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    不同大腸黏膜組織Hp、CyclinD1、P16免疫組化表達(dá)分析

    2020-08-13 07:15:30胡永波汪雪琦舒晴
    中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥 2020年20期
    關(guān)鍵詞:幽門螺桿菌大腸癌

    胡永波 汪雪琦 舒晴

    【摘要】 目的 分析不同大腸黏膜組織幽門螺桿菌(Hp)、細(xì)胞周期素D1(Cyclin D1)、P16免疫組化結(jié)果, 并分析各組織中Hp感染與Cyclin D1、P16表達(dá)的關(guān)系。方法 選取78例大腸組織標(biāo)本, 其中大腸癌患者40例、大腸腺瘤患者20例、非腫瘤大腸黏膜患者18例, 應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)不同大腸黏膜組織Hp、 Cyclin D1、 P16的表達(dá)情況。觀察比較不同大腸黏膜組織Hp、Cyclin D1、P16陽性率, 并分析不同大腸黏膜組織中Hp感染與Cyclin D1、P16陽性表達(dá)相關(guān)性。結(jié)果 大腸癌患者的Hp、Cyclin D1、P16陽性率分別為55.0%、82.5%、77.5%, 大腸腺瘤患者的Hp、Cyclin D1、P16陽性率分別為20.0%、 80.0%、 10.0%, 非腫瘤大腸黏膜患者的Hp、Cyclin D1、P16陽性率分別為11.1%、11.1%、0;大腸癌、大腸腺瘤與非腫瘤大腸黏膜患者Hp、Cyclin D1、P16陽性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。大腸癌及大腸腺瘤患者中, Hp感染與Cyclin D1、 P16陽性表達(dá)結(jié)果呈正相關(guān)(大腸癌:r=0.509、r=0.596, P<0.05;大腸腺瘤:r=0.289、r=0.667, P<0.05)。非腫瘤大腸黏膜患者中, Hp感染與cycinD1陽性表達(dá)結(jié)果呈正相關(guān)(r=0.395, P<0.05), Hp感染與P16陽性表達(dá)無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論 Hp是大腸上皮性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的因素之一, 大腸癌組織中Hp對(duì)P16、Cyclin D1的表達(dá)結(jié)果影響具有相關(guān)性, 其中的可能機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

    【關(guān)鍵詞】 大腸癌;大腸腺瘤;幽門螺桿菌;細(xì)胞周期素D1;P16

    DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.20.087

    幽門螺桿菌(helicobacterpylori, Hp)于1994年被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)列為人類胃癌的第I類致癌因子。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展, 有很多學(xué)者研究認(rèn)為Hp感染與大腸癌、冠心病、類風(fēng)濕、肝膽疾病等多種疾病有相關(guān)性, 但尚未得到完全確證。大腸癌又稱結(jié)直腸癌(colorectal cancer, CRC), 在我國(guó)居民常見的惡性腫瘤中排第五名[1]。Cyclin D1異常表達(dá), 通過基因擴(kuò)增, 可導(dǎo)致多種腫瘤發(fā)生, 如乳腺癌、腸癌、食管癌。P16是抑癌基因的一種, 又稱多種腫瘤抑制基因, 它可以在細(xì)胞增殖周期某個(gè)環(huán)節(jié)上對(duì)細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)產(chǎn)生適當(dāng)?shù)恼{(diào)控作用。本研究是通過免疫組化方式檢測(cè)不同大腸(結(jié)腸和直腸)黏膜(非腫瘤、上皮性腫瘤)組織中Hp感染情況及Hp感染與P16和Cyclin D1表達(dá)的關(guān)系?,F(xiàn)報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1. 1 材料 收集2016年4月~2019年4月清遠(yuǎn)市中醫(yī)院脾胃科的78例大腸組織標(biāo)本, 其中大腸癌患者40例,?男22例, 女18例, 平均年齡64.5歲;大腸腺瘤患者20例, 男11例, 女9例, 平均年齡54.7歲;非腫瘤大腸黏膜患者18例, 男8例, 女10例, 平均年齡50.9歲。由具有高級(jí)職稱的病理醫(yī)師來判讀本次研究的所有病例標(biāo)本的病理診斷及免疫組化結(jié)果。

    1. 2 研究方法 本次研究采用pv-6000兩步法免疫組化方法, 采用DAB顯色試劑盒, 第一抗體Hp、P16、Cyclin D1及相關(guān)試劑購(gòu)均購(gòu)北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。按照試劑盒使用說明書來進(jìn)行具體操作, 陰性對(duì)照以磷酸緩沖鹽溶液(PBS)替代一抗, 陽性對(duì)照采用本院慢性胃炎黏膜組織Hp陽性切片。

    1. 3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 觀察比較不同大腸黏膜組織Hp、Cyclin D1、P16陽性率, 并分析不同大腸黏膜組織中Hp感染與Cyclin D1、P16陽性表達(dá)相關(guān)性。判定標(biāo)準(zhǔn):Hp陽性表達(dá)結(jié)果可定位于腸黏膜組織周邊的黏液及表面上皮附近(陽性對(duì)照見圖1), 呈棕褐色顆粒狀或短棒狀結(jié)構(gòu), 彌散、片狀分布(見圖2, 圖3)。p16染色陽性呈棕黃色, 異常表達(dá)時(shí)位于胞漿, 正常細(xì)胞定位于細(xì)胞核。Cyclin D1陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核。

    1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn);采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析檢測(cè)標(biāo)志物免疫組化表達(dá)間的相關(guān)性。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2. 1 不同大腸黏膜組織Hp、Cyclin D1、P16陽性率比較 大腸癌患者的Hp、Cyclin D1、P16陽性率分別為55.0%、82.5%、77.5%, 大腸腺瘤患者的Hp、Cyclin D1、P16陽性率分別為20.0%、80.0%、10.0%, 非腫瘤大腸黏膜患者的Hp、Cyclin D1、P16陽性率分別為11.1%、11.1%、0;大腸癌、大腸腺瘤與非腫瘤大腸黏膜患者Hp、Cyclin D1、P16陽性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1, 表2。

    2. 2 不同大腸黏膜組織中Hp感染與Cyclin D1、P16陽性表達(dá)相關(guān)性分析 大腸癌及大腸腺瘤患者中, Hp感染與Cyclin D1、 P16陽性表達(dá)結(jié)果呈正相關(guān)(大腸癌:r=0.509、r=0.596, P<0.05;大腸腺瘤:r=0.289、r=0.667, P<0.05)。非腫瘤大腸黏膜患者中, Hp感染與Cyclin D1陽性表達(dá)結(jié)果呈正相關(guān)(r=0.395, P<0.05), Hp感染與P16陽性表達(dá)無相關(guān)性(P>0.05)。

    3 討論

    Nam等[3]研究發(fā)現(xiàn), 大腸息肉患病率在Hp感染組占63.4%, Hp是大腸腫瘤發(fā)生的危險(xiǎn)因素, 它可能通過釋放一些抗原物質(zhì), 激活全身免疫反應(yīng)進(jìn)而導(dǎo)致腸黏膜損害和息肉形成。賴廣順等[4]的研究結(jié)果顯示, Hp感染可能是結(jié)直腸腫瘤發(fā)病的一個(gè)危險(xiǎn)因素。梁云佳等[5]通過大數(shù)據(jù)研究顯示, Hp測(cè)試陽性組與陰性組相比, 大腸腺瘤和大腸癌發(fā)病率較高, 大腸病變位置在遠(yuǎn)端結(jié)腸有顯著差異(P<0.05)。本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn), 大腸癌Hp陽性病例中, 有75%的患者發(fā)生在直腸和乙狀結(jié)腸。

    Cyclin D1是細(xì)胞周期素家族的重要成員, 是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4/6(CDK4/6)的調(diào)節(jié)物, 促進(jìn)Rb磷酸化。Cyclin D1的過量表達(dá)可致使細(xì)胞無法識(shí)別某些生長(zhǎng)因子的作用, 進(jìn)而導(dǎo)致各種腫瘤的發(fā)生, 如乳腺癌、腸癌、食管癌。Arber等[6]及Palmqvist等[7]的研究結(jié)果表明, Cyclin D1的過表達(dá)在大腸癌早期形成中可能起到一定作用。本次研究結(jié)果顯示, Cyclin D1在大腸腺瘤的陽性表達(dá)率明顯高于非腫瘤大腸黏膜, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。P16與細(xì)胞周期素D(Cyclin D)競(jìng)爭(zhēng)與結(jié)合, 在細(xì)胞分裂周期中從G1期進(jìn)行到S期這個(gè)過程受到干擾, 從而細(xì)胞增殖得到抑制。P16基因的缺失與大腸癌的發(fā)生和惡性程度呈一定的相關(guān)性[8]。

    國(guó)內(nèi)的研究結(jié)果證實(shí), 在胃黏膜中, Hp感染能使組織細(xì)胞中抑癌基因(P16, P53)和癌基因(ras)的突變率增高。本研究結(jié)果顯示, 在大腸腫瘤組, Hp感染和Cyclin D1、P16的陽性表達(dá)均呈正相關(guān)(P<0.05), 說明在腸黏膜組織中, Hp感染亦能促使組織細(xì)胞中抑癌基因和癌基因突變。其中的致病機(jī)制可能是Hp感染導(dǎo)致P16基因CpG島的甲基化[9], 且具有鞭毛素A基因flaA(+)的Hp可能更容易導(dǎo)致用P16基因甲基化[10]。

    綜上所述, Hp是大腸上皮性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的因素之一, 大腸癌組織中Hp對(duì)P16、Cyclin D1的表達(dá)結(jié)果影響具有相關(guān)性, 其中的可能機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

    參考文獻(xiàn)

    [1] Chen W, Zheng R, Baade PD, et al. Cancer statistics in China, 2015. CA: A Cancer Journal for Clinicians, 2016, 66(2):115-132.

    [2] Sonnenberg A, Genta RM .Helicobacter pylori is a Risk Factor for Colonic Neoplasms. American Journal of Gastroenterology, 2013, 108(2):208-215.

    [3] Nam JH, Hong CW, Kim BC, et al. Helicobacter pylori infection is an independent risk factor for colonic adenomatous neoplasms. Cancer Causes & Control, 2017, 28(12):107-115.

    [4] 賴廣順. 大腸癌的臨床特點(diǎn)及與幽門螺桿菌關(guān)系的研究. 2012.

    [5] 梁云佳. 幽門螺桿菌與大腸癌發(fā)病率的前瞻性研究. 江蘇大學(xué), 2012.

    [6] Arber N, Hibshoosh H, Moss SF, et al. Increased expression of cyclin D1 is an early event in multistage colorectal carcinogenensis. Gastroenterology, 1996(110):669-674.

    [7] Palmqvist R, Stenling R, Oberg A, et al. Expression of cycinD1 and retinoblastoma protein in colotectal cancer. Eur J Cancer, 1998, 34(10):1575-1581.

    [8] 郭文有. 大腸癌中mdm2、P53、cyclinD1和P16基因的表達(dá)及其對(duì)預(yù)后的影響.天津醫(yī)科大學(xué), 2004.

    [9] Dong CX, Deng DJ, Pan KF, et al. Promoter methylation of p16 associated with Helicobacter pylori infection in precancerous gastric lesions: A population-based study. International Journal of Cancer, 2009, 124(2):434-439.

    [10] Markênia KSA, Adriana CF, Valeska PL, et al. Inactivation of COX-2,?HMLH1 and CDKN2A Gene by Promoter Methylation in Gastric Cancer: Relationship with Histological Subtype, Tumor Location and Helicobacter pylori Genotype. Pathobiology, 2011, 78(5):266-276.

    [收稿日期:2020-03-09]

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