類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNAs表達(dá)譜的篩選驗(yàn)證及相關(guān)性分析

文建庭 劉健 萬(wàn)磊 姜輝 忻凌 孫玥 孫艷秋 張穎 杜新雷 王馨 王杰

【摘 要】目的：檢測(cè)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）氧化應(yīng)激關(guān)鍵長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNAs）表達(dá)譜的差異，結(jié)合臨床進(jìn)行驗(yàn)證，篩選出類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎氧化應(yīng)激分子標(biāo)志物，并進(jìn)行相關(guān)性分析。方法：采用高通量測(cè)序技術(shù)分別對(duì)3例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者和3例健康人的PBMCs進(jìn)行檢測(cè)，基因聚類和KEGG通路分析類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎氧化應(yīng)激差異表達(dá)的lncRNAs，Cytoscape分析lncRNAs、miRNA、mRNA之間的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)圖;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）對(duì)20例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者和20例健康人差異表達(dá)lncRNAs進(jìn)行驗(yàn)證，ROC曲線分析lncRNAs作為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎氧化應(yīng)激分子標(biāo)志物的潛力，相關(guān)性分析lncRNAs與臨床指標(biāo)及患者感受（SPP）之間的關(guān)聯(lián)。結(jié)果：①高通量測(cè)序結(jié)果顯示，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎氧化應(yīng)激相關(guān)的差異表達(dá)lncRNAs是34個(gè)，上調(diào)19個(gè)，下調(diào)15個(gè)，差異倍數(shù)最高的7條lncRNAs是AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638、MIAT、PSMG3-AS1;②生物信息學(xué)分析顯示，氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNAs主要富集在weigel oxidative stress response，weigel oxidative stress by hne and H2O2等上;③RT-qPCR結(jié)果顯示，與健康人相比，AC019117.2、LINC00630表達(dá)顯著升高（P < 0.05），AC007952.5、LINC00663、LINC00638表達(dá)顯著降低（P < 0.05），MIAT、PSMG3-AS1的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）;④ROC曲線結(jié)果顯示，AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638曲線下面積（AUC）分別是0.676，0.784，0.834，0.643，0.638;⑥相關(guān)性分析結(jié)果顯示，AC007952.5與超氧化物歧化酶（SOD）、年齡呈負(fù)相關(guān)，與免疫球蛋白呈正相關(guān);AC019117.2與病程、疾病活動(dòng)度（DAS28）、視覺(jué)模擬評(píng)分法（VAS）評(píng)分、焦慮量表（SAS）、抑郁量表（SDS）呈正相關(guān)，與生理功能（PF）、生理職能（RP）、軀體疼痛（BP）、精力（VT）、社會(huì)功能（SF）、情感職能（RE）呈負(fù)相關(guān);LINC00638與類風(fēng)濕因子、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體、免疫球蛋白M、VAS評(píng)分呈正相關(guān)，與RP、一般健康狀況、VT、SF呈負(fù)相關(guān);LINC00663與病程呈正相關(guān)，與SOD、紅細(xì)胞沉降率、C-反應(yīng)蛋白呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者PBMCs存在氧化應(yīng)激相關(guān)差異表達(dá)的lncRNAs，其中AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638有望成為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎氧化應(yīng)激相關(guān)的分子標(biāo)志物。

【關(guān)鍵詞】 關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕;氧化應(yīng)激;lncRNAs;患者感受

【ABSTRACT】Objective：To detect the difference of lncRNAs expression profile of oxidative stress in PBMCs of patients with rheumatoid arthritis，and to screen out the molecular markers of oxidative stress and analyze the correlation.Methods：The PBMCs of three patients with rheumatoid arthritis and three healthy people were detected by high-throughput sequencing.Gene clustering and KEGG Pathway were used to analyze lncRNAs;Cytoscape was used to analyze the network diagram co-expressed between lncRNAs，miRNA and mRNA.qRT-PCR was used to verify the differential expression of lncRNAs in 20 patients with rheumatoid arthritis and 20 healthy people.ROC curve was used to analyze the potential of lncRNAs as a molecular marker of oxidative stress in rheumatoid arthritis.Correlation between lncRNAs and clinical indexes and SPP was analyzed.Results：①The results of high-throughput sequencing showed that there were 34 differential expressions of lncRNAs，among whcih 19 were up-regulated and 15 were down regulated，and the 7 lncRNAs with the highest multiple of difference were AC019117.2，LINC00630，AC007952.5，LINC00663，LINC00638，MIAT and PSMG3-AS1;②Bioinformatics analysis showed that lncRNAs of oxidative stress were mainly enriched in weigel oxidative stress response，weigel oxidative stress by hne and H2O2;③The results of RT-qPCR showed that compared with healthy people，the expressions of AC019117.2 and LINC00630 significantly increased（P < 0.05），the expressions of AC007952.5，LINC00663 and LINC00638 significantly decreased（P < 0.05），and the expression differences of MIAT and PSMG3-AS1 had no statistical significance（P > 0.05）;④The results of ROC curve showed that the AUC of AC019117.2，LINC00630，AC007952.5，LINC00663，LINC00638 were 0.676，0.784，0.834，0.643 and 0.638 respectively;⑤The results of correlation analysis showed that AC007952.5 was negatively correlated with SOD and age，and positively correlated with immunoglobulin;AC019117.2 was positively correlated with DAS28，VAS，SAS and SDS and negatively correlated with PF，RP，BP，VT，SF and RE;LINC00638 was positively correlated with rheumatoid factor，anti cyclic citrullinated peptide antibody，immunoglobulin M and VAS，and negatively correlated with RP，general health status，VT，SF;LINC00663 was positively correlated with the course of disease，and negatively correlated with SOD，erythrocyte sedimentation rate，C-reactive protein.Conclusion：There are lncRNAs related to oxidative stress in PBMCs of patients with rheumatoid arthritis，among which AC019117.2，LINC00630，AC007952.5，LINC00663，LINC00638 are expected to be molecular markers related to oxidative stress in rheumatoid arthritis.

【Keywords】 arthritis，rheumatoid;oxidative stress;lncRNAs;SPP

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥、關(guān)節(jié)破壞及血管翳形成等為主要特征的疾病[1]。RA發(fā)病率高，發(fā)病機(jī)制尚不清楚，研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激產(chǎn)生的自由基參與RA的發(fā)病[2]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNAs）是一種長(zhǎng)度 > 200 nt的調(diào)節(jié)性非編碼RNA，由5'帽子結(jié)構(gòu)和3'多聚腺苷酸（poly A）尾組成，可以通過(guò)ceRNA途徑，發(fā)揮“海綿”樣吸附作用，靶向調(diào)控miRNA[3-4]。研究表明，lncRNAs與腫瘤、自身免疫系統(tǒng)等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，并作為疾病早期診斷和預(yù)后的標(biāo)志物[5-9]。前期已有研究證明，lncRNAs參與RA的發(fā)病，但氧化應(yīng)激相關(guān)的lncRNAs在RA中表達(dá)情況及與RA關(guān)系的研究較少。故本研究通過(guò)高通量測(cè)序檢測(cè)RA患者和健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）中l(wèi)ncRNAs表達(dá)譜的差異，并進(jìn)行生物信息學(xué)分析，旨在篩選出與RA氧化應(yīng)激相關(guān)的lncRNAs，進(jìn)而為RA早期診斷、治療及其他自身免疫炎癥性疾病提供潛在靶點(diǎn)和新思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年6月至2019年12月在安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院的RA患者20例，男3例，女17例;平均年齡（57.00±13.12）歲。20例健康人中男3例，女17例;平均年齡（55.19±10.49）歲。均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（ACR）修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)[10];同時(shí)從健康體檢中心選取基線一致的健康人20例作為健康對(duì)照組。2組患者在性別、年齡等方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。所有受試者均簽署知情同意書(shū)。本研究經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理號(hào)2018AH-19）。

1.2 PBMCs的分離及總RNA提取 分別抽取RA患者和健康對(duì)照組空腹外周靜脈血5 mL，EDTA管抗凝，然后用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心法分離PBMCs，根據(jù)TRIzol reagent的操作步驟提取總RNA。

1.3 試劑和儀器 Ficoll淋巴細(xì)胞分離液（GE Healthcare Bio-sciences AS，Sweden），TRIzol reagent（Life Technologies/Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA，USA），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Prime ScriptTM RT reagent Kit），qTR-PCR試劑盒（SYBR? Premix Ex TaqTM Ⅱ）均購(gòu)自大連TaKaRa公司;引物由上海生工公司合成;實(shí)時(shí)定量PCR儀器購(gòu)自美國(guó)Thermo公司。

1.4 高通量測(cè)序及生物信息學(xué)分析 高通量測(cè)序及生物信息學(xué)分析由上海典希生物醫(yī)藥科技有限公司完成。根據(jù)NEBNext超定向RNA文庫(kù)試劑盒（NEB，Beverly，MA，USA）提供的說(shuō)明，對(duì)純化RNA進(jìn)行第一鏈cDNA合成，最后在HiSeq3000（Illumina）上進(jìn)行測(cè)序（2×150 bp）?；贕O（Gene ontology）和KEGG（Kyoto Encyclo-pedia of Gene and Genomes）數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)RA氧化應(yīng)激關(guān)鍵差異表達(dá)的lncRNAs進(jìn)行顯著性富集分析，利用Cytoscape進(jìn)行基因之間共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析。

1.5 RT-qPCR驗(yàn)證 應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA逆轉(zhuǎn)為cDNA，根據(jù)PCR試劑盒驗(yàn)證篩選差異表達(dá)的lncRNAs，采用2?△△ct法對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析，qRT-PCR以GAPDH為內(nèi)參，引物序列信息見(jiàn)表1。

1.6 觀察指標(biāo) ①患者一般情況：性別、年齡、病程等。②臨床指標(biāo)：超氧化物歧化酶（SOD）、紅細(xì)胞沉降率（ESR）、C-反應(yīng)蛋白（CRP）、類風(fēng)濕因子（RF）、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4。③患者感受（SPP）：疾病活動(dòng)度（DAS28）、視覺(jué)模擬評(píng)分法（VAS）評(píng)分、焦慮量表（SAS）、抑郁量表（SDS）、健康調(diào)查簡(jiǎn)表（SF-36），其中SF-36量表由生理功能（PF）、生理職能（RP）、軀體疼痛（BP）、一般健康狀況（GH）、精力（VT）、社會(huì)功能（SF）、情感職能（RE）、精神健康（MH）8個(gè)維度組成。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism version 6.0 （Graphpad Software，San Diego，CA，USA）軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用SPSS Statistics軟件（IBM Corporation，Armonk，NY，USA）繪制受試者工作特征曲線（ROC曲線），篩選lncRNAs差異表達(dá)的閾值為2.0倍以上（P < 0.05）。計(jì)量資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，各參數(shù)之間的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 高通量測(cè)序結(jié)果 對(duì)3例RA患者和3例健康人的PBMCs進(jìn)行高通量測(cè)序，測(cè)序數(shù)據(jù)經(jīng)歸一化處理。結(jié)果顯示，與健康對(duì)照組相比，RA組共有341種lncRNAs表達(dá)發(fā)生變化，對(duì)氧化應(yīng)激相關(guān)顯著差異表達(dá)的34個(gè)lncRNAs進(jìn)行分層聚類分析，上調(diào)的有19個(gè)，下調(diào)的有15個(gè)，結(jié)果見(jiàn)圖1。根據(jù)log2（FC）≥1.0或log2（FC）≤-1.0，且FDR≤0.05，選取顯著性差異表達(dá)倍數(shù)最高的前7位lncRNAs進(jìn)行分析，見(jiàn)表2。

2.2 生物信息學(xué)分析結(jié)果 KEGG通路分析得出，氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNAs主要富集在weigel oxidative stress response，weigel oxidative stress by hne and H2O2等。GO和Cytoscape分析得出2條RA氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNA-mRNA的網(wǎng)絡(luò)圖，以及l(fā)ncRNA-miRNA-mRNA之間的網(wǎng)絡(luò)圖，見(jiàn)圖2、圖3、圖4。

2.3 RT-qPCR驗(yàn)證 選取20對(duì)RA患者及健康人顯著性差異最大的前7條lncRNAs，應(yīng)用RT-qPCR檢測(cè)2組lncRNAs的表達(dá)。結(jié)果顯示，與健康人相比，AC019117.2、LINC00630的表達(dá)顯著高于健康人（P < 0.05），AC007952.5、LINC00663、LINC00638的表達(dá)顯著低于健康人（P < 0.05），MIAT、PSMG3-AS1的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。

2.4 ROC曲線分析 對(duì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638進(jìn)行ROC曲線分析，曲線下面積（AUC）分別為0.676，0.784，0.834，0.643，0.638，說(shuō)明以上基因?qū)A均具有診斷價(jià)值。

2.5 lncRNAs與臨床指標(biāo)、SPP相關(guān)性分析 將氧化應(yīng)激關(guān)鍵差異表達(dá)的lncRNAs與臨床指標(biāo)及SPP進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，AC007952.5與SOD（r = -0.32，P = 0.023）、年齡（r = ?-0.32，P = 0.031）呈負(fù)相關(guān)，與IgA（r = 0.61，P = 0.017）呈正相關(guān);AC019117.2與病程（r = 0.56，P = 0.011）、DAS28（r = 0.44，P = 0.014）、VAS評(píng)分（r = 0.55，P = 0.009）、SAS（r = 0.46，P = 0.010）、SDS（r = -0.56，P = 0.002）呈正相關(guān)，與RP（r = -0.42，P = 0.015）、BP（r = -0.54，P = 0.034）、VT（r = -0.56，P = 0.010）、SF（r = -0.55，P = 0.011）、RE（r = -0.42，P = 0.043）呈負(fù)相關(guān);LINC00638與RF（r = 0.37，P = 0.000）、抗CCP抗體（r = 0.38，P = 0.010）、IgM（r = 0.47，P = 0.020）、VAS評(píng)分（r = 0.46，P = 0.003）呈正相關(guān)，與RP（r = -0.38，P = 0.023）、GH（r = -0.47，P = 0.026）、VT（r =?-0.40，P = 0.034）、SF（r = -0.43，P = 0.045）呈負(fù)相關(guān);LINC00663與病程（r = 0.47，P = 0.030）呈正相關(guān)，與SOD（r = -0.34，P = 0.003）、ESR（r =?-0.41，P = 0.018）、CRP（r = -0.36，P = 0.048）呈負(fù)相關(guān)。

3 討 論

RA早期得不到診斷和適當(dāng)?shù)闹委煟罱K可能導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形、功能喪失，嚴(yán)重影響患者的情緒、生活質(zhì)量和社會(huì)功能等[11]。由于發(fā)病機(jī)制不清楚，缺乏特異性檢查指標(biāo)，目前尚無(wú)根治方法。氧化應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致中性粒細(xì)胞炎性浸潤(rùn)，促進(jìn)活性氧簇（ROS）和活性氮簇（RNS）自由基的大量產(chǎn)生，自由基可作為氧化劑和炎癥介質(zhì)參與RA病理過(guò)程[12]。因此，尋找與氧化應(yīng)激相關(guān)特異性的、可早期診斷的分子標(biāo)志物對(duì)于RA的早期診斷和治療具有重要的意義。

近年來(lái)，由于高通量測(cè)序技術(shù)和各種生物學(xué)信息技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的lncRNAs在各種疾病中被發(fā)現(xiàn)且都發(fā)揮重要作用。到目前為止，lncRNAs在表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后等水平影響基因的表達(dá)，甚至調(diào)節(jié)下游通路等。這預(yù)示著lncRNAs似乎具有更高的診斷和預(yù)后價(jià)值，不僅因?yàn)槠浣M織和疾病特異性表達(dá)模式，還因?yàn)楦叨确€(wěn)定的物理和化學(xué)性質(zhì)[13]。這使得lncRNAs具有作為疾病分子標(biāo)志物的潛能，進(jìn)而為疾病的早期診斷、療效評(píng)價(jià)、預(yù)后預(yù)測(cè)提供新的靶點(diǎn)。

本次研究通過(guò)對(duì)3例RA患者和健康人進(jìn)行高通量測(cè)序，與健康對(duì)照組相比，RA組共有341種lncRNAs表達(dá)發(fā)生變化，對(duì)氧化應(yīng)激相關(guān)顯著差異表達(dá)的34個(gè)lncRNAs進(jìn)行分層聚類分析，結(jié)果上調(diào)19個(gè)，下調(diào)15個(gè)。根據(jù)log2（FC）≥1.0或log2（FC）≤-1.0，且FDR≤0.05，筆者選取差異倍數(shù)最大的7個(gè)lncRNAs進(jìn)行下一步臨床驗(yàn)證，分別是AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638、MIAT、PSMG3-AS1。KEGG通路分析得出，氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNAs主要富集在weigel oxidative stress response，weigel oxidative stress by hne and H2O2等。GO和Cytoscape分析得出2條RA氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNA-mRNA的網(wǎng)絡(luò)圖，以及l(fā)ncRNA-miRNA-mRNA之間的網(wǎng)絡(luò)圖。本團(tuán)隊(duì)前期對(duì)RA外周血PBMCs進(jìn)行高通量測(cè)序，發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)的lncRNAs主要與細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激和Notch通路有關(guān)[14]。有研究通過(guò)對(duì)9例RA患者和9例正常人PBMCs進(jìn)行微陣列分析發(fā)現(xiàn)，2組間有2099個(gè)差異表達(dá)的lncRNAs，上調(diào)的有1099個(gè)，下調(diào)的有1000個(gè)[15]。

為了進(jìn)一步分析上述lncRNAs，筆者選取20例RA患者和20例健康人進(jìn)行RT-qPCR臨床驗(yàn)證。結(jié)果顯示，與健康人相比，AC019117.2、LINC00630的表達(dá)顯著高于健康人（P < 0.05），AC007952.5、LINC00663、LINC00638的表達(dá)顯著低于健康人（P < 0.05），MIAT、PSMG3-AS1的表達(dá)與健康人比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。同時(shí)，對(duì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638經(jīng)ROC曲線分析，AUC分別為0.676，0.784，0.834，0.643，0.638，說(shuō)明這些lncRNAs都具有作為RA分子標(biāo)志物的潛能，值得進(jìn)一步關(guān)注。ZHENG等[16]通過(guò)微陣列芯片對(duì)10例RA患者和10例正常人標(biāo)本進(jìn)行circRNA篩選，結(jié)果表明，上調(diào)的circRNA有255個(gè)，下調(diào)的有329個(gè)，選用12個(gè)差異倍數(shù)較大的circRNA進(jìn)行了40個(gè)臨床樣本的RT-qPCR驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)hsa_circRNA_104194與微陣列結(jié)果一致，所以推測(cè)hsa_circRNA_104194可能在RA基因表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮作用，可作為后續(xù)功能與機(jī)制研究的候選基因。

目前，臨床上診斷RA的指標(biāo)包括RF、抗CCP抗體、ESR、CRP、IgA、補(bǔ)體C3等。另外，SPP受到越來(lái)越多的關(guān)注，它是反映患者疾病以及治療對(duì)其生理功能、心理健康、社會(huì)關(guān)系、治療效果等方面影響的評(píng)價(jià)指標(biāo)，國(guó)際上通常采用各種反映SPP的評(píng)分量表對(duì)患者治療前后生活質(zhì)量的變化進(jìn)行評(píng)分，包括DAS28評(píng)分量表、焦慮抑郁量表（SAS、SDS）、簡(jiǎn)明健康狀況調(diào)查問(wèn)卷量表（SF-36）等[17]。另外，筆者將氧化應(yīng)激關(guān)鍵差異表達(dá)的lncRNAs與臨床指標(biāo)及SPP進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，AC007952.5與SOD、年齡呈負(fù)相關(guān)，與IgA呈正相關(guān);AC019117.2與病程、DAS28、VAS評(píng)分、SAS、SDS呈正相關(guān)，與PF、RP、BP、VT、SF、RE呈負(fù)相關(guān);LINC00638與RF、抗CCP抗體、IgM、VAS評(píng)分呈正相關(guān)，與RP、GH、VT、SF呈負(fù)相關(guān);LINC00663與病程呈正相關(guān)，與SOD、ESR、CRP呈負(fù)相關(guān)。ESR、RF、抗CCP抗體、SOD等是反映RA疾病活動(dòng)度的重要臨床指標(biāo)，眾多l(xiāng)ncRNA也是通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miRNA，參與RA免疫炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)RA發(fā)病，而筆者研究也表明，氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNAs與臨床指標(biāo)密切相關(guān)。有研究認(rèn)為，RA并發(fā)精神心理疾病、生活質(zhì)量降低等與疾病活動(dòng)相關(guān)，主要是由于免疫介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)所誘導(dǎo)[18-19]。筆者研究也發(fā)現(xiàn)，lncRNAs不僅與免疫炎癥等臨床指標(biāo)相關(guān)，也與反映患者情緒及生活質(zhì)量的DAS28、SAS、SDS、SF-36等密切相關(guān)。LUO等[20]也通過(guò)微陣列芯片技術(shù)差異表達(dá)的circRNA進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證以及ROC曲線進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)hsa_cic_0044235在RA外周血中表達(dá)降低，所以推測(cè)其可作為RA臨床血液樣品診斷標(biāo)志物，但是與ESR、CRP、RF、抗CCP抗體、DAS28無(wú)相關(guān)性。

綜上所述，本研究通過(guò)高通量測(cè)序及生信學(xué)分析，并結(jié)合臨床RT-qPCR驗(yàn)證及相關(guān)性分析，認(rèn)為AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638可以作為RA氧化應(yīng)激關(guān)鍵lnRNAs，但其作用機(jī)制尚不清楚。因此，我們今后將進(jìn)一步深入研究RA氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNAs的機(jī)制，這有可能在臨床上為RA早期診斷、靶向治療和生存預(yù)后提供一個(gè)新思路。

參考文獻(xiàn)

[1] FIRESTEIN GS.Evolving concepts of rheumatoid arthritis[J].Nature，2003，423（6937）：356-361.

[2] FONSECA L，SOUZA V，GOULART MOF，et al.Oxidative Stress in Rheumatoid Arthritis：What the Future Might Hold regarding Novel Biomarkers and Add-On Therapies[J].Oxid Med Cell Longev，2019，35（1）：1-16.

[3] KUNG JT，COLOGNORI D，LEE JT.Long noncoding RNAs：past，Present，and future[J].Genetics，2013，193（3）：651-669.

[4] YE Y，GAO X，YANG N.LncRNA ZFAS1 promotes cell migration and invasion of fibroblast-like synoviocytes by suppression of miR-27a in rheumatoid arthritis[J].Hum Cell，2018，31（1）：14-21.

[5] FU J，SHI H，WANG B，et al.LncRNA PVT1 links Myc to glycolytic metabolism upon CD4 T cell activation and Sj?gren's syndrome-like autoimmune response[J].J Autoimmun，2019，8（9）：256-262.

[6] ZHAO CN，MAO YM，LIU LN，et al.Emerging role of lncRNAs in systemic lupus erythematosus[J].Biomed Pharmacother，2018，106（56）：584-592.

[7] TEIMURI S，HOSSEINI A，REZAENASAB A，et al.Integrative Analysis of lncRNAs in Th17 Cell Lineage to Discover New Potential Biomarkers and Therapeutic Targets in Autoimmune Diseases[J].Mol Ther Nucleic Acids，2018，12（9）：392-404.

[8] HUR K，KIM SH，KIM JM.Potential Implications of Long Noncoding RNAs in Autoimmune Diseases[J].Immune Netw，2019，19（1）：e4.

[9] WANG S，JIANG W，ZHANG X，et al.LINC-PINT alleviates lung cancer progression via sponging miR-543 and inducing PTEN[J].Cancer Med，2020，9（6）：1-11.

[10] DANIEL A，TUHINA N，ALAN JS.2010 Rheumatoid Arthritis Classifi cation Criteria[J].Arthritis Rheumatism，2010，62（9）：2569-2581.

[11] 張穎，劉健，黃旦，等.135例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者感受的變化及其相關(guān)性分析[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2019，8（11）：15-19.

[12] 孫玥，劉健，萬(wàn)磊，等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者心肺功能變化及與B、T淋巴細(xì)胞衰減因子及氧化應(yīng)激的相關(guān)性分析[J].免疫學(xué)雜志，2015，31（3）：234-239.

[13] LIANG J，CHEN W，LIN J，et al.LncRNA：An All-rounder in Rheumatoid Arthritis[J].J Transl Int Med，2019，7（1）：3-9

[14] 劉健，萬(wàn)磊，孫玥，等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單核細(xì)胞lncRNA差異表達(dá)譜研究[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2019，8（2）：10-15.

[15] YUAN M，WANG S，YU L，et al.Long noncoding RNA profiling revealed differentially expressed lncRNAs associated with disease activity in PBMCs from patients with rheumatoid arthritis[J].PLoS One，2017，12（11）：e0186795

[16] ZHENG F，YU X，HUANG J，et al.Circular RNA expression profiles of peripheral blood mononuclear cells in rheumatoid arthritis patients，based on microarray chip technology[J].Mol Med Rep，2017，16（6）：8029-8036.

[17] OUDE VOSHAAR MAH，DAS GUPTA Z，BIJLSMA JWJ，et al.International Consortium for Health Outcome Measurement Set of Outcomes That Matter to People Living With Inflammatory Arthritis：Consensus From an International Working Group[J].Arthritis Care Res，2019，71（12）：1556-1565.

[18] MAZZA MG，LUCCHI S，TRINGALI AGM，et al.Neutrophil/lymphocyte ratio and platel/lymp-hocyte ratio in mood disorders：A meta-analysis[J].Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry，2018，84（8）：229-236.

[19] MARTINEC R，PINJATELA R，BALEN D.Quality of Life in Patients with Rheumatoid Arthritis-A Preliminary Study[J].Acta Clin Croat，2019，58（1）：157-166.

[20] LUO Q，ZHANG L，LI X，et al.Identification of circular RNAs hsa_circ_0044235 in peripheral blood as novel biomarkers for rheumatoid arthritis[J].Int J Mol Med，2019，44（4）：1462-1472.

收稿日期：2020-02-15;修回日期：2020-03-30