一株高效解磷菌的篩選及其解磷效果驗(yàn)證

唐岷宸 李文靜 宋天順 謝婧婧

（南京工業(yè)大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院，南京 211816）

土壤中磷元素的存在主要表現(xiàn)為兩種形式，無機(jī)磷和有機(jī)磷，且無機(jī)磷含量較多［1］，其可以被植物直接吸收利用，而有機(jī)磷則需要通過轉(zhuǎn)化才能被吸收，植物生長(zhǎng)代謝都離不開磷元素?？扇苄粤追时皇┯谕寥乐袝r(shí)，一般當(dāng)季利用率在10%-25%左右［2］，殘余的磷元素在酸性土壤中，易被土壤中存在的Fe、Al元素螯合固定形成不溶于水的Fe-P、Al-P；而在堿性土壤中，土壤中的Ca、Mg元素也可以螯合磷，形成不溶于水的Ca-P、Mg-P，使植物難以吸收利用［3-4］。解磷微生物的作用，就是將土壤中被固定的磷酸鹽通過溶解釋放，以利于植物的吸收，此外其還可以分泌一些植物生長(zhǎng)激素，促進(jìn)植物生長(zhǎng)代謝。

隨著現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)的發(fā)展，許多生產(chǎn)者追求產(chǎn)量，盲目施用化肥，且多重氮輕磷少鉀，長(zhǎng)期施用化肥會(huì)導(dǎo)致土壤板結(jié)退化、微生態(tài)破壞、保水力下降等環(huán)境問題和農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)下降，硝酸鹽含量高等食品問題，而微生物能夠通過自身在植物根際土壤中的生長(zhǎng)代謝來改善土壤環(huán)境，促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng)，所以將包含解磷微生物的菌肥向土壤中播撒，是土壤磷元素轉(zhuǎn)化的一個(gè)安全環(huán)保高效的方式，不僅能夠促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育，還能夠幫植物逐漸適應(yīng)酸化、堿化及缺磷土壤等不良環(huán)境［5-7］。解磷菌肥是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)所需的安全、可持續(xù)發(fā)展的新型高效肥料。因此，篩選新型高效解磷菌株，拓展解磷菌的種類，以進(jìn)一步提高菌肥的作用，幫助農(nóng)作物在不良環(huán)境中生存，成為解決我國(guó)缺磷問題的一條有效途徑。

本研究采用無機(jī)磷篩選培養(yǎng)基，從農(nóng)田土壤中篩選出新型高效解磷菌株，定量分析其解磷能力，初步探究其解磷機(jī)理，并通過黑葉葵扇白菜盆栽試驗(yàn)，評(píng)估篩選得到的解磷菌對(duì)農(nóng)作物的促生作用。

1 材料與方法

1.1 材料

篩選培養(yǎng)基（g/L）：Glucose 10.0 g，KCl 1.7 g，（NH4）2SO40.5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，Ca3（PO4）25.0 g，F(xiàn)eCl30.005 g，CaCO30.1 g，pH 7.5-8.0。

種子液培養(yǎng)基（g/L）：Glucose 5.0 g，K2HPO4·3H2O 2.0 g，（NH4）2SO40.5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，F(xiàn)eCl30.005 g，CaCO30.1 g。

LB培養(yǎng)基（g/L）：Peptone10.0 g，NaCl 10.0 g，Yeast Extract 5.0 g。

1.2 方法

1.2.1 解磷菌株的分離篩選 土壤樣品取樣點(diǎn)為安徽省馬鞍山市農(nóng)田地區(qū)。稱取5 g新鮮土樣，加入250 mL錐形瓶中（含100 mL無菌水）20℃，160 r/min振蕩1 h，取10 mL菌懸液于滅菌的試管中，用無菌水進(jìn)行梯度稀釋，稀釋至10-6。取各梯度土壤懸液0.2 mL，涂布于固體篩選培養(yǎng)基平板上。將平板放入20℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)96 h后，挑取平板上外觀不同，且有較大溶磷圈的單菌落X-P4、X-P9、X-P18和X-P27，進(jìn)行純化劃線，劃線4-5次后將其接入LB液體培養(yǎng)基中，待其OD600值為0.6-0.8時(shí)進(jìn)行甘油保菌，暫存于-20℃冰箱中。

將X-P4、X-P9、X-P18和X-P27甘油菌于種子液培養(yǎng)基中活化，測(cè)定其生長(zhǎng)曲線，待菌株生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，按2%的接種量（菌液離心去上清液，用等量無菌水重懸）接種于解磷菌篩選培養(yǎng)基中，30℃恒溫培養(yǎng)48 h后，在0、24和48 h取樣，將溶液10 000 r/min離心15 min，通過測(cè)定上清液中可溶性磷含量，選取解磷效果最優(yōu)的菌株。

1.2.2 菌株鑒定

1.2.2.1 形態(tài)學(xué)鑒定分析 在LB固體培養(yǎng)基上，將篩選出的菌株30℃培養(yǎng)24 h，觀察其外觀形態(tài)。參照《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》［8-9］對(duì)菌株進(jìn)行生理生化檢驗(yàn)。

1.2.2.2 16S rDNA測(cè)序及分析 采用試劑盒（TaKaRa細(xì)菌基因組提取試劑盒）提取菌株的DNA并進(jìn)行純化擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物由蘇州金唯智公司進(jìn)行測(cè)序。

1.2.3 解磷菌發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化

1.2.3.1 最適培養(yǎng)條件優(yōu)化 設(shè)置篩選培養(yǎng)基中種子液接種量為1%、2%、3%、4%和5%（菌液濃度為108-109CFU/mL）［10］，搖床溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為160 r/min，培養(yǎng)48 h，測(cè)定培養(yǎng)后溶液中磷含量，以確定最優(yōu)接種量。

使用最優(yōu)接種量，其他條件保持不變，滅菌后利用無菌酸堿溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基初始pH值為5.0、6.0、7.0、8.0和9.0，以確定最優(yōu)pH值。

使用最優(yōu)接種量與pH值，其他條件保持不變，設(shè)置搖床溫度為20、25、30、35和40℃，以確定最優(yōu)溶磷溫度。

1.2.3.2 碳、氮源優(yōu)化 以等質(zhì)量（0.5 g/L）的硫酸銨、氯化銨、尿素、蛋白胨和牛肉膏5種氮源替換解磷篩選培養(yǎng)基中的氮源，以確定最優(yōu)氮源；使用最優(yōu)氮源，以等質(zhì)量（10.0 g/L）的葡萄糖、蔗糖、果糖、甘露糖和半乳糖5種碳源替換磷篩選培養(yǎng)基中的碳源，以確定最優(yōu)碳源。

1.2.4 解磷菌分泌有機(jī)酸分析 將菌株按方法1.2.1接入篩選培養(yǎng)基中，在30℃，160 r/min搖床中培養(yǎng)48 h。將培養(yǎng)好的溶液10 000 r/min離心15 min，吸取1.0 mL上清液，用0.22 μm水系濾膜過濾，將濾液進(jìn)行液相色譜分析。

1.2.5 黑葉葵扇白菜盆栽試驗(yàn) 將保存的解磷菌接種于15 mL種子液培養(yǎng)基中，培養(yǎng)12 h。按1%的接種量在種子液培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)，30℃培養(yǎng)7 h后得菌液。將菌液6 000 r/min離心15 min后用無菌水重復(fù)離心沖洗2次。然后用無菌水稀釋得到的菌體，使菌液中菌體數(shù)量為108CFU/mL。

去除表層土壤，取用耕層3-30 cm的土壤（pH 6.76，有效磷6.9 mg/kg，速效鉀56.3 mg/kg堿解氮86.1 mg/kg，有機(jī)質(zhì)17.4 mg/kg），將土壤風(fēng)干砸碎至合適大小后，填入花盆中（口徑140 mm，高115 mm），每盆裝入土壤650 g，共12盆。將12盆盆栽隨機(jī)分成4組：處理1（CK），施用氮肥+鉀肥+Ca3（PO4）2；處理2（P1），施用氮肥+鉀肥+Ca3（PO4）2+ 解磷菌劑 2×109CFU/盆；處理 3（P2），施用氮肥+鉀肥+Ca3（PO4）2+解磷菌劑4×109CFU/盆；處理 4（P3），施用氮肥 + 鉀肥 +Ca3（PO4）2+解磷菌劑6×109CFU/盆。所用氮肥為尿素（用量為 320.0 mg/kg），鉀肥選用氯化鉀（277.0 mg/kg），磷肥選用 Ca3（PO4）2（用量為 1 500.0 mg/kg）。土壤與肥料混合均勻后裝盆，適當(dāng)澆水，向每盆中播撒大小相似的白菜種子6顆，待4 d發(fā)芽后間苗至2顆，待其過兩葉期（10 d）后，再向苗根部播撒菌液。黑葉葵扇白菜生長(zhǎng)周期為30 d，待其生長(zhǎng)成熟后測(cè)定小白菜的理化性質(zhì)。

1.2.6 測(cè)定與數(shù)據(jù)分析 篩選培養(yǎng)基溶液中有效磷含量通過鉬銻抗比色法［11］測(cè)定。

采用試劑盒（TaKaRa細(xì)菌基因組提取試劑盒）提取菌株的DNA并進(jìn)行純化擴(kuò)增，用0.8%的瓊脂糖凝膠電泳對(duì)擴(kuò)增的DNA進(jìn)行純度和濃度檢測(cè)［12］。PCR產(chǎn)物由蘇州金唯智有限公司完成測(cè)序和序列分析。通過GenBank的核酸數(shù)據(jù)庫(kù)序列與Blast程序進(jìn)行聯(lián)配，用測(cè)出的16S rDNA基因序列在NCBI［13］上進(jìn)行Blast比對(duì)，搜索相關(guān)性序列同所測(cè)序列用MEGA 7.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹進(jìn)行分析。

測(cè)定IAA含量液相條件［14-16］：色譜柱采用ZORBAX SB-Aq（5 μm，250 mm×4.6 mm）， 柱 溫37℃，流動(dòng)相采用98%鹽溶液和甲醇，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，進(jìn)樣量20 μL。流動(dòng)相使用前將其用0.22 μm孔徑的濾膜進(jìn)行過濾。

小白菜處理：生長(zhǎng)30 d后，先收割小白菜的地上部，然后收割小白菜，將小白菜上泥點(diǎn)洗凈，測(cè)定株高與鮮重，再放入烘干箱105℃殺青30 min，80℃烘干至恒重，磨碎后放入自封袋中備用，通過H2SO4-H2O2消煮法［17］處理小白菜葉片，然后通過鉬銻抗比色法［11］測(cè)定葉片磷含量。

用Prism5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及差異顯著性檢驗(yàn)，然后用origin 8.5作圖。

2 結(jié)果

2.1 高效解磷菌的篩選與鑒定

2.1.1 高效解磷菌的篩選 在含有Ca3（PO4）2的固體平板上，解磷菌株周圍能形成一圈透明圈（圖1-A），根據(jù)透明圈直徑大小可以初步判斷解磷菌菌株解磷能力的強(qiáng)弱。因此，本研究從固體平板上選出4株具有較大溶磷圈的菌株（命名為X-P4、X-P9、X-P18和X-P27）。通過對(duì)初篩得到的4株解磷菌進(jìn)行解磷能力的測(cè)定，48 h后與空白對(duì)照組相比，解磷能力分別達(dá)到了331.1 mg/L、323.7 mg/L、495.4mg/L和166.8 mg/L（圖1-B）。研究發(fā)現(xiàn)相較于其他3株菌，X-P18菌株的解磷能力最強(qiáng)，故選取X-P18菌株作為后續(xù)研究對(duì)象。

2.1.2 高效解磷菌的鑒定

2.1.2.1 X-P18菌株的形態(tài)學(xué)和生理生化特征 從土壤中分離篩選得到1株高效解磷菌株X-P18，將其接種于LB固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，觀察發(fā)現(xiàn)其菌落呈圓形、乳白色、表面光滑、邊緣整齊、黏稠、中間凸起、不透明。從表1可知，該菌株溫度生長(zhǎng)范圍在15-50℃，pH范圍在4.5-11.0，能夠消耗甘露醇、木糖、纖維二糖、麥芽糖和乳糖產(chǎn)酸，使得pH呈酸性，還能夠產(chǎn)吲哚乙酸（Indole-3-acetic acid，IAA），發(fā)酵24 h后X-P18菌株產(chǎn)生IAA的濃度為11.7 mg/L。而吲哚乙酸是生產(chǎn)調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)素的信號(hào)物質(zhì)，大多集中在植物生長(zhǎng)旺盛的部位，通過不同信號(hào)傳導(dǎo)途徑激發(fā)生理效應(yīng)，促進(jìn)植物的生長(zhǎng)發(fā)育，說明X-P18具有一定的促植物生長(zhǎng)作用。

通過生理生化分析發(fā)現(xiàn)，X-P18菌株能夠產(chǎn)IAA、耐高的pH、適宜生長(zhǎng)溫度范圍廣的特性，為它真正能夠作為微生物肥料應(yīng)用于不同環(huán)境的土壤增添優(yōu)勢(shì)。

2.1.2.2 X-P18菌株的16S rDNA序列測(cè)定 采用通用引物（27F與1492R）對(duì)解磷菌X-P18的基因組DNA進(jìn)行PCR反應(yīng)得到988 bp大小的擴(kuò)增片段，通過純化測(cè)序，并在GenBank中進(jìn)行比對(duì)、使用MEGA 7.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖2）比對(duì)發(fā)現(xiàn)，X-P18菌株與Bacillusvelezensis達(dá)到98%同源。根據(jù)菌株形態(tài)和生理生化特征，所以初步確定其貝萊斯芽孢桿菌（Bacillusvelezensis）。

2.2 解磷發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化

2.2.1 不同接種量對(duì)X-P18菌株溶磷效果的影響 本試驗(yàn)設(shè)置1%、2%、3%、4%和5%這5個(gè)接種量，研究接種量對(duì)解磷效果的影響。結(jié)果如圖3所示，對(duì)于不同接種量，X-P18菌株溶磷效果相差不大，接種量為1%和5%時(shí)，溶液中可溶性磷含量最高，分別為501.3 mg/L和491.7 mg/L，推測(cè)接種適量的菌液于培養(yǎng)基中雖然能夠縮短生長(zhǎng)周期，充分使用養(yǎng)分，但是菌株生長(zhǎng)繁殖時(shí)產(chǎn)生的一些對(duì)菌株生長(zhǎng)抑制作用的物質(zhì)會(huì)抑制菌株生長(zhǎng)代謝，所以菌株初始接種量與溶液中磷含量的增加無必然聯(lián)系。所以選擇1%的接種量為最優(yōu)接種量。

2.2.2 不同初始pH對(duì)X-P18菌株溶磷效果的影響 培養(yǎng)基選擇合適的初始pH值有利于菌的生長(zhǎng)與所需代謝產(chǎn)物的合成。本試驗(yàn)設(shè)置培養(yǎng)基初始pH值為5.0、6.0、7.0、8.0和9.0。由圖4可知，不同的初始pH值下X-P18菌株都能夠分解磷酸三鈣，當(dāng)菌株在pH 5.0、6.0和8.0時(shí)，溶液中有效磷含量較高。但由于pH為 5.0、6.0的空白培養(yǎng)基中可溶性磷含量增加量較多，推測(cè)當(dāng)培養(yǎng)基用稀酸調(diào)節(jié)pH值為5.0、6.0時(shí)，稀酸能夠幫助溶解磷酸三鈣，增加了溶液中的磷含量，給菌株創(chuàng)造了一個(gè)適宜的生長(zhǎng)環(huán)境，利于菌株生長(zhǎng)代謝，而當(dāng)pH為8.0時(shí)，基本不需要添加酸堿液調(diào)節(jié)，更趨近于菌株原始生長(zhǎng)環(huán)境，且溶液中磷含量達(dá)到最高，為518.0 mg/L。因此X-P18菌株最優(yōu)初始pH為8.0。

2.2.3 不同氮源對(duì)溶磷效果的影響 將X-P18菌株接種于含有等質(zhì)量不同氮源的培養(yǎng)基中，探究氮源對(duì)X-P18菌株解磷能力的影響。如圖5所示，X-P18菌株以硫酸銨為氮源時(shí)，溶液中有效磷含量最高，為550.9 mg/L，而以尿素為氮源時(shí)，有效磷含量最低，未達(dá)硫酸銨的1/10。因此，硫酸銨為X-P18菌株的最優(yōu)氮源。

2.2.4 不同碳源X-P18菌株對(duì)溶磷效果的影響 將X-P18菌株接種于含有等質(zhì)量不同碳源的培養(yǎng)基中，碳源分別為葡萄糖、蔗糖、果糖、甘露糖、半乳糖時(shí)，探究碳源對(duì)X-P18菌株解磷能力的影響。圖6可以看出以甘露糖為碳源時(shí)，有效磷含量為591.8 mg/L，而以半乳糖為碳源時(shí)，溶液中有效磷含量?jī)H為甘露糖的1/2。表明該菌株能夠在甘露糖為碳源的環(huán)境下，更有效地溶解磷酸三鈣，因此甘露糖為X-P18菌株的最優(yōu)碳源。

圖2 X-P18菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹

圖3 不同接種量對(duì)X-P18菌株溶磷能力的影響

圖4 不同pH對(duì)X-P18菌株溶磷能力的影響

2.2.5 不同溫度對(duì)X-P18菌株溶磷效果的影響 溫度能夠影響微生物體內(nèi)進(jìn)行的許多生化反應(yīng)，從而影響微生物的代謝活動(dòng)。本試驗(yàn)設(shè)置5個(gè)溫度梯度：20、25、30、35和40℃，研究溫度對(duì)菌株解磷能力的影響，如圖7所示，X-P18菌株在20-30℃有效磷含量相近，在30℃時(shí)最高，為582.4 mg/L。因此，確定該菌株最優(yōu)溶磷溫度區(qū)間為20-30℃。

2.3 X-P18菌株發(fā)酵液中有機(jī)酸分析

由圖8可知，通過液相色譜分析發(fā)現(xiàn)X-P18菌株在發(fā)酵過程中產(chǎn)生多種小分子有機(jī)酸，且在3.9

圖5 不同氮源對(duì)X-P18菌株溶磷能力的影響

圖6 不同碳源對(duì)X-P18菌株溶磷能力的影響

圖7 不同溫度對(duì)X-P18菌株溶磷能力的影響

2.4 X-P18菌劑對(duì)小白菜生長(zhǎng)及土壤理化性質(zhì)的影響

在黑葉葵扇白菜盆栽試驗(yàn)中，添加X-P18解磷菌菌劑明顯促進(jìn)了小白菜的生長(zhǎng)，提高了鮮重、葉片磷含量。由表2可知，試驗(yàn)組P1、P2、P3株高分別高出對(duì)照組CK 8.0%、3.3%和4.5%，推測(cè)因?yàn)樾“撞酥旮呱L(zhǎng)限制，所以株高差異未達(dá)到顯著差異水平（P<0.05）。試驗(yàn)組鮮重分別高出對(duì)照組65.5%、22.7%和37.1%，葉片全磷含量分別高出對(duì)照組46.9%、29.7%、26.6%，對(duì)比空白組都達(dá)到了顯著差異水平（P<0.05），其中菌劑添加量為2×109CFU/盆時(shí)對(duì)小白菜產(chǎn)量促進(jìn)作用最高，結(jié)果表明X-P18菌株能夠促進(jìn)作物生長(zhǎng)，并且適量的菌液更能在與土著微生物的競(jìng)爭(zhēng)中取得優(yōu)勢(shì)，使其更好的通過解磷作用，促進(jìn)對(duì)小白菜的生長(zhǎng)。min出現(xiàn)的峰為乙酸峰遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他小分子有機(jī)酸的峰面積，推測(cè)菌株在分泌有機(jī)酸溶解難溶性磷時(shí)，其中起主要作用的是乙酸。

圖8 X-P18菌株發(fā)酵液中有機(jī)酸測(cè)定結(jié)果

圖9 X-P18菌株對(duì)小白菜的促生效果

表2 小白菜盆栽試驗(yàn)中不同處理?xiàng)l件下小白菜的生長(zhǎng)情況

3 討論

土壤中有很多具有解磷能力的根際微生物，主要有腸桿菌屬（Enterobacter）、芽孢桿菌屬（Bacillus）、固氮菌屬（Azotobacter）、節(jié)桿菌屬（Arthrobacter）、假單胞菌屬（Pseudolnonas）等［18］。解磷的芽孢桿菌屬中，主要是枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、阿氏芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌等，而本研究篩選出的X-P18菌株為貝萊斯芽孢桿菌，其解磷量為495.4 mg/L，屬于芽孢桿菌，但鮮有報(bào)導(dǎo)其解磷功能，且相比于國(guó)內(nèi)外報(bào)道的其他解磷菌在相同解磷條件下較高。例如，萬兵兵等［19］從煙區(qū)土壤篩選的1株彎曲芽孢桿菌，溶磷量為286.3 mg/L；邢芳芳等［20］從大麥根際篩選的1株枯草芽孢桿菌，溶磷量為449.1 mg/L。此外該菌還可以分泌IAA，具有一定的促生長(zhǎng)作用。因此，本研究篩選的X-P18菌株是一株新型高效解磷菌，為解磷微生物的研究提供新的思路。

解磷菌的解磷能力與培養(yǎng)基中接種量、氮源、碳源、初始pH值及培養(yǎng)溫度都有密切關(guān)系，這些因素都能夠影響菌株的生長(zhǎng)與代謝［21-23］。如陳言柳等［10］從油茶根際篩選出1株阿氏芽孢桿菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化得最佳培養(yǎng)條件為：碳源為葡萄糖，氮源為硫酸銨，溫度28℃、初始pH7.5，溶磷量586.73 mg/L。本研究通過單因素優(yōu)化試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，X-P18菌株最佳解磷條件為溫度30℃，初始pH為8.0，接種量為1%、碳源為甘露糖，氮源為硫酸銨，經(jīng)優(yōu)化后的培養(yǎng)基的有效磷含量為582.4 mg/L，比優(yōu)化前（495.4 mg/L）高出17.8%，其最適溫度培養(yǎng)條件（20-30℃）更為廣泛，pH（5.0、6.0和8.0）適應(yīng)能力更強(qiáng)，增加了實(shí)際應(yīng)用的廣泛性。

目前，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為解磷菌通過分泌小分子有機(jī)酸，來溶解不溶性磷酸鹽是其解磷的主要機(jī)制。在缺磷環(huán)境下，解磷微生物通過代謝產(chǎn)生一些有機(jī)酸，如乙酸、草酸和葡萄糖酸等，與土壤中不溶性磷酸鹽螯合，從而釋放土壤中被固定的磷素，其溶磷效果不僅與有機(jī)酸的種類和數(shù)量有關(guān)，還與機(jī)制的緩沖性及能與磷酸根離子螯合的離子數(shù)量，尤其是土壤中的 Ca2+數(shù)量有關(guān)［24］；Rodriguez等［25］研究認(rèn)為解磷芽孢桿菌是依靠分泌乙酸、乳酸、葡萄糖酸等來降解無機(jī)磷的；趙小蓉等［26］研究發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中溶磷量與有機(jī)酸種類與含量之間并無明顯的關(guān)聯(lián)。本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定發(fā)酵液中的小分子有機(jī)酸，發(fā)現(xiàn)X-P18菌株主要生產(chǎn)乙酸，和文獻(xiàn)報(bào)道的作用機(jī)理一致。

本研究通過黑葉葵扇白菜盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明，缺磷土壤施用解磷菌X-P18菌肥，不僅能夠活化土壤中難溶性磷物質(zhì)，還能分泌促生因子，提高農(nóng)作物對(duì)養(yǎng)分的吸收利用，使農(nóng)作物大量增產(chǎn)。因此，為X-P18菌株在解磷微生物肥料中的應(yīng)用提供了重要的依據(jù)。

4 結(jié)論

本研究從農(nóng)田篩選出的1株高效解磷菌株X-P18，經(jīng)鑒定其為貝萊斯芽孢桿菌。該菌株最適生長(zhǎng)條件為：接種量1%、pH8.0、碳源為甘露糖、氮源為硫酸銨、培養(yǎng)溫度為30℃，在此條件下，其溶磷量為582.4 mg/L。該菌株可以分泌大量乙酸，這可能是其解磷的一種機(jī)制。該菌株液體菌劑后在缺磷土壤中促進(jìn)黑葉葵扇白菜生長(zhǎng)方面效果顯著，可以通過微生物途徑改善土壤中磷素供應(yīng)。