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    超高效液相色譜法測(cè)定秋葵籽油中苯并芘的含量

    2020-12-15 06:30:20李單單河南進(jìn)口肉類指定口岸漯河查驗(yàn)區(qū)服務(wù)中心
    食品安全導(dǎo)刊 2020年34期
    關(guān)鍵詞:苯并芘秋葵籽油

    □ 李單單 河南進(jìn)口肉類指定口岸漯河查驗(yàn)區(qū)服務(wù)中心

    秋葵籽油是從成熟的優(yōu)質(zhì)黃秋葵籽中提取出來的純天然高級(jí)食用油,因其富含維他命、蛋白質(zhì)、卵磷脂及鈣、磷、鐵、鉀、鎂等礦物質(zhì),所以是一種營(yíng)養(yǎng)豐富的高檔植物油。作為一種新型植物油,秋葵籽油不僅可以用于烹飪、糕點(diǎn)、罐頭食品等,還可以加工成人造奶油、烘烤油、調(diào)味油(有特殊香味)等以供食用。有報(bào)道稱,經(jīng)常食用秋葵籽油可以促進(jìn)人體血液循環(huán),防止動(dòng)脈硬化及動(dòng)脈硬化并發(fā)癥、高血壓、心臟病、心力衰竭、腎衰竭、腦出血,以及抗衰老、改善人腦記憶力,預(yù)防老年癡呆癥、改善消化系統(tǒng)功能等。此外,人體對(duì)秋葵籽油中不飽和脂肪酸的消化吸收率較高,其不僅有助于減少胃酸、阻止發(fā)生胃炎及十二指腸潰瘍等,還具有潤(rùn)腸功能,長(zhǎng)期食用可以有效緩解便秘。在醫(yī)藥領(lǐng)域,秋葵籽油可作為燒傷藥、胃潰瘍藥、傷口愈合藥、止痙攣藥、神經(jīng)鎮(zhèn)定劑等。正是因?yàn)榍锟延偷臓I(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健功能,所以引起了醫(yī)療、食品、農(nóng)業(yè)等許多領(lǐng)域科學(xué)家的關(guān)注。采用氣相色譜法對(duì)秋葵籽的主要脂肪酸成分進(jìn)行分析,得出其主要脂肪酸含量分別為:豆蔻酸0.2%、棕櫚酸30.6%、棕櫚油酸0.5%、硬脂酸4.2%、油酸23.8%、亞油酸30.8%、亞麻酸0.3%、花生酸0.6%,且香味香度約為芝麻油的4 倍。但是秋葵籽油在生產(chǎn)加工及使用過程中經(jīng)常處于高溫條件下,故可能引起有害物質(zhì)苯并芘的產(chǎn)生。

    苯并芘(Benzopyrene)是一種含苯環(huán)的稠環(huán)芳烴,其于環(huán)境中廣泛存在[1],且在大氣中的含量已被列入環(huán)境監(jiān)測(cè)的常規(guī)項(xiàng)目[2]。最初,苯并芘由煤焦油中分離得到;從煤煙、焦油、瀝青、香煙煙霧中都可以檢測(cè)出來,并且具有強(qiáng)烈的致癌作用—可以誘發(fā)肺癌等。根據(jù)苯環(huán)的稠合位置不同,可將苯并芘分為兩種— 苯并[a] 芘(1,2— 苯并芘)和苯并[e] 芘(4,5— 苯并芘),后者是前者的同分異構(gòu)體,存在于煤煙和焦油中。人們?nèi)粘I钪薪佑|到的大多是苯并[a] 芘,英文縮寫為B[a]P,CAS 號(hào)為50—32—8,化學(xué)式為C20H12,分子量為252.31。苯并[a]芘在常溫條件下的狀態(tài)是黃色粉末,熔點(diǎn)為179℃,難溶于水,微溶于甲醇、乙醇,易溶于苯、甲苯、二甲苯、丙酮、乙醚、氯仿、二甲基亞砜等有機(jī)溶劑。苯并芘在工業(yè)上無生產(chǎn)和使用價(jià)值,一般只作為生產(chǎn)過程中形成的副產(chǎn)物隨廢氣排放。1 9 3 3年,英國(guó)科學(xué)家J.W.Cook 等人從瀝青中分離得到苯并芘純品,然后合成證明其化學(xué)結(jié)構(gòu),并進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn),最終誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生了皮膚癌。由此,苯并芘被確認(rèn)為化學(xué)環(huán)境致癌物[3]。目前,針對(duì)苯并芘測(cè)定的相關(guān)文獻(xiàn)中多采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法[4]、膠體金法[5]、氣相色譜— 質(zhì)譜聯(lián)用法[6]、液相色譜— 質(zhì)譜聯(lián)用法[7]、液相色譜— 熒光檢測(cè)法等[8—16]。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與材料

    安捷倫1 2 9 0 型超高效液相色譜儀( 配熒光檢測(cè)器G1321B),美國(guó)安捷倫科技有限公司;EclipsePlus—C18 色譜柱(2.1×50mm,1.8μm);B a P—2 固相萃取柱、S i l i ca 固相萃取柱,月旭科技;固相萃取儀,美國(guó)安捷倫科技有限公司;ML204T 電子分析天平,梅特勒— 托利多儀器上海有限公司;氮?dú)獍l(fā)生器LCMS30—1—E,英國(guó)Parker;氮吹儀N—EVAP 24,美國(guó)Organomation;多位渦旋振蕩器,廣東晉元;超聲波清洗器,中國(guó)昆山舒美;0.22μm 有機(jī)濾膜,天津津騰公司。

    苯并芘標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),Dr.Ehrenstorfer;分析純二氯甲烷、分析純正己烷,天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;色譜純乙腈,上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司;實(shí)驗(yàn)用水為Milli—Q Advantage A10 超純水,美國(guó)Millipore 公司。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    使用十萬分之一的天平稱取1 m g 苯并芘標(biāo)品, 用色譜純乙腈定容至100mL,配制成濃度為10μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液;吸取1 m L 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用色譜純乙腈定容至100mL,配制成濃度為100ng/mL 的中間標(biāo)準(zhǔn)工作液,然后用色譜純乙腈稀釋成5 個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液,濃度分別為0.5、1、5、10、20ng/mL;采用超高效液相色譜儀對(duì)該系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行上機(jī)檢測(cè),并建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

    1.2.2 液相色譜條件

    液相色譜柱:EclipsePlus—C18色譜柱(2.1×5 0 m m,1.8 μ m);色譜柱柱溫:35 ℃;流動(dòng)相:乙腈︰水=88︰12; 流速:0.3 m L/m i n;進(jìn)樣量:5μL;熒光檢測(cè)器:激發(fā)波長(zhǎng)275nm,發(fā)射波長(zhǎng)415nm

    表1 苯并芘的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍

    圖1 苯并芘線性范圍

    1.2.3 樣品前處理

    提取步驟:準(zhǔn)確稱樣(0.4 0 0 g)→加入正己烷(5 m L)→振蕩混勻(2 0 m i n)→超聲提取(2 0 m i n)→待凈化。

    SPE 凈化步驟:將Silica 硅膠柱串聯(lián)在BaP—2 固相萃取柱上→活化(5 m L 二氯甲烷、5 m L 正己烷)→上樣(將凈化液加入到串聯(lián)柱上,并用2mL 正己烷潤(rùn)洗盛放樣品的離心管,確保完全上樣)→淋洗1(5 m L正己烷淋洗整個(gè)串聯(lián)柱,然后棄去S i l i ca 硅膠柱)→淋洗2(5 m L 正己烷淋洗B a P—2 固相萃取柱)→洗脫(5 m L 二氯甲烷,收集洗脫液)→定容(洗脫液中加入1 m L 乙腈,4 0 ℃條件下氮吹至近干,用乙腈定容至1 m L,渦旋0.5 m i n,經(jīng)0.2 2 μ m 濾膜過濾,供U P LC 測(cè)定)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 線性關(guān)系

    在“1.2.2”條件下對(duì)“1.2.1”系列標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測(cè)定,以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程,結(jié)果見表1、圖1。

    2.2 精密度試驗(yàn)

    在“1.2.1”中選擇濃度為5ng/mL 的苯并芘標(biāo)準(zhǔn)溶液,連續(xù)進(jìn)樣6 次,記錄峰面積。苯并芘峰面積的RSD 為0.9%,說明儀器精確度較好,見表2。

    2.3 回收率試驗(yàn)

    按照GB 5009.27—2016 的方法, 采用分子印跡柱洗脫后直接氮吹。由于二氯甲烷的揮發(fā)性太強(qiáng)而容易將目標(biāo)物帶走,故試驗(yàn)在洗脫液中加入1mL 乙腈以防止目標(biāo)物損失。取陰性樣品,苯并芘的3 個(gè)添加水平分別為2、10、20μg/kg,加入對(duì)應(yīng)體積的標(biāo)準(zhǔn)品后靜置過夜,按照“1.2.3”的前處理方法處理樣品,然后上機(jī)測(cè)定,結(jié)果見表3。

    2.4 檢出限和定量限

    根據(jù)信噪比S/N=3 和S/N=10 確定目標(biāo)物的檢出限和定量限,苯并芘的檢出限為0.2μg/kg,定量限為0.5μg/kg。

    3 討論

    圖2 超高效液相色譜圖(5ng/mL)

    表2 苯并芘(5ng/ml)的精密度(n=6)

    苯并芘是一類對(duì)人類健康危害較大的致癌物,其污染問題長(zhǎng)期受到社會(huì)關(guān)注。秋葵籽中苯并芘產(chǎn)生的來源主要包括以下幾點(diǎn):①新鮮采摘的秋葵籽晾曬在柏油路上,瀝青隨著高溫融化并與秋葵籽慢慢混合;②苯并芘廣泛存在于環(huán)境中且親脂性極強(qiáng),并易在種植、收獲及加工等環(huán)節(jié)受到污染;③秋葵籽在高溫下反復(fù)烘烤和蒸炒,可能因燒焦而產(chǎn)生苯并芘[17—18]。

    本試驗(yàn)利用超高效液相色譜法檢測(cè)秋葵籽中的苯并芘含量,出峰時(shí)間早,節(jié)省檢測(cè)時(shí)間,不僅分離度滿足試驗(yàn)需求,更可以節(jié)省流動(dòng)相中的乙腈,故實(shí)用性較強(qiáng)。秋葵籽油是一種高檔植物油,隨著生活水平的提高,人們?cè)絹碓阶非箫嬍辰】?,因此,加?qiáng)對(duì)秋葵籽中苯并芘的檢測(cè)能夠?yàn)槿藗兎判氖秤们锟延吞峁?shù)據(jù)支持。

    表3 樣品中苯并芘回收率(n=3)

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