)腸道菌群作用

    采用GAM 培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基(未加葡萄糖),對照組1不加葡萄糖,實驗組分別為0.10%、0.05%、0.01%銀耳多糖,每組設置3 個平行,每個樣品裝液量為50 mL,滅菌處理,取新鮮健康人的糞便10 g 加入到200 mL 生理鹽水中充分混合,分別取上清1 mL 加入到空白組和實驗組中,37 ℃發(fā)酵培養(yǎng)24 h。

    檢測發(fā)酵24 h 后發(fā)酵液中腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌和乳酸菌的值,以及發(fā)酵液中的pH 值,并計算B/E值,值越高表示益生菌在體內(nèi)的定植抗力越強。

    2 結果與分析

    2.1 不同濃度銀耳多糖對有益菌和有害菌的影響

    由圖1 可知,不同濃度的銀耳多糖對微生物生長的影響不同,對雙歧桿菌和乳酸桿菌,銀耳多糖能夠促進其生長且成劑量關系,0.5%的銀耳多糖對青春雙歧桿菌、長雙歧桿菌嬰兒亞種、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的生長促進效果最顯著。而對于大腸桿菌和沙門氏菌來說,銀耳多糖抑制作用不明顯,也沒有很好的促進效果。總體來看,銀耳多糖可以作為一種益生元促進腸道有益微生物的生長。

    2.2 不同濃度銀耳多糖對腸道菌群調(diào)節(jié)作用

    由表1 可知,發(fā)酵24 h 后,腸道菌群數(shù)量測定,不同濃度銀耳多糖與對照組相比較,雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌和腸球菌均增多,但乳桿菌和雙歧桿菌增加顯著(p<0.01);與對照組相比,3 個實驗組的pH值明顯降低(p<0.05),但各試驗組間差異無顯著性(p>0.05);發(fā)酵24 h 后測得的B/E值可以發(fā)現(xiàn)0.01%濃度銀耳多糖組最高,表明腸道微生物定植抗力更強。

    表1 發(fā)酵24 h 后腸道菌群數(shù)量測定結果表(單位:CFU·g-1)

    3 結論

    研究結果表明,銀耳多糖可以作為一種益生元發(fā)揮益生元效應,從體外實驗可以發(fā)現(xiàn)隨著銀耳多糖的含量提高,雙歧桿菌和乳酸菌的數(shù)量明顯增多,同時大腸桿菌和沙門氏菌等有害菌的生長不明顯。發(fā)酵24 h腸道菌群數(shù)量測定 ,各實驗組腸道菌與對照組相比較雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌和腸球菌均增多;pH值降低,各試驗組間差異無顯著性(p>0.05)。銀耳多糖對有害菌群(腸桿菌、腸球菌)的增殖效果要弱,而銀耳多糖對人體腸道內(nèi)的有益菌群(雙歧桿菌、乳桿菌)增殖有明顯促進作用。

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