長(zhǎng)鏈非編碼RNA SNHG16表達(dá)水平與腫瘤患者預(yù)后關(guān)系的Meta分析

劉 婭 李才弘 劉長(zhǎng)路 劉代順

據(jù)2018年美國(guó)國(guó)家癌癥中心統(tǒng)計(jì)顯示，預(yù)計(jì)癌癥患者新增1 735 350例，死亡人數(shù)達(dá)609 640例，這表明癌癥仍然是我們主要面對(duì)的公共衛(wèi)生問題及挑戰(zhàn)[1]。盡管，癌癥目前治療手段多樣，如外科手術(shù)、放化療、分子靶向等，但早期癌癥缺乏有效的診斷依據(jù)，而無法評(píng)估癌癥的預(yù)后，導(dǎo)致病死率高，癌癥患者生存質(zhì)量較低。因此積極尋找并研究癌癥預(yù)后相關(guān)因子具有重要意義。長(zhǎng)鏈非編碼RNA( Long non-coding RNA, LncRNA)是一類缺乏蛋白質(zhì)編碼功能，長(zhǎng)度超過200個(gè)核苷酸的序列[2]。但是在多種生物學(xué)過程中扮演著重要的角色，如參與控制基因的轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄后mRNA的加工，蛋白質(zhì)的功能或定位等[3]。 目前人類基因組中約有600 000個(gè)非編碼RNA，其中近42 000個(gè)是LncRNA，但目前約80%的LncRNA尚未被完全研究。LncRNA可能參與生命科學(xué)分支的多種生物學(xué)過程[4]。越來越多的研究顯示LncRNA在癌癥的多種生物學(xué)過程中扮演著重要的功能角色，包括腫瘤的增殖、遷移、侵襲及干性[5]。有研究顯示，LncNONHSAT081507.1 (LINC81507)在非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)進(jìn)展中起腫瘤抑制作用，并作為NSCLC診斷和預(yù)后的治療靶標(biāo)和潛在生物標(biāo)記物。在宮頸癌中，長(zhǎng)鏈非編碼RNA NORAD上調(diào)SIP1表達(dá)以促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖和侵襲[6]。但是，LncRNA SNHG16在癌癥中的預(yù)后價(jià)值尚不清楚，鑒于此本文擬評(píng)估LncRNA SNHG16與腫瘤的預(yù)后意義。

資料與方法

一、文獻(xiàn)資料

通過計(jì)算機(jī)全面檢索Pubmed、Embase、Ovid、Web of Science、Medline、The Cochrane of Library、CNKI及萬方等數(shù)據(jù)庫中研究LncRNA SNHG16和腫瘤預(yù)后的國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，截至?xí)r間至2019年11月，檢索詞包括：snoRNA host gene 16、LncRNA SNHG16、SNHG16、Long non-coding RNA SNHG16、cancer、carcinoma、maglinant、neoplasm、tumour、prognosis、prognostic、survival、outcome、relapse、recurrence、長(zhǎng)鏈非編碼RNA SNHG16、腫瘤、癌癥、預(yù)后、生存。外文檢索策略為：〔(snoRNA host gene16)OR(LncRNA SNHG16)OR(Long non-codingRNA SNHG16)AND(cancer)OR(carcinoma)OR(maglinant)OR(neoplasm)OR(tumour)AND (prognosis)OR (prognostic)OR (survival)OR(outcome)OR (relapse)OR(recurrence)〕；中文檢索策略為：〔(長(zhǎng)鏈非編碼RNA SNHG16)OR(LncRNA SNHG16)OR(sno host gene16)〕AND (癌癥) OR(腫瘤)〕AND〔(預(yù)后)OR(生存)〕。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①非血液系統(tǒng)的實(shí)體腫瘤患者前瞻性或回顧性隊(duì)列研究；②描述評(píng)估了LncRNA SNHG16的總生存期(overall surviral, OS)、無進(jìn)展生存期(disease-free survival, DFS)、無疾病生存期的預(yù)后效果(progression-free survival, PFS)，累計(jì)生存時(shí)間(cumulative survival, CSS)；③包括足夠的數(shù)據(jù)以提取或計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)比。排除標(biāo)準(zhǔn)：①血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者的研究；②重復(fù)發(fā)表的研究；③動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；④評(píng)論、病例報(bào)告、會(huì)議摘要及薈萃分析；⑤樣本量<30的研究，HR及其95%CI的提取或計(jì)算數(shù)據(jù)不足。

二、篩選方法

首先由兩名研究者獨(dú)立地閱讀摘要和題目，依據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行初步篩選，最后整理納入的文獻(xiàn)，從所納入的研究中提取數(shù)據(jù)，收集的數(shù)據(jù)包含：第一作者、發(fā)表年限、研究的國(guó)籍、腫瘤類型、研究的設(shè)計(jì)、研究的樣本、腫瘤的分期或分級(jí)、檢測(cè)方法、最長(zhǎng)隨訪時(shí)間、結(jié)局指標(biāo)、多因素分析等；此外，鑒于一些研究只提供了Kaplan-Meier曲線，需使用Engauge Digitizer4.1版從圖形生存曲線中提取HR及其95%CI[7-8]。如遇意見不同時(shí)，則通過討論或由第三個(gè)研究者確定。

納入文獻(xiàn)的質(zhì)量評(píng)價(jià)通過使用紐卡斯?fàn)?渥太華量表(Newcastle-Ottawa, NOS)進(jìn)行評(píng)價(jià)[9]。NOS評(píng)分包括隊(duì)列的選擇、可比性以及結(jié)果測(cè)量3個(gè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，共8個(gè)項(xiàng)目。每一項(xiàng)所納入的研究在“隊(duì)列的選擇”和“結(jié)果測(cè)量”上對(duì)應(yīng)的每一個(gè)條目最多可得1顆星，即1分，而在“可比性”上的條目最多可有2顆星，即2分。質(zhì)量評(píng)分的范圍最大是10分，評(píng)分星數(shù)越多提示納入研究文獻(xiàn)的質(zhì)量越好，得分≥6分表示文獻(xiàn)質(zhì)量較高。以上過程均由2名研究者獨(dú)立完成，如遇意見不同時(shí)，則通過協(xié)商或由第三個(gè)研究者解決。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

這項(xiàng)Meta分析使用了Stata軟件12.0版(Stata Corporation,College Station,TX,USA)。P值<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)于異質(zhì)性，通過CochranQ檢驗(yàn)和HigginsI2統(tǒng)計(jì)。I2>50%和/或P<0.1說明具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，用使用隨機(jī)效應(yīng)模型，否則應(yīng)使用固定效應(yīng)模型[10]。此外，如果結(jié)果存在異質(zhì)性，則應(yīng)進(jìn)行亞組分析以研究其來源，同時(shí)運(yùn)用逐一排除法進(jìn)行敏感性分析以評(píng)價(jià)結(jié)果的可靠性，發(fā)表偏移用Begg和Egger漏斗圖進(jìn)行評(píng)價(jià)。

結(jié) 果

一、納入研究的基本特征

通過全面檢索Pubmed、Embase、Ovid、Web of Science、Medline、The Cochrane of Library、CNKI及萬方等中外文數(shù)據(jù)庫，共檢索得到81篇文獻(xiàn)，根據(jù)設(shè)定研究的納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，最終共納入17篇文獻(xiàn)，共1 420例腫瘤患者，并且由兩位獨(dú)立研究者從納入研究中提取數(shù)據(jù)，其所納入研究均來自中國(guó)，有肝癌3篇，肺癌3篇，宮頸癌及卵巢癌各1篇，膀胱癌2篇，結(jié)腸癌2篇，骨肉瘤2篇，食管癌1篇，膠質(zhì)瘤1篇，胰腺癌1篇，納入的LncRNA SNHG16均從所納入研究中獲得高表達(dá)人數(shù)及通過計(jì)算得到其表達(dá)率。納入研究的質(zhì)量評(píng)價(jià)均運(yùn)用NOS評(píng)分進(jìn)行評(píng)估，所有研究均大于6分，其中有2篇6分，5篇7分，9篇8分，1篇9分，所有納入研究的質(zhì)量均較高。具體的基本特征及質(zhì)量評(píng)分 (NSCLC:非細(xì)胞肺癌，HCC=肝細(xì)胞癌，Cervical cancer=宮頸癌，Osteosarcoma=骨肉瘤，PC=胰腺癌，Glioma=膠質(zhì)瘤，Bladder cancer=膀胱癌，ESCC=食管癌，LAD=肺腺癌，CRC=結(jié)腸癌，Ovarian cancer=卵巢癌，SC=統(tǒng)計(jì)計(jì)算)，見表1。

二、LncRNA SNHG16高表達(dá)與預(yù)后指標(biāo)OS，DFS/PFS的關(guān)系

從納入研究的17篇文獻(xiàn)中直接或間接通過Engauge Digitizer4.1提取獲得了LncRAN SNHG16不同表達(dá)水平的OS/DFS/PFS/CSS，其中11篇單獨(dú)報(bào)道了OS，4篇既報(bào)道了OS，亦報(bào)道了DFS，1篇報(bào)道了OS又報(bào)道了PFS，1篇報(bào)道了CSS；結(jié)果顯示，LncRNA SNHG16高表達(dá)的OS(HR=1.92，95%CI為1.52～2.77，P=0.930)，見圖1；另鑒于DFS和PFS合并效應(yīng)相同，故將DFS、PFS合并得到結(jié)果示，LncRNA SNHG16高表達(dá)的DFS/PFS(HR=2.18，95%CI為1.47～2.90，P=0.604)，見圖2。高表達(dá)的LncRNA SNHG16相較于低表達(dá)者，均提示預(yù)后差。此外考慮到其高表達(dá)的LncRNA SNHG16合并OS，DFS/PFS，其異質(zhì)性為0，故無需進(jìn)行敏感性分析及亞組分析其來源，且提示結(jié)果穩(wěn)健可靠。

三、發(fā)表偏倚

通過Begg和Egger法檢測(cè)OS，DFS/PFS的的發(fā)表偏倚，漏斗圖散點(diǎn)圖提示對(duì)稱分布，未顯示明顯發(fā)表偏移，見圖3。

表1 納入研究的基本特征及評(píng)分

圖1 LncRNA SNHG16高表達(dá)與預(yù)后指標(biāo)OS關(guān)系圖

圖2 LncRNA SNHG16高表達(dá)與DFS/PFS的關(guān)系圖

圖3 漏斗圖散點(diǎn)圖

討 論

目前，隨著分子遺傳及分子生物學(xué)研究的快速發(fā)展，腫瘤相關(guān)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA由于在許多生物學(xué)過程及其可能的潛在作用，因而逐漸得到廣泛的關(guān)注，LncRNA參與多種生物學(xué)過程，例如染色體印記，表觀遺傳調(diào)控，免疫應(yīng)答，細(xì)胞周期控制，細(xì)胞凋亡和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的重編程等[28]。值得注意的是，異常表達(dá)的LncRNA可能參與多種腫瘤發(fā)生的多種生物學(xué)過程，如肺癌、肝癌、宮頸癌、頭頸部癌等[4,29-34]。研究表明，LncRNA可作為癌癥新的治療及預(yù)后的生物標(biāo)記物，為癌癥的預(yù)后評(píng)估提供新的思路[32-33]，LncRNA SNHG16而LncRNA SNHG16就為其中之一，如在非小細(xì)胞肺癌中，LncRNA SNHG16 可通過靶向結(jié)合microRNA-146促進(jìn)肺癌細(xì)胞的進(jìn)展，且提示為非小細(xì)胞肺癌預(yù)后不良的因素[11]。研究表明，LncRNA SNHG16可通過海綿吸附microRNA-4500并靶向STAT3促進(jìn)肝癌的發(fā)生和發(fā)展，并指出LncRNA SNHG16可能成為改善肝癌治療的新的靶點(diǎn)[12]。此外，LncRNA SNHG16通過海綿吸附microRNA-200a-3p影響大腸癌患者的腫瘤細(xì)胞增殖并與預(yù)后不良有關(guān)[15]。盡管如此，但其缺乏系統(tǒng)的分析，本文進(jìn)一步證實(shí)了LncRNA SNHG16在癌癥中的預(yù)后評(píng)估具有重要意義，其高表達(dá)的癌癥患者總生存期其較低表達(dá)者提示預(yù)后不良，總風(fēng)險(xiǎn)比為1.92， 95%CI為1.52～2.77，P=0.930；而在無無進(jìn)展生存期及無疾病生存期中，其預(yù)后仍提示不良,風(fēng)險(xiǎn)比為2.18，95%CI為1.47～2.90，P=0.604)，且其I2=0，提示結(jié)果穩(wěn)健。漏斗圖分析顯示無發(fā)表偏倚?？偟膩碚f，本Meta分析結(jié)果顯示，高表達(dá)的LncRNA SNHG16在大多數(shù)癌癥中是一個(gè)預(yù)后不良的重要危險(xiǎn)因素。

盡管如此，在本文中仍具有以下局限性：①對(duì)于LncRNA SNHG16高表達(dá)的界定值，沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，可能導(dǎo)致納入研究所采用的判定方法存在不同，從而對(duì)研究的結(jié)果產(chǎn)生影響；②部分納入的研究中，未給出HR及95%CI，需通過運(yùn)用Engauge Digitizer4.1從生存圖中提取，間接得到；③不同癌癥的治療手段不同，這可能對(duì)預(yù)后評(píng)估產(chǎn)生差異。

綜上所述，高表達(dá)的LncRNA SNHG16與腫瘤患者不良預(yù)后相關(guān)，可能作為判斷腫瘤患者預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。