干血片毛細血管電泳技術(shù)在新生兒α-地貧篩查中的應用

姚 靖 劉恩賜 李肖妹 張煒羨 黃曉凌

(廣東省陽江市婦幼保健院 陽江 529500)

地中海貧血(以下簡稱地貧)是一種常見的遺傳性溶血性貧血，根據(jù)編碼α和β肽鏈的基因缺失或突變情況，可分為α-地貧和β-地貧[1]。我國是α-地貧的高發(fā)地區(qū)，其中廣東省α-地貧的發(fā)病率高居全國第二[2]。因此，早期篩查本地區(qū)新生兒α-地貧發(fā)病意義重大。對于靜止型的陽性患兒，可建立終身可查的電子健康檔案，進行有效的遺傳咨詢和健康教育，避免其孕育中間型地貧下一代；對輕、中型地貧患兒來說，早期篩查發(fā)現(xiàn)并定期進行追蹤和發(fā)育評估，可提高兒童智力和生長發(fā)育水平，避免重型患兒的出生。近年來，有學者提出可將濾紙干血片全自動毛細管血紅蛋白電泳分析技術(shù)應用到新生兒地貧的篩查[3]。本研究通過收集陽江市新生兒濾紙干血片標本，探究濾紙干血片毛細管電泳技術(shù)檢測的應用效果，為本地區(qū)新生兒α-地貧的預防、臨床診斷、遺傳咨詢提供參考資料。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2018年1月～2019年12月陽江市婦幼保健院及陽江市各助產(chǎn)機構(gòu)送檢的新生兒濾紙干血片標本23 769例，其中男12 687例，女11 082例。

1.2 濾紙干血片制備方法

于新生兒出生2～7d后從足跟內(nèi)或外側(cè)采血，滴于專用采血濾紙上，要求血斑直徑>8mm，且從正面滲透至背面，每例采集血斑3個，將血斑濾紙置于通風處自然晾干，再密封于塑料袋，2℃～8℃下保存，5d內(nèi)以快遞形式送至陽江市新生兒篩查中心檢測。

1.3 檢測方法

鉗取直徑為3.8mm的血斑，置于加有蒸餾水的樣品杯孔中，再放入濕盒于4℃下洗脫2～72h；采用capillarys2 neonat fast全自動干血片毛細管電泳儀及其配套電泳試劑盒(法國Sebia公司)，對樣品進行血紅蛋白電泳檢測，測定正常血紅蛋白和主要變異體的含量。同時，對篩查陽性新生兒及時召回做地貧基因檢測。

1.4 篩查結(jié)果判讀及基因診斷[4]

α-地貧篩查陽性判斷標準：Hb Bart's≥0.1%判定為α地中海貧血篩查陽性。采用PCR+倒流雜交法，分析α-地貧篩查陽性新生兒α-地貧基因常見的缺失突變，包括-α3.7、-α4.2、--SEA、 Hb CS、Hb QS和Hb WS?；蛟\斷標準：缺失或突變1個α基因為靜止型，缺失或突變2個α基因為標準型，缺失或突變3個α基因為中間型，缺失或突變4個α基因為重型。

1.5 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 α-地貧的篩查結(jié)果

23 769例濾紙干血片標本中檢出Hb Bart's陽性2 825例，陽性率為11.89%，共召回1 068例進行PCR地貧基因診斷。

2.2 α-地貧的基因診斷結(jié)果

召回初篩陽性1 068例，確診陽性998例，確診符合率為93.45%，具體基因類型分布情況見表1?；蛟\斷結(jié)果顯示，靜止型338例，標準型635例，中間型25例，重型0例，標準型中以基因型--SEA/αα常見。

表1 新生兒α-地貧基因診斷結(jié)果

2.3 初篩Hb Bart's含量與臨床表型的關(guān)系

不同臨床表型患兒Hb Bart's水平比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中中間型患兒Hb Bart's水平高于標準型和靜止型(q=69.086、82.829，P<0.001)，且標準型患兒Hb Bart's水平高于靜止型(q=45.759，P<0.001)，見表2。

表2 臨床表型和Hb Bart's水平關(guān)系

3 討論

地中海貧血是全世界許多國家都關(guān)注的重要遺傳性疾病，由于地中海貧血基因攜帶者婚配可使下一代有1/4的機會患中、重型地中海貧血，故可嚴重影響高發(fā)區(qū)的人口質(zhì)量。在我國，該病主要在長江以南大部分省區(qū)，特別是廣西、廣東和海南等省區(qū)流行。α-地貧嚴重情況下具有較高的致殘、致死性，而攜帶地貧基因的輕型患者，容易在新生兒和兒童時期出現(xiàn)溶血性黃疸、貧血等癥狀，影響兒童生長發(fā)育[5]。通過產(chǎn)前篩查技術(shù)可以預防重型患兒的出生，因此，早期篩查在地貧的預防及后期診療中有重要臨床意義。

目前，新生兒地中海貧血篩查最為簡便、有效的方法是毛細胞血紅蛋白電泳技術(shù)，很多醫(yī)院采用臍帶血進行早期篩查，但臍血標本容易混進母體血，可能無法準確反應新生兒的血紅蛋白情況，而且臍血的保存、運送要求較高，無法滿足分散于本市其他助產(chǎn)機構(gòu)的集中送檢。同時，臍血篩查地貧存在漏篩靜止型α-地貧的可能性[6]。另外成人的產(chǎn)前地貧篩查與地貧基因符合率低[7]，究其原因是HbBart's只特異性地存在于新生兒期，3個月后自然消失，成人地貧篩查未能有效篩查出靜止型α-地貧，靜止型α-地貧基因攜帶者與同型地貧基因攜帶者婚配生育，每次生育有1/4的概率懷上中間型地貧胎兒。近年來，濾紙干血片全自動毛細管血紅蛋白電泳分析技術(shù)逐漸應用于新生兒地貧的早期篩查，該技術(shù)是利用高電壓，使得新生兒濾紙干血片中的微量血紅蛋白組分分離，從而準確測定各種血紅蛋白組分的含量[8]。與臍帶血比較，濾紙干血片具有更易長期保存，運輸方便，對新生兒創(chuàng)傷小，且可與傳統(tǒng)的新生兒篩查項目同時檢測等特點。

本研究利用毛細管電泳技術(shù)檢測23 769例濾紙干血片標本，檢出Hb Bart's陽性2 825例，陽性率為11.89%，高于文獻報道廣東省中山市新生兒α-地貧初篩攜帶率5.31%[9]，考慮差異因素有：(1)不同地區(qū)α-地貧攜帶率具有特異性；(2)文獻選用檢測樣本為臍帶血，可能出現(xiàn)假陰性。根據(jù)初篩結(jié)果，召回1 068例新生兒作進一步基因型檢測，確診陽性998例，確診符合率為93.45%，與文獻報道基本相符[10]。提示干血片毛細血管電泳技術(shù)對于新生兒α-地貧篩查具有較高的應用價值，完全可滿足篩查需求[11～13]。另外，分析患兒Hb Bart's水平與臨床表型的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，中間型患兒Hb Bart's水平高于標準型和靜止型，且標準型患兒Hb Bart's水平高于靜止型，進一步說明臨床可根據(jù)Hb Bart's水平初步劃分α-地貧患兒臨床表型，對后期基因確診有一定指導意義。

綜上所述，利用干血片毛細血管電泳技術(shù)定量分析Hb Bart's水平，對新生兒α-地中海貧血的篩查準確性高，且干血片標本的運輸、保存也更為便捷，對于新生兒疾病篩查的廣泛開展有積極意義。