嵌合抗原受體T細(xì)胞治療產(chǎn)品及其企業(yè)GMP實(shí)施現(xiàn)狀

譚建新 于玲莉 王沖

摘 要 目前，我國嵌合抗原受體T細(xì)胞（chimeric antigen receptor T cell， CAR-T細(xì)胞）治療產(chǎn)品研發(fā)如火如荼，其中個別品種即將進(jìn)入報(bào)產(chǎn)上市階段。本文結(jié)合國內(nèi)產(chǎn)業(yè)的實(shí)際情況和現(xiàn)有的藥品監(jiān)管經(jīng)驗(yàn)，就今后在CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)過程中實(shí)施GMP方面可能存在的共性問題及監(jiān)管要求進(jìn)行思考與分析，希望能為業(yè)界提供參考。

關(guān)鍵詞 嵌合抗原受體T細(xì)胞 細(xì)胞治療產(chǎn)品 藥品GMP

中圖分類號：R951 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：C 文章編號：1006-1533（2020）15-0064-07

An introduction to chimeric antigen receptor T cell therapy products and their current status of GMP implementation

TAN Jianxin*， YU Lingli， WANG Chong

（Shanghai Center for Drug Evaluation and Inspection， Shanghai 201203， China）

ABSTRACT In recent years， China has become one of the most active players in chimeric antigen receptor T cell （CAR-T cell） therapy development. With the rapid advancement of CAR-T cell clinical trials， some products are going to commercial manufacturing stage. In this article， we would like to discuss and analyze the common problems and regulatory requirements that may exist in the manufacturing processes based on the current situation of domestic CAR-T cell industrial construction and existing regulatory experiences so as to provide reference for this industry.

KEY WORDS chimeric antigen receptor T cell； cellular therapy products； GMP for drugs

隨著諾華公司的Kymriah（tisagenlecleucel）和凱特公司的Yescarta（axicabtagene ciloleucel）相繼獲得美國FDA和歐盟委員會的上市許可，嵌合抗原受體T細(xì)胞（chimeric antigen receptor T cell， CAR-T細(xì)胞）治療產(chǎn)品研發(fā)已成為近年來抗腫瘤藥物研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)之一。

隨著技術(shù)成熟和資本涌入，目前我國CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品研發(fā)已進(jìn)入到一個快速發(fā)展的階段。截至2020年2月20日，國家藥品審評中心（Center for Drug Evaluation， CDE）共受理了來自26個申請人/聯(lián)合申請人的40項(xiàng)CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的臨床研究申請，除了國內(nèi)企業(yè)獨(dú)立研發(fā)的品種外，還有通過合資或進(jìn)口方式申請的已獲美國FDA批準(zhǔn)的2種品種，40項(xiàng)申請中已有21項(xiàng)獲準(zhǔn)開展臨床試驗(yàn)（表1）。所有申請的CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品均為自體回輸制劑，適應(yīng)證以治療B細(xì)胞抗原CD19或B細(xì)胞成熟抗原（B cell maturation antigen， BCMA）陽性的血液系統(tǒng)腫瘤為主（表2），所用CAR-T細(xì)胞分子載體工藝則包括慢病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒感染表達(dá)和質(zhì)粒直接轉(zhuǎn)染表達(dá)等。與傳統(tǒng)藥物研發(fā)需要經(jīng)歷大規(guī)模、長時間的臨床試驗(yàn)不同，CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的臨床研究設(shè)計(jì)往往更為靈活，為期較短。隨著臨床試驗(yàn)項(xiàng)目的快速推進(jìn)，國內(nèi)個別品種即將進(jìn)入報(bào)產(chǎn)上市階段。對任何藥品研發(fā)企業(yè)來說，能否順利獲得藥品生產(chǎn)許可和通過藥品上市前的藥品GMP檢查至關(guān)重要，這也是許多CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品研發(fā)企業(yè)眼下必須考慮的問題。本文綜合我們已進(jìn)行的針對CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的藥品注冊現(xiàn)場檢查、生產(chǎn)許可現(xiàn)場檢查以及對部分企業(yè)的現(xiàn)場調(diào)研和參觀情況，梳理企業(yè)存在的常見的藥品GMP問題，供業(yè)界參考。

1 法規(guī)依據(jù)

1.1 美國FDA藥品GMP

迄今為止，全球范圍內(nèi)僅有2種CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品獲準(zhǔn)上市，且均是由美國FDA率先批準(zhǔn)的。美國FDA在批準(zhǔn)這2種產(chǎn)品上市前分別對它們的成品和病毒載體的生產(chǎn)場地進(jìn)行了許可前檢查，檢查的主要內(nèi)容有原液和成品的生產(chǎn)、質(zhì)量控制、穩(wěn)定性考察、放行和存儲，以及病毒載體的生產(chǎn)、質(zhì)量控制和放行等[1-2]。在進(jìn)行許可前檢查時，美國FDA的生物制品評價(jià)和研究中心根據(jù)聯(lián)邦法規(guī)要求確認(rèn)產(chǎn)品是否符合申報(bào)要求、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以及藥品GMP，重點(diǎn)關(guān)注從供臨床試驗(yàn)用生產(chǎn)到商品化生產(chǎn)過程中的轉(zhuǎn)移和銜接，生產(chǎn)廠房、設(shè)施設(shè)計(jì)和布局，產(chǎn)品的生產(chǎn)過程及其質(zhì)量管理，產(chǎn)品檢測方法的建立和驗(yàn)證等，以各要素能否充分地保證產(chǎn)品的安全、有效和質(zhì)量可控為許可上市的依據(jù)[3]。

1.2 歐盟委員會藥品GMP

歐盟為了加速新興醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，推進(jìn)和規(guī)范以CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品等為代表的先進(jìn)治療醫(yī)療產(chǎn)品（advanced therapy medicinal products， ATMP）的生產(chǎn)與監(jiān)管，2017年由歐洲藥品管理局起草并發(fā)布了《先進(jìn)治療產(chǎn)品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范新指南》[4]。為使此新ATMP GMP能夠充分適應(yīng)ATMP的生產(chǎn)特點(diǎn)，其指導(dǎo)原則中特別闡述了如何解決在諸如分散制造、自動化生產(chǎn)和使用前配制等新情況下產(chǎn)生的問題，同時還提出在生產(chǎn)和控制過程中，企業(yè)應(yīng)采用基于風(fēng)險(xiǎn)的評估方法，允許企業(yè)根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評估結(jié)果在一定范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)靈活的管理。此外，在數(shù)據(jù)可追溯性要求方面，為保證患者使用安全以及配合長期隨訪研究所需，其指導(dǎo)原則中明確ATMP生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)根據(jù)歐盟法規(guī)EC/1394/2007第15條的規(guī)定，將數(shù)據(jù)保留至少30年以上。

1.3 我國藥品GMP附錄細(xì)胞治療產(chǎn)品

我國尚未發(fā)布過專門針對細(xì)胞治療產(chǎn)品的GMP，對CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的GMP檢查主要參考藥品GMP及其附錄生物制品、無菌藥品等以及中國藥典等進(jìn)行。為探索細(xì)胞治療產(chǎn)品的生產(chǎn)規(guī)范和監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)，國家藥品監(jiān)督管理局食品藥品審核查驗(yàn)中心起草了《GMP附錄細(xì)胞治療產(chǎn)品》并自2019年11月28日起向社會公開征求意見[5]，以期針對細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)管理的特殊性制定相關(guān)要求，規(guī)范細(xì)胞治療產(chǎn)品的生產(chǎn)和質(zhì)量控制。該GMP附錄就細(xì)胞治療產(chǎn)品的生產(chǎn)廠房、設(shè)施、設(shè)備、物料、生產(chǎn)管理、質(zhì)量管理、產(chǎn)品追溯系統(tǒng)、供體材料采集和產(chǎn)品使用等各方面進(jìn)行了規(guī)范，重點(diǎn)圍繞防止污染、交叉污染和混淆以及產(chǎn)品可追溯性作了明確規(guī)定。

2 行業(yè)共性問題

2.1 生產(chǎn)工藝方面

2.1.1 工藝差異性

鑒于不同類型、不同品種的CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝并不完全相同，企業(yè)應(yīng)根據(jù)自己產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的特異性，對生產(chǎn)過程進(jìn)行充分的風(fēng)險(xiǎn)評估，制定相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)控制策略，以保證產(chǎn)品的安全、有效和質(zhì)量可控。如在生產(chǎn)過程中涉及供體材料的采集、分選和活化的，應(yīng)建立工藝雜質(zhì)的去除方法及標(biāo)準(zhǔn)，包括有效去除不可降解的分選磁珠和抗體蛋白；涉及動物源性材料和異體血清添加的，使用前應(yīng)對其進(jìn)行外源病毒檢測并在后續(xù)工序中對蛋白成分殘留進(jìn)行有效的控制[6]。工藝中使用了反轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒的，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注對產(chǎn)品中病毒殘留以及具有復(fù)制能力的反轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒的檢測[7-8]。

2.1.2 工藝驗(yàn)證

對CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品，企業(yè)均能按照藥品生產(chǎn)工藝驗(yàn)證的要求開展工藝驗(yàn)證。但對質(zhì)粒和病毒，由于一個批次往往就已能夠滿足企業(yè)一定時限內(nèi)的產(chǎn)品生產(chǎn)需求，因此常見企業(yè)忽略對質(zhì)粒和病毒生產(chǎn)的工藝驗(yàn)證工作。目前，對慢病毒和反轉(zhuǎn)錄病毒載體的生產(chǎn)均涉及多種質(zhì)粒，如不同質(zhì)粒間的生產(chǎn)工藝相同，是否可以僅對其中一種質(zhì)粒中間品進(jìn)行工藝驗(yàn)證，這尚需經(jīng)過進(jìn)一步的論證研究才能明確[6]。

2.2 污染和交叉污染方面

2.2.1 廠房設(shè)施布局與人員、物料和廢棄物流向

就目前已檢查和調(diào)研、參觀的企業(yè)來說，基本都能在廠房設(shè)計(jì)方面保證人員、物料和廢棄物的單向流向，并建立有效的生物安全管理措施?；贑AR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的個體化、小批量、多批次生產(chǎn)特性，國內(nèi)在廠房設(shè)計(jì)和設(shè)施布局上，無論是引進(jìn)國外設(shè)計(jì)還是獨(dú)立設(shè)計(jì)，均大多采用在一個生產(chǎn)區(qū)內(nèi)設(shè)置多個生產(chǎn)操作間或工作站的設(shè)計(jì)。這對采取非密閉方式進(jìn)行生產(chǎn)的企業(yè)來說，存在較大的風(fēng)險(xiǎn)，企業(yè)應(yīng)充分評估在同一區(qū)域內(nèi)同時進(jìn)行不同品種、不同批次生產(chǎn)的可行性和風(fēng)險(xiǎn)控制措施；考慮送、回風(fēng)設(shè)計(jì)和人員走動對氣流的影響及對周邊工作站環(huán)境可能造成的影響；考慮生產(chǎn)過程中的物流流向，如供體材料、生產(chǎn)用物料的準(zhǔn)備及傳遞和廢棄物的傳出等活動對工作站及區(qū)域內(nèi)其他工作站的影響。

2.2.2 共線混批生產(chǎn)

目前，部分企業(yè)采用非密閉的生產(chǎn)系統(tǒng)，并在一個區(qū)域內(nèi)同時進(jìn)行多種產(chǎn)品、多個批次的生產(chǎn)操作，存在非常大的污染和交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。在這種情況下，企業(yè)應(yīng)充分評估商業(yè)化生產(chǎn)的可行性，并制定切實(shí)可行的風(fēng)險(xiǎn)控制措施。

2.2.3 病原體陽性供體材料

由于自體CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的供體材料均為患者血液，因此接受并處理可能含有病原體的材料是CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)必將面臨的實(shí)際情況。個別企業(yè)個別品種的適應(yīng)證為傳染性疾病，而有些企業(yè)盡管已建有負(fù)壓生產(chǎn)車間并擬用于以病原體陽性供體材料為起始材料的CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)，但卻沒有設(shè)立專門、獨(dú)立的生產(chǎn)和儲存區(qū)域，且在生產(chǎn)、轉(zhuǎn)運(yùn)過程中也未明確與不含有病原體的供體材料或產(chǎn)品接觸的管理要求。需特別指出的是，能否使用病原體陽性供體材料進(jìn)行產(chǎn)品生產(chǎn)取決于是否經(jīng)過CDE審評并獲得批準(zhǔn)，只有獲得批準(zhǔn)后方可使用病原體陽性供體材料進(jìn)行產(chǎn)品生產(chǎn)。

2.2.4 應(yīng)急措施

對在生產(chǎn)過程中可能發(fā)生的異常情況或意外泄漏、污染，企業(yè)普遍存在風(fēng)險(xiǎn)評估不全面、應(yīng)急處理意識欠缺和應(yīng)急管理措施不完善等問題。

2.3 混淆方面

目前，各CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)的供體材料管理、生產(chǎn)過程管理和產(chǎn)品流通管理用電子化系統(tǒng)尚處于開發(fā)或概念設(shè)計(jì)中，從供體材料的接收、運(yùn)輸?shù)疆a(chǎn)品生產(chǎn)、檢驗(yàn)和放行操作均還以手工記錄為主，不能適應(yīng)商業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的需求。

2.4 儲運(yùn)和使用方面

為了防止CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品在運(yùn)輸過程中因受到物理沖擊而導(dǎo)致包裝破損，部分企業(yè)設(shè)計(jì)了專門的保護(hù)裝置。但需指出的是，不建議企業(yè)使用具有銳利邊緣的保護(hù)裝置，且在使用前應(yīng)充分評估保護(hù)裝置的合理性和風(fēng)險(xiǎn)。

雖然目前各家企業(yè)均選擇了優(yōu)質(zhì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行供體材料的采集和對CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的回輸使用，但卻均未明確針對醫(yī)療機(jī)構(gòu)資質(zhì)的管理要求，且從未對其進(jìn)行過質(zhì)量評估和現(xiàn)場質(zhì)量審計(jì)。

2.5 質(zhì)量檢驗(yàn)方面

由于采用藥典方法對CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品進(jìn)行安全性項(xiàng)目（無菌、支原體、可復(fù)制慢病毒）檢測耗時較長，可能會延長放行檢驗(yàn)周期，影響產(chǎn)品的臨床使用，因此建議企業(yè)開發(fā)快速檢測方法。但在采用快速檢測方法前，企業(yè)必須完成相應(yīng)方法學(xué)的驗(yàn)證工作，并在生產(chǎn)過程中加強(qiáng)對中間品的質(zhì)量控制。

目前，由于產(chǎn)品作用靶點(diǎn)、生產(chǎn)工藝和檢測方法的不同，各企業(yè)產(chǎn)品在嵌合抗原受體陽性T細(xì)胞比例質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)上的差異較大，企業(yè)應(yīng)繼續(xù)研究并完善嵌合抗原受體陽性T細(xì)胞比例的檢測方法，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和產(chǎn)品的有效性。

2.6 人員方面

從CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品臨床研究申請的申請人/聯(lián)合申請人來看，以由科研人員創(chuàng)立的企業(yè)為主。相對于資本推動的研究與開發(fā)，這些企業(yè)人員在藥品開發(fā)和商業(yè)化生產(chǎn)方面未經(jīng)系統(tǒng)歷練，特別是生產(chǎn)和質(zhì)量管理人員的知識結(jié)構(gòu)不盡合理，不少人員缺乏生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)和微生物學(xué)等相應(yīng)的專業(yè)知識，且無生物制品從業(yè)經(jīng)歷，不能充分理解、認(rèn)識CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品相較于其他常規(guī)藥品的產(chǎn)品特點(diǎn)和生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，企業(yè)也未充分重視人員的培訓(xùn)工作。此外，這些企業(yè)生產(chǎn)質(zhì)量管理人員的質(zhì)量意識和藥品GMP觀念也待增強(qiáng)，以更好地適應(yīng)企業(yè)和CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品發(fā)展的需求。

2.7 其他

從已進(jìn)行的藥品GMP檢查和企業(yè)參觀情況看，各企業(yè)在生產(chǎn)管理、質(zhì)量管理、供應(yīng)鏈管理和數(shù)據(jù)可靠性管理方面均或多或少存在薄弱環(huán)節(jié)，企業(yè)需在這些方面加強(qiáng)管理，防范可能的風(fēng)險(xiǎn)。目前，鑒于CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的個體化生產(chǎn)要求及政策引導(dǎo)，部分企業(yè)選擇租賃新建生物醫(yī)藥園區(qū)的廠房、設(shè)施，以期盡快完成生產(chǎn)車間的建設(shè)。但在正式投產(chǎn)使用前，企業(yè)務(wù)必充分考慮周邊尚處于基礎(chǔ)建設(shè)或裝修階段的其他生產(chǎn)設(shè)施對自身生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品可能造成的影響和風(fēng)險(xiǎn)，同時制定相應(yīng)的管理措施。

3 討論

鑒于CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的供體材料可能含有具有傳染性的病原體及生產(chǎn)過程中使用病毒載體，企業(yè)應(yīng)建有相應(yīng)的生物安全設(shè)施，預(yù)防和控制產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的生物安全風(fēng)險(xiǎn)，防止引入或傳播病原體。對病原體陽性供體材料，生產(chǎn)操作應(yīng)在獨(dú)立的專用生產(chǎn)區(qū)域進(jìn)行，采用獨(dú)立的空氣調(diào)節(jié)和凈化系統(tǒng)，保持相對負(fù)壓。鼓勵企業(yè)采用一次性密閉生產(chǎn)系統(tǒng)進(jìn)行CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的生產(chǎn)操作。對未采用密閉生產(chǎn)系統(tǒng)的，建議避免在同一區(qū)域同時進(jìn)行不同品種、不同批次的生產(chǎn)操作，做到專區(qū)生產(chǎn)、同一操作間或工作站同一時間僅進(jìn)行一個批次的生產(chǎn)操作，以避免污染、交叉污染和混淆的發(fā)生。

建議企業(yè)盡快完善產(chǎn)品電子化追溯系統(tǒng)的建設(shè)。建議國家監(jiān)管層面能參照疫苗追溯系統(tǒng)設(shè)計(jì)等的要求[9]出臺相應(yīng)的指導(dǎo)原則，促進(jìn)企業(yè)早日實(shí)現(xiàn)從對供體材料接收、運(yùn)輸?shù)疆a(chǎn)品生產(chǎn)、檢驗(yàn)和放行，再到成品運(yùn)輸和使用的全過程追溯。

另外，鑒于自體CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)具有小批量、多批次的特性，相較于企業(yè)的生產(chǎn)能力，企業(yè)應(yīng)充分考慮實(shí)驗(yàn)室匹配性和正式投產(chǎn)后實(shí)驗(yàn)室規(guī)模及其檢驗(yàn)?zāi)芰U(kuò)容的問題，以免企業(yè)因在產(chǎn)品審批和藥品GMP檢查過程中出現(xiàn)檢驗(yàn)?zāi)芰Σ荒軡M足產(chǎn)品生產(chǎn)規(guī)模所需而導(dǎo)致生產(chǎn)規(guī)模被核減情況的發(fā)生。

在CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品研發(fā)領(lǐng)域，我國緊跟著發(fā)達(dá)國家水平。然而，作為一種新型技術(shù)產(chǎn)品，國內(nèi)藥品監(jiān)管部門對這類產(chǎn)品生產(chǎn)的行業(yè)認(rèn)識和監(jiān)管經(jīng)驗(yàn)還處于不斷積累中。希望本文所言能為業(yè)界提供參考，對推動我國CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品監(jiān)管工作的發(fā)展有所幫助。

致謝：感謝上海藥品審評核查中心生物藥品部丁力承、付秋雁、張一瓊、付艷、劉芬、劉曉丹和成殷對本文撰寫給予的專業(yè)建議和支持。

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