T淋巴細(xì)胞亞群分析在免疫缺陷病患者中的應(yīng)用及臨床意義

姚 夢(mèng)，劉 鵬，蒲 鳳，張 兵

（南充市中心醫(yī)院，四川 南充 637000）

細(xì)胞免疫缺陷可分為遺傳性與獲得性兩種，后者主要為艾滋病（AIDS）患者與強(qiáng)烈放化療后的腫瘤患者。免疫缺陷患者由于細(xì)胞免疫功能缺失導(dǎo)致對(duì)病原體抵抗力下降，常并發(fā)感染性疾病，特別是正常人群中少見(jiàn)的機(jī)會(huì)致病菌感染[1]。AIDS是人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）感染后出現(xiàn)的以細(xì)胞免疫缺陷、惡性腫瘤或反復(fù)感染為臨床表現(xiàn)的綜合征。腫瘤患者接受較強(qiáng)的放化療后除腫瘤細(xì)胞被殺滅外，機(jī)體正常組織細(xì)胞也可被殺滅，其中也包括免疫細(xì)胞。上述獲得性免疫缺陷病患者體內(nèi)T淋巴細(xì)胞數(shù)量及動(dòng)態(tài)平衡對(duì)病情的進(jìn)展有重要影響，也是疾病診治的重要環(huán)節(jié)[2]。因此，本研究采用流式細(xì)胞術(shù)監(jiān)測(cè)AIDS患者與腫瘤放化療后患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的種類(lèi)和數(shù)量，探討其臨床意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

我院2016—2018年收治的各類(lèi)晚期惡性腫瘤放化療后患者48例（CA組）、AIDS晚期患者47例（AIDS組），其中AIDS組均由本市疾病預(yù)防控制中心確認(rèn)，43例健康對(duì)照者為門(mén)診健康體檢者。AIDS患者采集治療前、安靜狀態(tài)下的外周靜脈血，惡性腫瘤患者采集放化療后、癥狀緩解后的外周靜脈血。

1.2 主要試劑與儀器

Beckman Coulter原裝進(jìn)口試劑，Beckman Coulter FC-500流式細(xì)胞儀。

1.3 檢測(cè)方法

（1）標(biāo)記CA管、AIDS管和對(duì)照管；（2）每管加CD45/CD3/CD4/CD8 熒光試劑 5 μl；（3）每管加待測(cè)樣本全血 50 μl，混勻，室溫避光放置 15 min；（4）加 OptiLyse C 溶血素 300 μl，混勻，室溫避光放置 10 min；（5）加 PBS 試劑 300 μl，混勻，室溫避光放置 10 min；（6）加 Flow-Count Fluorospheres 50 μl，混勻，上機(jī)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，T淋巴細(xì)胞亞群比例以（±s）表示，組間差異采用成組t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有顯著性；T淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)以箱式圖進(jìn)行描述統(tǒng)計(jì)，以Shapiro-Wilk法檢驗(yàn)各組數(shù)據(jù)是否服從正態(tài)分布，若不服從正態(tài)分布，則進(jìn)行中值檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 3組T淋巴細(xì)胞亞群比例分析

與對(duì)照組相比，AIDS組外周血CD3+、CD4+細(xì)胞比例均下降（P＜0.05），CD8+細(xì)胞比例明顯升高（P＜0.05），CD4+/CD8+值出現(xiàn)倒置；CA組外周血 CD3+細(xì)胞比例下降（P＜0.05），CD4+、CD8+細(xì)胞比例及CD4+/CD8+值與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；與CA組相比，AIDS組 CD4+細(xì)胞比例均下降（P＜0.05），CD8+細(xì)胞比例明顯升高（P＜0.05），CD4+/CD8+值明顯下降（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 3組T淋巴細(xì)胞亞群比例比較（±s）

表1 3組T淋巴細(xì)胞亞群比例比較（±s）

注：與正常對(duì)照組相比，*P＜0.05；與 CA組相比，#P＜0.05

n C D 3+（%）6 4.8 1±1 1.3 7*6 7.8 3±9.5 2*7 2.5 1±6.6 0 A I D S組C A組對(duì)照組組別C D 4+（%）3.1 3±2.5 9*#3 6.3 4±6.4 9 3 7.3 7±5.4 3 4 7 4 8 4 3 C D 8+（%）5 7.0 9±1 1.7 8*#2 6.6 8±7.1 4 2 8.8 2±5.8 6 C D 4+/C D 8+0.0 6±0.0 5*#1.4 4±0.5 1 1.3 8±0.3 7

2.2 3組T淋巴細(xì)胞亞群細(xì)胞計(jì)數(shù)分析

由于各組人數(shù)均少于50例，故以Shapiro-Wilk法進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)。各組正態(tài)分布檢驗(yàn)均P＜0.20，故認(rèn)為不服從正態(tài)分布。以中位數(shù)及箱式圖對(duì)各組數(shù)據(jù)描述統(tǒng)計(jì)（見(jiàn)表2、圖1）后，中值檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，AIDS 組、CA 組外周血 CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞總數(shù)均下降，差異有顯著性（P＜0.05）；與CA組相比，AIDS組CD3+、CD4+細(xì)胞總數(shù)下降，而CD8+細(xì)胞總數(shù)升高，差異有顯著性（P＜0.05）。

圖1 3組T淋巴細(xì)胞亞群細(xì)胞計(jì)數(shù)

3 討論

HIV病毒造成人類(lèi)細(xì)胞免疫功能損傷，惡性腫瘤晚期患者接受不同劑量放化療后的常見(jiàn)副作用之一是免疫抑制。利用流式細(xì)胞術(shù)監(jiān)測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群已被廣泛運(yùn)用于AIDS患者與惡性腫瘤患者疾病進(jìn)展與療效的評(píng)估，T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量及動(dòng)態(tài)平衡決定著人體免疫功能狀況。AIDS患者體內(nèi)的HIV病毒可選擇性侵犯細(xì)胞表面含有CD4分子受體的細(xì)胞，其中最重要的是CD4+T淋巴細(xì)胞。該細(xì)胞的減少可引起細(xì)胞因子釋放減少與B淋巴細(xì)胞活化率下降，使細(xì)胞免疫與體液免疫功能均下降，患者易并發(fā)機(jī)會(huì)性感染[3-4]；CD8+細(xì)胞除受CD4+細(xì)胞調(diào)控產(chǎn)生細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用外，還可分泌抑制因子，負(fù)反饋抑制CD4+細(xì)胞調(diào)控。當(dāng)CD8+細(xì)胞比例明顯升高后，會(huì)明顯減弱或抑制免疫應(yīng)答[5]。因此，CD4+/CD8+值明顯降低提示體內(nèi)T細(xì)胞亞群失常，可導(dǎo)致機(jī)體免疫監(jiān)視功能下降，易并發(fā)惡性腫瘤。另外，CD3是具有轉(zhuǎn)導(dǎo)抗原識(shí)別信號(hào)并存在于所有T淋巴細(xì)胞的表面分子，是T細(xì)胞的特有標(biāo)志。CD3細(xì)胞數(shù)量的減少代表機(jī)體免疫功能下降，故可用于評(píng)價(jià)AIDS患者及腫瘤患者放化療后機(jī)體整體免疫功能狀態(tài)[6]。

表2 3組T淋巴細(xì)胞亞群細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

3.1 AIDS患者細(xì)胞免疫功能低下且失衡

在本組收集的各類(lèi)病例中，T淋巴細(xì)胞亞群均存在不同程度的失常。兩類(lèi)免疫缺陷患者均存在CD3細(xì)胞總數(shù)下降，提示整體免疫功能下降。在以CD4+細(xì)胞為攻擊對(duì)象的AIDS患者中，CD4+細(xì)胞總數(shù)及比例明顯下降，盡管CD8+細(xì)胞數(shù)量有所下降但不及CD4+細(xì)胞明顯，故出現(xiàn)CD4+/CD8+值倒置的結(jié)果[7]。上述結(jié)果提示，AIDS患者T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量及比例均發(fā)生異常，細(xì)胞免疫功能受到抑制。

3.2 惡性腫瘤患者整體免疫功能低下但免疫自穩(wěn)正常

惡性腫瘤患者放化療后，其CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞數(shù)量下降，但CD4+、CD8+細(xì)胞比例及CD4+/CD8+值均在正常范圍?？梢?jiàn)，放化療后的惡性腫瘤患者呈整體免疫抑制狀態(tài)，而機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)未發(fā)生明顯改變[8]。同時(shí)，在對(duì)腫瘤患者放化療后的免疫監(jiān)測(cè)中，與T細(xì)胞比例相比，患者的T淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)更能直觀反映機(jī)體內(nèi)T淋巴細(xì)胞亞群的變化。

綜上所述，本研究中的兩組獲得性免疫缺陷患者的T淋巴細(xì)胞亞群均發(fā)生明顯改變，AIDS晚期患者T淋巴細(xì)胞亞群改變程度及復(fù)雜程度均高于晚期惡性腫瘤放化療后的患者。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群對(duì)疾病的療效、復(fù)發(fā)與預(yù)后判斷具有重要臨床意義。