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    類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNAs表達(dá)譜的篩選驗(yàn)證及相關(guān)性分析

    2020-09-21 08:41文建庭劉健萬(wàn)磊姜輝忻凌孫玥孫艷秋張穎杜新雷王馨王杰
    關(guān)鍵詞:氧化應(yīng)激類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎

    文建庭 劉健 萬(wàn)磊 姜輝 忻凌 孫玥 孫艷秋 張穎 杜新雷 王馨 王杰

    【摘 要】目的:檢測(cè)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)氧化應(yīng)激關(guān)鍵長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNAs)表達(dá)譜的差異,結(jié)合臨床進(jìn)行驗(yàn)證,篩選出類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎氧化應(yīng)激分子標(biāo)志物,并進(jìn)行相關(guān)性分析。方法:采用高通量測(cè)序技術(shù)分別對(duì)3例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者和3例健康人的PBMCs進(jìn)行檢測(cè),基因聚類和KEGG通路分析類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎氧化應(yīng)激差異表達(dá)的lncRNAs,Cytoscape分析lncRNAs、miRNA、mRNA之間的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)圖;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)對(duì)20例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者和20例健康人差異表達(dá)lncRNAs進(jìn)行驗(yàn)證,ROC曲線分析lncRNAs作為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎氧化應(yīng)激分子標(biāo)志物的潛力,相關(guān)性分析lncRNAs與臨床指標(biāo)及患者感受(SPP)之間的關(guān)聯(lián)。結(jié)果:①高通量測(cè)序結(jié)果顯示,類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎氧化應(yīng)激相關(guān)的差異表達(dá)lncRNAs是34個(gè),上調(diào)19個(gè),下調(diào)15個(gè),差異倍數(shù)最高的7條lncRNAs是AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638、MIAT、PSMG3-AS1;②生物信息學(xué)分析顯示,氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNAs主要富集在weigel oxidative stress response,weigel oxidative stress by hne and H2O2等上;③RT-qPCR結(jié)果顯示,與健康人相比,AC019117.2、LINC00630表達(dá)顯著升高(P < 0.05),AC007952.5、LINC00663、LINC00638表達(dá)顯著降低(P < 0.05),MIAT、PSMG3-AS1的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05);④ROC曲線結(jié)果顯示,AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638曲線下面積(AUC)分別是0.676,0.784,0.834,0.643,0.638;⑥相關(guān)性分析結(jié)果顯示,AC007952.5與超氧化物歧化酶(SOD)、年齡呈負(fù)相關(guān),與免疫球蛋白呈正相關(guān);AC019117.2與病程、疾病活動(dòng)度(DAS28)、視覺(jué)模擬評(píng)分法(VAS)評(píng)分、焦慮量表(SAS)、抑郁量表(SDS)呈正相關(guān),與生理功能(PF)、生理職能(RP)、軀體疼痛(BP)、精力(VT)、社會(huì)功能(SF)、情感職能(RE)呈負(fù)相關(guān);LINC00638與類風(fēng)濕因子、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體、免疫球蛋白M、VAS評(píng)分呈正相關(guān),與RP、一般健康狀況、VT、SF呈負(fù)相關(guān);LINC00663與病程呈正相關(guān),與SOD、紅細(xì)胞沉降率、C-反應(yīng)蛋白呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者PBMCs存在氧化應(yīng)激相關(guān)差異表達(dá)的lncRNAs,其中AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638有望成為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎氧化應(yīng)激相關(guān)的分子標(biāo)志物。

    【關(guān)鍵詞】 關(guān)節(jié)炎,類風(fēng)濕;氧化應(yīng)激;lncRNAs;患者感受

    【ABSTRACT】Objective:To detect the difference of lncRNAs expression profile of oxidative stress in PBMCs of patients with rheumatoid arthritis,and to screen out the molecular markers of oxidative stress and analyze the correlation.Methods:The PBMCs of three patients with rheumatoid arthritis and three healthy people were detected by high-throughput sequencing.Gene clustering and KEGG Pathway were used to analyze lncRNAs;Cytoscape was used to analyze the network diagram co-expressed between lncRNAs,miRNA and mRNA.qRT-PCR was used to verify the differential expression of lncRNAs in 20 patients with rheumatoid arthritis and 20 healthy people.ROC curve was used to analyze the potential of lncRNAs as a molecular marker of oxidative stress in rheumatoid arthritis.Correlation between lncRNAs and clinical indexes and SPP was analyzed.Results:①The results of high-throughput sequencing showed that there were 34 differential expressions of lncRNAs,among whcih 19 were up-regulated and 15 were down regulated,and the 7 lncRNAs with the highest multiple of difference were AC019117.2,LINC00630,AC007952.5,LINC00663,LINC00638,MIAT and PSMG3-AS1;②Bioinformatics analysis showed that lncRNAs of oxidative stress were mainly enriched in weigel oxidative stress response,weigel oxidative stress by hne and H2O2;③The results of RT-qPCR showed that compared with healthy people,the expressions of AC019117.2 and LINC00630 significantly increased(P < 0.05),the expressions of AC007952.5,LINC00663 and LINC00638 significantly decreased(P < 0.05),and the expression differences of MIAT and PSMG3-AS1 had no statistical significance(P > 0.05);④The results of ROC curve showed that the AUC of AC019117.2,LINC00630,AC007952.5,LINC00663,LINC00638 were 0.676,0.784,0.834,0.643 and 0.638 respectively;⑤The results of correlation analysis showed that AC007952.5 was negatively correlated with SOD and age,and positively correlated with immunoglobulin;AC019117.2 was positively correlated with DAS28,VAS,SAS and SDS and negatively correlated with PF,RP,BP,VT,SF and RE;LINC00638 was positively correlated with rheumatoid factor,anti cyclic citrullinated peptide antibody,immunoglobulin M and VAS,and negatively correlated with RP,general health status,VT,SF;LINC00663 was positively correlated with the course of disease,and negatively correlated with SOD,erythrocyte sedimentation rate,C-reactive protein.Conclusion:There are lncRNAs related to oxidative stress in PBMCs of patients with rheumatoid arthritis,among which AC019117.2,LINC00630,AC007952.5,LINC00663,LINC00638 are expected to be molecular markers related to oxidative stress in rheumatoid arthritis.

    【Keywords】 arthritis,rheumatoid;oxidative stress;lncRNAs;SPP

    類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥、關(guān)節(jié)破壞及血管翳形成等為主要特征的疾病[1]。RA發(fā)病率高,發(fā)病機(jī)制尚不清楚,研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激產(chǎn)生的自由基參與RA的發(fā)病[2]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNAs)是一種長(zhǎng)度 > 200 nt的調(diào)節(jié)性非編碼RNA,由5'帽子結(jié)構(gòu)和3'多聚腺苷酸(poly A)尾組成,可以通過(guò)ceRNA途徑,發(fā)揮“海綿”樣吸附作用,靶向調(diào)控miRNA[3-4]。研究表明,lncRNAs與腫瘤、自身免疫系統(tǒng)等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),并作為疾病早期診斷和預(yù)后的標(biāo)志物[5-9]。前期已有研究證明,lncRNAs參與RA的發(fā)病,但氧化應(yīng)激相關(guān)的lncRNAs在RA中表達(dá)情況及與RA關(guān)系的研究較少。故本研究通過(guò)高通量測(cè)序檢測(cè)RA患者和健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中l(wèi)ncRNAs表達(dá)譜的差異,并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,旨在篩選出與RA氧化應(yīng)激相關(guān)的lncRNAs,進(jìn)而為RA早期診斷、治療及其他自身免疫炎癥性疾病提供潛在靶點(diǎn)和新思路。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 選取2019年6月至2019年12月在安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院的RA患者20例,男3例,女17例;平均年齡(57.00±13.12)歲。20例健康人中男3例,女17例;平均年齡(55.19±10.49)歲。均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)[10];同時(shí)從健康體檢中心選取基線一致的健康人20例作為健康對(duì)照組。2組患者在性別、年齡等方面比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05),具有可比性。所有受試者均簽署知情同意書(shū)。本研究經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(倫理號(hào)2018AH-19)。

    1.2 PBMCs的分離及總RNA提取 分別抽取RA患者和健康對(duì)照組空腹外周靜脈血5 mL,EDTA管抗凝,然后用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心法分離PBMCs,根據(jù)TRIzol reagent的操作步驟提取總RNA。

    1.3 試劑和儀器 Ficoll淋巴細(xì)胞分離液(GE Healthcare Bio-sciences AS,Sweden),TRIzol reagent(Life Technologies/Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA,USA),逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Prime ScriptTM RT reagent Kit),qTR-PCR試劑盒(SYBR? Premix Ex TaqTM Ⅱ)均購(gòu)自大連TaKaRa公司;引物由上海生工公司合成;實(shí)時(shí)定量PCR儀器購(gòu)自美國(guó)Thermo公司。

    1.4 高通量測(cè)序及生物信息學(xué)分析 高通量測(cè)序及生物信息學(xué)分析由上海典希生物醫(yī)藥科技有限公司完成。根據(jù)NEBNext超定向RNA文庫(kù)試劑盒(NEB,Beverly,MA,USA)提供的說(shuō)明,對(duì)純化RNA進(jìn)行第一鏈cDNA合成,最后在HiSeq3000(Illumina)上進(jìn)行測(cè)序(2×150 bp)?;贕O(Gene ontology)和KEGG(Kyoto Encyclo-pedia of Gene and Genomes)數(shù)據(jù)庫(kù),對(duì)RA氧化應(yīng)激關(guān)鍵差異表達(dá)的lncRNAs進(jìn)行顯著性富集分析,利用Cytoscape進(jìn)行基因之間共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析。

    1.5 RT-qPCR驗(yàn)證 應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA逆轉(zhuǎn)為cDNA,根據(jù)PCR試劑盒驗(yàn)證篩選差異表達(dá)的lncRNAs,采用2?△△ct法對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析,qRT-PCR以GAPDH為內(nèi)參,引物序列信息見(jiàn)表1。

    1.6 觀察指標(biāo) ①患者一般情況:性別、年齡、病程等。②臨床指標(biāo):超氧化物歧化酶(SOD)、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、類風(fēng)濕因子(RF)、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(抗CCP抗體)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4。③患者感受(SPP):疾病活動(dòng)度(DAS28)、視覺(jué)模擬評(píng)分法(VAS)評(píng)分、焦慮量表(SAS)、抑郁量表(SDS)、健康調(diào)查簡(jiǎn)表(SF-36),其中SF-36量表由生理功能(PF)、生理職能(RP)、軀體疼痛(BP)、一般健康狀況(GH)、精力(VT)、社會(huì)功能(SF)、情感職能(RE)、精神健康(MH)8個(gè)維度組成。

    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism version 6.0 (Graphpad Software,San Diego,CA,USA)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用SPSS Statistics軟件(IBM Corporation,Armonk,NY,USA)繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線),篩選lncRNAs差異表達(dá)的閾值為2.0倍以上(P < 0.05)。計(jì)量資料以表示,組間比較采用t檢驗(yàn),各參數(shù)之間的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 高通量測(cè)序結(jié)果 對(duì)3例RA患者和3例健康人的PBMCs進(jìn)行高通量測(cè)序,測(cè)序數(shù)據(jù)經(jīng)歸一化處理。結(jié)果顯示,與健康對(duì)照組相比,RA組共有341種lncRNAs表達(dá)發(fā)生變化,對(duì)氧化應(yīng)激相關(guān)顯著差異表達(dá)的34個(gè)lncRNAs進(jìn)行分層聚類分析,上調(diào)的有19個(gè),下調(diào)的有15個(gè),結(jié)果見(jiàn)圖1。根據(jù)log2(FC)≥1.0或log2(FC)≤-1.0,且FDR≤0.05,選取顯著性差異表達(dá)倍數(shù)最高的前7位lncRNAs進(jìn)行分析,見(jiàn)表2。

    2.2 生物信息學(xué)分析結(jié)果 KEGG通路分析得出,氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNAs主要富集在weigel oxidative stress response,weigel oxidative stress by hne and H2O2等。GO和Cytoscape分析得出2條RA氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNA-mRNA的網(wǎng)絡(luò)圖,以及l(fā)ncRNA-miRNA-mRNA之間的網(wǎng)絡(luò)圖,見(jiàn)圖2、圖3、圖4。

    2.3 RT-qPCR驗(yàn)證 選取20對(duì)RA患者及健康人顯著性差異最大的前7條lncRNAs,應(yīng)用RT-qPCR檢測(cè)2組lncRNAs的表達(dá)。結(jié)果顯示,與健康人相比,AC019117.2、LINC00630的表達(dá)顯著高于健康人(P < 0.05),AC007952.5、LINC00663、LINC00638的表達(dá)顯著低于健康人(P < 0.05),MIAT、PSMG3-AS1的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05)。

    2.4 ROC曲線分析 對(duì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638進(jìn)行ROC曲線分析,曲線下面積(AUC)分別為0.676,0.784,0.834,0.643,0.638,說(shuō)明以上基因?qū)A均具有診斷價(jià)值。

    2.5 lncRNAs與臨床指標(biāo)、SPP相關(guān)性分析 將氧化應(yīng)激關(guān)鍵差異表達(dá)的lncRNAs與臨床指標(biāo)及SPP進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示,AC007952.5與SOD(r = -0.32,P = 0.023)、年齡(r = ?-0.32,P = 0.031)呈負(fù)相關(guān),與IgA(r = 0.61,P = 0.017)呈正相關(guān);AC019117.2與病程(r = 0.56,P = 0.011)、DAS28(r = 0.44,P = 0.014)、VAS評(píng)分(r = 0.55,P = 0.009)、SAS(r = 0.46,P = 0.010)、SDS(r = -0.56,P = 0.002)呈正相關(guān),與RP(r = -0.42,P = 0.015)、BP(r = -0.54,P = 0.034)、VT(r = -0.56,P = 0.010)、SF(r = -0.55,P = 0.011)、RE(r = -0.42,P = 0.043)呈負(fù)相關(guān);LINC00638與RF(r = 0.37,P = 0.000)、抗CCP抗體(r = 0.38,P = 0.010)、IgM(r = 0.47,P = 0.020)、VAS評(píng)分(r = 0.46,P = 0.003)呈正相關(guān),與RP(r = -0.38,P = 0.023)、GH(r = -0.47,P = 0.026)、VT(r =?-0.40,P = 0.034)、SF(r = -0.43,P = 0.045)呈負(fù)相關(guān);LINC00663與病程(r = 0.47,P = 0.030)呈正相關(guān),與SOD(r = -0.34,P = 0.003)、ESR(r =?-0.41,P = 0.018)、CRP(r = -0.36,P = 0.048)呈負(fù)相關(guān)。

    3 討 論

    RA早期得不到診斷和適當(dāng)?shù)闹委煟罱K可能導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形、功能喪失,嚴(yán)重影響患者的情緒、生活質(zhì)量和社會(huì)功能等[11]。由于發(fā)病機(jī)制不清楚,缺乏特異性檢查指標(biāo),目前尚無(wú)根治方法。氧化應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致中性粒細(xì)胞炎性浸潤(rùn),促進(jìn)活性氧簇(ROS)和活性氮簇(RNS)自由基的大量產(chǎn)生,自由基可作為氧化劑和炎癥介質(zhì)參與RA病理過(guò)程[12]。因此,尋找與氧化應(yīng)激相關(guān)特異性的、可早期診斷的分子標(biāo)志物對(duì)于RA的早期診斷和治療具有重要的意義。

    近年來(lái),由于高通量測(cè)序技術(shù)和各種生物學(xué)信息技術(shù)的發(fā)展,越來(lái)越多的lncRNAs在各種疾病中被發(fā)現(xiàn)且都發(fā)揮重要作用。到目前為止,lncRNAs在表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后等水平影響基因的表達(dá),甚至調(diào)節(jié)下游通路等。這預(yù)示著lncRNAs似乎具有更高的診斷和預(yù)后價(jià)值,不僅因?yàn)槠浣M織和疾病特異性表達(dá)模式,還因?yàn)楦叨确€(wěn)定的物理和化學(xué)性質(zhì)[13]。這使得lncRNAs具有作為疾病分子標(biāo)志物的潛能,進(jìn)而為疾病的早期診斷、療效評(píng)價(jià)、預(yù)后預(yù)測(cè)提供新的靶點(diǎn)。

    本次研究通過(guò)對(duì)3例RA患者和健康人進(jìn)行高通量測(cè)序,與健康對(duì)照組相比,RA組共有341種lncRNAs表達(dá)發(fā)生變化,對(duì)氧化應(yīng)激相關(guān)顯著差異表達(dá)的34個(gè)lncRNAs進(jìn)行分層聚類分析,結(jié)果上調(diào)19個(gè),下調(diào)15個(gè)。根據(jù)log2(FC)≥1.0或log2(FC)≤-1.0,且FDR≤0.05,筆者選取差異倍數(shù)最大的7個(gè)lncRNAs進(jìn)行下一步臨床驗(yàn)證,分別是AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638、MIAT、PSMG3-AS1。KEGG通路分析得出,氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNAs主要富集在weigel oxidative stress response,weigel oxidative stress by hne and H2O2等。GO和Cytoscape分析得出2條RA氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNA-mRNA的網(wǎng)絡(luò)圖,以及l(fā)ncRNA-miRNA-mRNA之間的網(wǎng)絡(luò)圖。本團(tuán)隊(duì)前期對(duì)RA外周血PBMCs進(jìn)行高通量測(cè)序,發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)的lncRNAs主要與細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激和Notch通路有關(guān)[14]。有研究通過(guò)對(duì)9例RA患者和9例正常人PBMCs進(jìn)行微陣列分析發(fā)現(xiàn),2組間有2099個(gè)差異表達(dá)的lncRNAs,上調(diào)的有1099個(gè),下調(diào)的有1000個(gè)[15]。

    為了進(jìn)一步分析上述lncRNAs,筆者選取20例RA患者和20例健康人進(jìn)行RT-qPCR臨床驗(yàn)證。結(jié)果顯示,與健康人相比,AC019117.2、LINC00630的表達(dá)顯著高于健康人(P < 0.05),AC007952.5、LINC00663、LINC00638的表達(dá)顯著低于健康人(P < 0.05),MIAT、PSMG3-AS1的表達(dá)與健康人比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05)。同時(shí),對(duì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638經(jīng)ROC曲線分析,AUC分別為0.676,0.784,0.834,0.643,0.638,說(shuō)明這些lncRNAs都具有作為RA分子標(biāo)志物的潛能,值得進(jìn)一步關(guān)注。ZHENG等[16]通過(guò)微陣列芯片對(duì)10例RA患者和10例正常人標(biāo)本進(jìn)行circRNA篩選,結(jié)果表明,上調(diào)的circRNA有255個(gè),下調(diào)的有329個(gè),選用12個(gè)差異倍數(shù)較大的circRNA進(jìn)行了40個(gè)臨床樣本的RT-qPCR驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)hsa_circRNA_104194與微陣列結(jié)果一致,所以推測(cè)hsa_circRNA_104194可能在RA基因表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮作用,可作為后續(xù)功能與機(jī)制研究的候選基因。

    目前,臨床上診斷RA的指標(biāo)包括RF、抗CCP抗體、ESR、CRP、IgA、補(bǔ)體C3等。另外,SPP受到越來(lái)越多的關(guān)注,它是反映患者疾病以及治療對(duì)其生理功能、心理健康、社會(huì)關(guān)系、治療效果等方面影響的評(píng)價(jià)指標(biāo),國(guó)際上通常采用各種反映SPP的評(píng)分量表對(duì)患者治療前后生活質(zhì)量的變化進(jìn)行評(píng)分,包括DAS28評(píng)分量表、焦慮抑郁量表(SAS、SDS)、簡(jiǎn)明健康狀況調(diào)查問(wèn)卷量表(SF-36)等[17]。另外,筆者將氧化應(yīng)激關(guān)鍵差異表達(dá)的lncRNAs與臨床指標(biāo)及SPP進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示,AC007952.5與SOD、年齡呈負(fù)相關(guān),與IgA呈正相關(guān);AC019117.2與病程、DAS28、VAS評(píng)分、SAS、SDS呈正相關(guān),與PF、RP、BP、VT、SF、RE呈負(fù)相關(guān);LINC00638與RF、抗CCP抗體、IgM、VAS評(píng)分呈正相關(guān),與RP、GH、VT、SF呈負(fù)相關(guān);LINC00663與病程呈正相關(guān),與SOD、ESR、CRP呈負(fù)相關(guān)。ESR、RF、抗CCP抗體、SOD等是反映RA疾病活動(dòng)度的重要臨床指標(biāo),眾多l(xiāng)ncRNA也是通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miRNA,參與RA免疫炎癥反應(yīng),誘導(dǎo)RA發(fā)病,而筆者研究也表明,氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNAs與臨床指標(biāo)密切相關(guān)。有研究認(rèn)為,RA并發(fā)精神心理疾病、生活質(zhì)量降低等與疾病活動(dòng)相關(guān),主要是由于免疫介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)所誘導(dǎo)[18-19]。筆者研究也發(fā)現(xiàn),lncRNAs不僅與免疫炎癥等臨床指標(biāo)相關(guān),也與反映患者情緒及生活質(zhì)量的DAS28、SAS、SDS、SF-36等密切相關(guān)。LUO等[20]也通過(guò)微陣列芯片技術(shù)差異表達(dá)的circRNA進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證以及ROC曲線進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)hsa_cic_0044235在RA外周血中表達(dá)降低,所以推測(cè)其可作為RA臨床血液樣品診斷標(biāo)志物,但是與ESR、CRP、RF、抗CCP抗體、DAS28無(wú)相關(guān)性。

    綜上所述,本研究通過(guò)高通量測(cè)序及生信學(xué)分析,并結(jié)合臨床RT-qPCR驗(yàn)證及相關(guān)性分析,認(rèn)為AC019117.2、LINC00630、AC007952.5、LINC00663、LINC00638可以作為RA氧化應(yīng)激關(guān)鍵lnRNAs,但其作用機(jī)制尚不清楚。因此,我們今后將進(jìn)一步深入研究RA氧化應(yīng)激關(guān)鍵lncRNAs的機(jī)制,這有可能在臨床上為RA早期診斷、靶向治療和生存預(yù)后提供一個(gè)新思路。

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    收稿日期:2020-02-15;修回日期:2020-03-30

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