SLE及LN患者血清C1q的表達(dá)水平及意義

張明嬌 吳勇

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種以T 淋巴細(xì)胞功能異常、B 淋巴細(xì)胞高度活化、產(chǎn)生大量針對(duì)自身抗原的抗體為突出表現(xiàn)的自身免疫性疾病，其發(fā)病與遺傳、環(huán)境及雌激素、腸道菌群等多種因素有關(guān)［1-2］。狼瘡腎炎（Lupus nephritis，LN）是SLE 比較嚴(yán)重且最常見的臟器損害，盡早了解腎臟受損程度對(duì)于提高SLE的療效及患者生存質(zhì)量十分重要［3-5］。目前，臨床上判斷LN 分型及損傷部位主要依靠腎活檢，該操作為有創(chuàng)檢查以及風(fēng)險(xiǎn)高、并發(fā)癥多，因此，尋找能正確反映早期腎損傷、監(jiān)測(cè)病情、指導(dǎo)治療及預(yù)后判斷的血清學(xué)標(biāo)志物是迫切需要的。

補(bǔ)體1q（complement 1q，C1q）作為補(bǔ)體經(jīng)典途徑被激活的第一個(gè)補(bǔ)體亞基，是連接固有免疫應(yīng)答與適應(yīng)性免疫應(yīng)答的紐帶，參與SLE 等多種自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展［6］。檢測(cè)血清中抗核小體抗體（Antinucleosome antibody，AnuA）能夠輔助診斷LN，抗雙鏈DNA（double stranded-DNA，ds-DNA）抗體是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的SLE 診斷及病情判斷自身抗體指標(biāo)，其滴度與疾病活動(dòng)性相關(guān)，兩者作為L(zhǎng)N 的診斷標(biāo)志物在敏感性或特異性上均不理想。近年研究發(fā)現(xiàn)血清C1q 與SLE 病情發(fā)生及進(jìn)展具有密切的關(guān)系，因此本文將探討SLE中血清C1q 表達(dá)水平及其在LN 診斷以及SLE 病情活動(dòng)中等的價(jià)值，為C1q 在SLE 發(fā)病機(jī)制的研究及LN 的實(shí)驗(yàn)室診斷提供參考。

1 材料與方法

1.1 一般材料

收集2017年1月至2019年6月南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院及暨南大學(xué)第一附屬醫(yī)院確診的門診及住院SLE 患者160 例，均符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的SLE 分類標(biāo)準(zhǔn)［7］，同時(shí)按照系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)指數(shù)（systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI）評(píng)分［8］分為病情活動(dòng)組25 例（SLEDAI≥5 分），病情穩(wěn)定組135 例（SLEDAI＜5 分）。LN 判斷標(biāo)準(zhǔn)為腎活檢確診、連續(xù)性蛋白尿，尿蛋白定量≥0.5 g/24 h、管型尿或者腎功能指標(biāo)異常。依據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)分為L(zhǎng)N 組53 例，無LN組107 例。另外收集其他風(fēng)濕病50 例作為疾病對(duì)照組，其中原發(fā)性干燥綜合征（primary sjogren's syndrome，pSS）15 例、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）20 例、皮肌炎/多肌炎（dermatomyositis and polymyositis，DM/PM）15 例均符合風(fēng)濕病診斷標(biāo)準(zhǔn)。收集同一時(shí)期來院體檢者50 例作為健康對(duì)照組，平均年齡（42.32±12.25）歲，男女性別之比為1∶9，與實(shí)驗(yàn)組年齡、性別比例相近，各組間年齡及性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

1.2 儀器與試劑

C1q 采用免疫透射比濁法檢測(cè)，試劑盒由上海北加生化試劑有限公司提供，血清免疫球蛋白M（immunoglobulin M，IgM）、免疫球蛋白G（immu-noglobulin G，IgG）、免疫球蛋白A（immunoglobulin A，IgA）、補(bǔ)體3（complement3，C3）、補(bǔ)體3（complement4，C4）采用免疫比濁法測(cè)定，試劑購(gòu)自羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司，儀器均采用羅氏C501 全自動(dòng)生化分析儀（羅氏，瑞士）檢測(cè)，抗ds-DNA 抗體、AnuA 采用納米粒磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法，試劑由蘇州浩歐博生物有限公司提供；肌酐、尿素均采用酶法；C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）采用熒光免疫層析法；血沉采用自然沉降法；所有實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作。

表1 受檢者臨床資料比較（±s）Table 1 Clinical data of subjects（±s）

表1 受檢者臨床資料比較（±s）Table 1 Clinical data of subjects（±s）

組別SLE 組疾病對(duì)照組健康體檢組病情活動(dòng)組病情穩(wěn)定組LN 組無LN 組n 160 50 50 25 135 53 107男14 7521 241 1女136 43 45 23 113 49 96 χ2值0.887 0.063 0.312 P 值0.642 0.802 0.577年齡35.89±16.44 40.06±15.82 42.32±12.25 34.43±16.08 36.07±16.67 35.81±17.18 37.18±17.06 t/F 值1.531 0.4542 0.4770 P 值0.2182 0.6503 0.6340

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用Graph Pad Prism5 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料分別采用t檢驗(yàn)和方差分析進(jìn)行多組間均數(shù)比較。血清中C1q 表達(dá)水平與各臨床指標(biāo)的關(guān)系選用Pearson 和Spearman 相關(guān)分析。根據(jù)血清C1q 表達(dá)水平建立Logistic 回歸模型，繪制ROC 評(píng)估血清C1q 對(duì)LN 的診斷效能P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清C1q 在SLE 組、LN 組、無LN 組、疾病對(duì)照組、健康對(duì)照組的表達(dá)水平

血清C1q 在3 組結(jié)果比較：SLE 組＜疾病對(duì)照組＜健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；LN 組血清C1q 水平顯著低于無LN 組、疾病對(duì)照組以及健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 C1q 在不同組別患者血清中表達(dá)水平（±s）Table 2 C1q expression level in serum of patients in different groups（±s）

表2 C1q 在不同組別患者血清中表達(dá)水平（±s）Table 2 C1q expression level in serum of patients in different groups（±s）

組別SLE 組疾病對(duì)照組健康對(duì)照組LN 組無LN 組病情活動(dòng)組病情穩(wěn)定組n 160 50 50 53 107 25 135濃度（mg/L）164.79±58.20 193.69±81.10 197.69±50.10 150.23±48.20 173.68±79.22 158.42±44.23 178.39±39.16 F/t 值7.727 1.979 2.295 P 值0.0006 0.0495 0.0231

2.2 血清C1q 水平與SLE 患者臨床指標(biāo)的關(guān)系

分析表明SLE 患者的C1q 與血清IgM 濃度呈正相關(guān)性（P＜0.05），與C3、SLEDAI 積分、血沉呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性（P＜0.05），與年齡、性別、C4、抗ds-DNA 抗體、AnuA、CRP、肌酐、尿素等無相關(guān)性。見表3。

表3 血清C1q 水平與SLE 患者臨床指標(biāo)的關(guān)系Table 3 The connection between serum C1q level and SLE patients'clinical indicators

2.3 C1q 在不同活動(dòng)度SLE 患者中表達(dá)及治療前后對(duì)比分析

SLE 患者病情活動(dòng)組血清中C1q 水平明顯低于疾病穩(wěn)定組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表4。本研究將25 例活動(dòng)期患者進(jìn)行隨訪，經(jīng)三個(gè)月的常規(guī)治療，所有患者病情均明顯緩解，對(duì)比治療前，治療后SLE 患者血清C1q 水平明顯升高，SLEDAI 評(píng)分明顯降低，兩者均P＜0.05，見表4。

表4 活動(dòng)期SLE 患者治療前后血清C1q 水平及SLEDAI評(píng)分比較（±s）Table 4 The comparison of serum C1q and SLEDAI score of SLE patients before and after treatment（±s）

表4 活動(dòng)期SLE 患者治療前后血清C1q 水平及SLEDAI評(píng)分比較（±s）Table 4 The comparison of serum C1q and SLEDAI score of SLE patients before and after treatment（±s）

組別治療前治療后t 值P 值濃度（mg/L）158.42±44.23 183.30±39.42 2.113 0.0406 SLEDAI 評(píng)分15.50±1.98 9.10±1.3 13.51＜0.0001

2.4 C1q、AnuA、抗ds-DNA 抗體聯(lián)合檢測(cè)靈敏度及特異性

與單一指標(biāo)診斷性能進(jìn)行對(duì)比，3 種檢測(cè)指標(biāo)聯(lián)合診斷LN 的準(zhǔn)確性、敏感性及特異性較高，AUC 為0.906 9（P＜0.001），見表5。

3 討論

SLE 是典型的系統(tǒng)性自身免疫性疾病，以產(chǎn)生多種針對(duì)自身核酸及其結(jié)合蛋白的抗體，形成自身抗原-抗體免疫復(fù)合物為特征。SLE 發(fā)病率高、病情復(fù)雜，常累及全身多器官、多系統(tǒng)。幾乎所有晚期SLE 患者均會(huì)并發(fā)由免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎臟損害，早期診斷、了解其活動(dòng)程度并進(jìn)行有效干預(yù)是延緩LN 進(jìn)入終末期腎病的有效途徑。

表5 C1q、AnuA、抗ds-DNA 抗體聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確性、敏感性及特異性Table 5 The diagnostic accuracy，sensitivity and specificity of combined detection of serum C1q，anti-ds-DNA antibody and AnuA

C1q 是補(bǔ)體經(jīng)典途徑起始因子C1 的亞基，其與多種配體結(jié)合是機(jī)體激活補(bǔ)體、清除凋亡細(xì)胞、免疫復(fù)合物等的重要途徑。若體內(nèi)C1q 水平下降，則凋亡細(xì)胞清除受限，凋亡細(xì)胞繼發(fā)壞死，導(dǎo)致自身抗原物質(zhì)增多，伴隨大量自身抗體產(chǎn)生，免疫復(fù)合物沉積于腎組織，形成惡性循環(huán)，加速了腎炎發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果提示C1q 一方面可能與體內(nèi)存在抗C1q 抗體有關(guān)，抗C1q 抗體結(jié)合C1q 并抑制其正常功能的發(fā)揮，并且形成的免疫復(fù)合物隨血液循環(huán)沉積于腎臟，激活補(bǔ)體，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)并釋放大量彈性蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶等損傷組織［9-10］。另一方面隨著病情進(jìn)展，C1q的大量消耗也將導(dǎo)致其濃度降低。因此，C1q水平的減低可能參與了LN的發(fā)病。

本研究分析結(jié)果推測(cè)在疾病早期，SLE 患者體內(nèi)產(chǎn)生大量IgM 抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物激活補(bǔ)體C1q。同時(shí)，C1q 水平與C3、SLEDAI積分、血沉呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性，提示血清C1q 水平可作為SLE 活動(dòng)評(píng)估指標(biāo)，隨著疾病進(jìn)展其水平越低，腎臟損害可能越嚴(yán)重，因此動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血清C1q 濃度能有效反應(yīng)SLE 病情。本研究還追蹤25 例入院時(shí)處于活動(dòng)期的SLE 患者，經(jīng)過三個(gè)月的治療，對(duì)比前后血清C1q 水平發(fā)現(xiàn)，治療后患者C1q 水平明顯增高，可能由于免疫抑制劑抑制了致病性抗體的滴度，導(dǎo)致免疫復(fù)合物形成減少，C1q 消耗少而導(dǎo)致其水平升高。目前，臨床尚沒有血清標(biāo)志物能確診LN，本研究中將SLE 中特異抗體與C1q 聯(lián)合診斷LN，結(jié)果表明3 種指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度和特異度較單項(xiàng)及AnuA、抗ds-DNA 抗體聯(lián)合檢測(cè)更高。

綜上所述，血清C1q 水平在一定程度上反映病情活動(dòng)性，活動(dòng)期患者血清C1q 濃度降低，如治療后濃度升高，則提示治療方案有效不需調(diào)整，因此，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血清C1q 水平的變化，可作為SLE 患者病情活動(dòng)及療效評(píng)估的一項(xiàng)可靠指標(biāo)。將來還需要進(jìn)一步闡明C1q 在SLE 發(fā)病中的作用機(jī)制，并且需要將多種生物標(biāo)志物聯(lián)合在大樣本中檢測(cè)來篩選更有效的診斷及預(yù)后判斷標(biāo)志物。