血清MMP-9和LCN-2水平在乳腺癌患者中表達意義及相關性分析

趙凌云

乳腺癌屬國內女性常見且高發(fā)的惡性腫瘤疾病，因乳腺癌生物學特性影響，其癌細胞可經血液循環(huán)途徑與淋巴途徑呈隱匿性轉移，進而誘導癌細胞浸潤其他器官組織致功能衰竭，導致患者死亡率較高［1］。近年臨床針對乳腺癌的診治技術發(fā)展，乳腺癌患者5年生存期得以延長，但依舊有25%～37%的患者因乳腺癌復發(fā)、轉移致死［2］。故如何有效防控乳腺癌復發(fā)、轉移成為業(yè)界研究熱點。張冬冬等［3］指出，乳腺癌復發(fā)及癌細胞轉移均與毛細血管再生及細胞外基質損傷有關。研究認為［4］，基質金屬蛋白酶9（Matrix metalloproteinase-9，MMP-9）可降解細胞基底膜，促毛細血管生長效應，亦增強癌細胞侵襲、轉移功能。曹亞男等［5］研究指出，脂質運載蛋白-2（Lipocalin-2，LCN-2）與諸多惡性腫瘤發(fā)生、進展有密切關聯。對此本研究將，探析血清MMP-9 和LCN-2 表達水平在乳腺癌患者中的意義及臨床病理特征的相關性。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集本院2018年3月至2019年12月收治的乳腺癌患者80 例，設為乳腺癌組，年齡36～71 歲，平均年齡（53.76±9.74）歲。29 例腫瘤直徑＜2 cm，51 例腫瘤直徑≥2 cm，48 例伴有淋巴結轉移。病理診斷符合中國臨床腫瘤學會（CSCO）《乳腺癌診療指南》標準［6］?；凇度橄偌芭陨称鞴倌[瘤病理學和遺傳學》組織學分類標準［7］，收集同期收治的乳腺良性病變患者43 例，設為乳腺良性病變組。另收集醫(yī)務志愿者40 例，對照組。各組年齡比較無統計學意義（P＞0.05）。

納入標準：①乳腺癌經病理診斷；②臨床資料齊全；③檢測前未開展放化療或激素干預；④知情同意，經醫(yī)院醫(yī)學理論委員會討論批準。排除標準：①合并代謝性疾病者；②肝腎功能不全；③伴嚴重感染者；④合并心血管疾病。

1.2 方法

取各組外周靜脈血（空腹、晨間）3 mL，離心10 min（3 000 r/min），分離血清。采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法檢測血清LCN-2（RD 公司生產試劑盒）、MMP-9（晶美生物技術公司生產試劑盒）表達水平，嚴格遵循試劑盒操作標準執(zhí)行，根據標準曲線計算LCN-2、MMP-9 含量。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0 軟件進行分析，計量資料采用（）表示組間比較采用t檢驗或方差分析，計數資料用n（%）表示比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman 法，P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血清MMP-9、LCN-2 的含量比較

血清MMP-9、LCN-2 表達水平比較結果為：乳腺癌組＞乳腺癌良性病變組＞對照組，差異無統計學意義（P＞0.05），表1。

表1 各組血清MMP-9、LCN-2 的含量比較（±s）Table 1 Comparison of serum MMP-9 and LCN-2 levels in each group（±s）

表1 各組血清MMP-9、LCN-2 的含量比較（±s）Table 1 Comparison of serum MMP-9 and LCN-2 levels in each group（±s）

注：與乳腺良性病變組比較a P＜0.05，與健康對照組比較b P＜0.05。

組別乳腺癌組乳腺良性病變組對照組F 值P 值n 80 43 40 MMP-9（ng/mL）96.02±23.25ab 27.26±14.47 23.22±11.85 286.44＜0.001 LCN-2（ng/mL）95.27±27.68ab 54.39±21.23 48.57±19.09 66.99＜0.001

2.2 血清MMP-9、LCN-2 表達與乳腺癌臨床病理特征的關系

乳腺癌患者血清MMP-9、LCN-2 表達水平與腫瘤直徑、TNM 分期期、淋巴結轉移、ER、PR 明顯相關，差異有統計學意義（P＜0.05），與年齡、分化程度、組織學類型無相關，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 血清MMP-9、LCN-2 表達與乳腺癌臨床病理特征的關系（±s）Table 2 Relationship between serum MMP-9、LCN-2 expression and clinicopathological characteristics of breast cancer（±s）

表2 血清MMP-9、LCN-2 表達與乳腺癌臨床病理特征的關系（±s）Table 2 Relationship between serum MMP-9、LCN-2 expression and clinicopathological characteristics of breast cancer（±s）

項目年齡（歲）＜50≥50腫瘤直徑（cm）＜2≥2 TNM 分期Ⅰ～ⅡⅢ～Ⅳ淋巴結轉移有無ER+-PR+-分化程度低分化中分化高分化組織學類型特殊型非特殊型n 27 53 29 51 49 31 48 32 58 22 50 30 13 52 15 14 66 MMP-9（ng/mL）91.05±28.54 97.33±34.07 80.25±21.04 127.85±35.19 87.25±20.22 133.76±41.08 119.25±30.86 73.06±20.41 124.73±30.58 85.62±24.07 108.69±33.46 76.89±23.58 92.66±24.29 86.24±29.33 83.67±28.26 90.28±31.46 98.77±24.21 t/F 值0.822 6.631 6.753 7.443 5.391 4.565 0.38 1.129 P 值0.414＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001 0.687 0.262 LCN-2（ng/mL）89.67±31.02 95.33±27.54 67.29±24.36 113.07±35.72 71.08±19.33 107.36±31.82 99.35±30.85 68.92±21.03 93.17±18.25 79.36±31.05 99.28±27.63 76.15±31.07 101.22±39.56 91.69±35.52 96.25±31.13 91.68±30.74 95.14±27.61 t/F 值0.833 6.131 6.352 4.871 2.459 3.459 0.41 0.418 P 值0.408＜0.001＜0.001＜0.001 0.016 0.001 0.665 0.677

2.4 血清MMP-9、LCN-2 相關性分析

經Spearman 相關性分析，乳腺癌患者血清MMP-9、LCN-2 表達與ER、PR 均呈正相關（P＜0.05），乳腺癌患者血清MMP-9 與LCN-2 亦呈正相關（P＜0.05），見表3。

表3 血清MMP-9、LCN-2 相關性分析Table 3 Correlation analysis of serum MMP-9 and LCN-2

3 討論

乳腺癌復發(fā)及遠端轉移屬預后結局高危獨立影響因素［8］。因細胞基底膜損傷，導致細胞與細胞連接基質防御結構異常，致使腫瘤原發(fā)病灶周圍結締組織浸潤，進而引發(fā)遠端轉移。研究發(fā)現［9］，MMP-9 則是細胞外基質降解重要參與蛋白水解酶之一，可降解細胞基底膜，破壞基底膜屏障，提高癌細胞組織浸潤、轉移風險。研究指出［10］，正常人機體內MMP-9 含量較低，但受癌細胞及相關致癌因子刺激，可誘導分泌MMP-9，造成血清MMP-9 表達增高。Ra?i? 等［11］研究，MMP-9 可對腫瘤基因轉錄調節(jié)，降解纖維粘連蛋白、Ⅳ型膠原，還能增加癌細胞黏附能力，在腫瘤復發(fā)、浸潤、轉移等環(huán)節(jié)均有促進作用。周寧等［12］發(fā)現，乳腺癌病理特征與MMP-9 水平有明顯關聯。故眾學者認為，通過測定患者血清MMP-9 水平表達可評估惡性腫瘤進展程度。

本研究結果發(fā)現，乳腺癌患者血清MMP-9 含量明顯高于健康人員及乳腺良性病變患者，且血清MMP-9 水平與腫瘤直徑、淋巴結轉移、ER、PR表達相關；與患者年齡、分化程度、組織學類型并無關聯。證實血清MMP-9 表達水平可評估乳腺癌復發(fā)或轉移情況。李金濤等［13］動物研究發(fā)現，MMP-9 與腫瘤毛細血管生成因子有明顯協同作用，且血清MMP-9 表達水平越高，其腫瘤血管生成率越大。本研究中，乳腺癌患者ER、PR 表達與血清MMP-9 呈正相關，說明在乳腺癌病變進展過程MMP-9、ER、PR 存在相互協同效應，但受研究樣本限制，相關協同機制尚未解析。

早期研究證實，LCN-2 對細胞信號傳遞、內環(huán)境調控及免疫調節(jié)均有積極參與。多項研究發(fā)現［14］，LCN-2 在肺癌、肝癌、食管癌、乳腺癌等諸多惡性腫瘤中均呈表達上調，推論LCN-2 在常見惡性腫瘤的發(fā)生、進展扮演重要角色。Bauer 等［15］研究，乳腺癌細胞的凋亡、浸潤、轉移過程中LCN-2 均有參與。畢泗成等［16］研究，血清LCN-2 水平與惡性腫瘤淋巴結轉移、HER2/neu 過表達及Ki67 均有明顯相關性。研究指出［17］，LCN-2 基因抑制可延緩乳腺癌腫瘤生長，抑制癌細胞增殖及轉移。反之LCN-2 高表達可誘導EMT，增加癌細胞復發(fā)、轉移風險。本研究結果提示LCN-2 高表達參與乳腺癌病理進展過程。

研究報道［18］，惡性腫瘤患者血清LCN-2 過表達可抑制MMP-9 降解效率，LCN-2 與MMP-9 可生成復合產物NGAL/MMP-9，提高癌細胞浸潤反應。張萍等［19］研究亦發(fā)現，血清LCN-2 與MMP-9 高表達患者5年預后生存質量較差，存活率顯著低于LCN-2 與MMP-9 低表達患者。本研究中乳腺癌患者血清LCN-2 與MMP-9 表達呈正相關，經分析可能與LCN-2 保護調節(jié)MMP-9 活性，促進乳腺癌生長進展相關。提示LCN-2 與MMP-9 高表達屬乳腺癌復發(fā)、轉移的主要影響因素，與病情進展相關。

綜上所述，乳腺癌患者血清LCN-2、MMP-9 均呈高表達，增加乳腺癌細胞浸潤、轉移風險；聯檢血清LCN-2、MMP-9 表達水平，有助于預測評估乳腺癌復發(fā)、轉移情況。