基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法的二至丸治療肝腎陰虛型崩漏作用機(jī)制研究

吉蘭芳 王夢(mèng)夢(mèng) 崔樹娜

摘要：目的? 篩選二至丸治療肝腎陰虛型崩漏的主要活性成分，預(yù)測(cè)其作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)及信號(hào)通路，建立多成分-多靶點(diǎn)-多通路的網(wǎng)絡(luò)模型，從分子水平探討其作用機(jī)制。方法? 通過(guò)多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)聯(lián)用檢索和文獻(xiàn)挖掘，篩選二至丸的主要活性成分及其靶點(diǎn)，運(yùn)用String平臺(tái)對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)分析，利用Cytoscape3.6.1軟件構(gòu)建二至丸成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析，并通過(guò)生物學(xué)信息注釋數(shù)據(jù)庫(kù)DAVID分析靶點(diǎn)基因功能及信號(hào)通路。結(jié)果? 篩選出二至丸主要活性成分10個(gè)，主要包括木犀草素、槲皮素、芹菜素和山柰酚等，通過(guò)調(diào)節(jié)STAT3、IL6、TNF和IL4等92個(gè)靶點(diǎn)，調(diào)控血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、孕激素介導(dǎo)的卵泡成熟等29條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。結(jié)論? 二至丸主要通過(guò)影響血管功能、神經(jīng)-內(nèi)分泌、糖脂代謝及炎癥和免疫，協(xié)同發(fā)揮止血、調(diào)節(jié)激素水平、免疫調(diào)節(jié)等作用。

關(guān)鍵詞：二至丸;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);崩漏;肝腎陰虛;作用機(jī)制

中圖分類號(hào)：R271.917.41;R285.5? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? 文章編號(hào)：1005-5304（2020）04-0078-09

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.201905215

Mechanism of Erzhi Pills on Liver-kidney Yin Deficiency Metrorrhagia

Based on Network Pharmacology

JI Lanfang1， WANG Mengmeng1， CUI Shuna1，2

1. Medical College of Yangzhou University， Yangzhou 225000， China;

2. Affiliated Hospital of Yangzhou University， Yangzhou 225000， China

Abstract： Objective To screen the main active components of Erzhi Pills for the treatment of liver-kidney yin deficiency metrorrhagia; To predict its key targets and signaling pathways; To establish a multi-component– multi-target–multi-channel network model; To explore its action mechanism at the molecular level. Methods Multiple database and literature mining methods was used to screen the main active components and the targets of Erzhi Pill. String database was used to perform protein-protein interaction network analysis on intersection targets， and then Cytoscape 3.6.1 software was used to construct the component-target-pathway network for network topology analysis. Target gene function and signaling pathway were analyzed through bioinformatics annotation database DAVID. Results There were 10 main active compounds， such as quercetin， luteoline， apigenin and kaempferol， were screened out from Erzhi Pills. Through regulating 92 key targets including STAT3， IL6， TNF and IL4， 29 closely metrorrhagia-related signal transduction pathways， such as VEGF pathway， progesterone-mediated oocyte maturation and so on， were regulated. Conclusion Erzhi Pills achieves the function of haemostatic， hormonal regulation and immune regulation by affecting the vascular function， neuroendocrine， glycolipid metabolism， inflammation and immune.

Keywords： Erzhi Pills; network pharmacology; metrorrhagia; liver-kidney yin deficiency; action mechanism

崩漏指經(jīng)血非時(shí)暴下或淋漓不凈，多發(fā)生于青春期和絕經(jīng)過(guò)渡期女性。青春期少女天癸初至，腎氣未充，肝失濡養(yǎng)，或絕經(jīng)過(guò)渡期婦女天癸將絕，腎精虧虛，肝失調(diào)達(dá)，均易形成肝腎陰虛證。肝腎陰虛型崩漏的主要臨床表現(xiàn)為經(jīng)血非時(shí)而下，伴腰膝酸軟、頭暈耳鳴，或煩躁易怒、五心煩熱、潮熱盜汗，或舌紅、苔少，脈弦細(xì)數(shù)。本病相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的異常子宮出血，國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）將其定義為月經(jīng)的周期頻率、規(guī)律性、經(jīng)期和出血量4項(xiàng)指標(biāo)中任一項(xiàng)不符合正常標(biāo)準(zhǔn)、源自子宮腔的出血[1-2]，如經(jīng)間期出血、功能失調(diào)性子宮出血等。目前西醫(yī)治療該病以性激素為主，但不良反應(yīng)大且藥物依賴性強(qiáng)，病情容易反復(fù)。

二至丸出自明代王三才《醫(yī)便》，由女貞子（酒蒸）、墨旱蓮各等份組成，其性平和、偏涼，功效補(bǔ)肝益腎、滋陰止血，為平補(bǔ)肝腎之良劑，臨床用于治療少女腎氣未充、絕經(jīng)過(guò)渡期婦女天癸將絕的肝腎陰虛型疾病[3]，然而，目前尚缺乏關(guān)于二至丸治療肝腎陰虛型崩漏的物質(zhì)基礎(chǔ)和分子機(jī)制研究。近年來(lái)，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法被廣泛應(yīng)用于中醫(yī)藥研究領(lǐng)域，在闡述中藥及其復(fù)方治療作用機(jī)制中顯示獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。本研究通過(guò)多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)聯(lián)用檢索和文獻(xiàn)挖掘，篩選二至丸的主要活性成分并進(jìn)行成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，同時(shí)檢索得到肝腎陰虛證崩漏相關(guān)的靶點(diǎn)，分析成分-疾病的交集靶蛋白相互作用關(guān)系。并對(duì)靶點(diǎn)基因功能及信號(hào)通路進(jìn)行分析，構(gòu)建二至丸治療肝腎陰虛型崩漏的成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析，從而揭示其作用的分子機(jī)制。

1? 資料與方法

1.1? 活性化合物篩選

二至丸由女貞子和墨旱蓮組成，臨床常水煎口服。本研究通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP，http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）檢索，以口服生物利用度（OB≥30%）和類藥性（DL≥0.18）為條件篩選，得到女貞子和墨旱蓮中符合條件的候選化合物，再結(jié)合國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)挖掘[4-5]，篩選二至丸有效化學(xué)成分。

1.2? 化合物靶點(diǎn)查詢

通過(guò)以下2個(gè)途徑獲得化合物靶點(diǎn)：①以篩選得到的化合物名稱為關(guān)鍵詞，檢索CTD數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//ctdbase.org/），整理其作用靶點(diǎn);②在HIT數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//lifecenter.sgst.cn/hit/）中，以化合物名稱為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，整理其蛋白靶點(diǎn)后，利用Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.uniprot.org/）進(jìn)行歸一化和標(biāo)準(zhǔn)化命名，整合出靶點(diǎn)，與前者合并去重，剔除非人源靶蛋白后獲得二至丸調(diào)控的靶蛋白，建立中藥-成分-靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.3? 疾病基因查詢

通過(guò)PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.ncbi.nlm. nih.gov/pubmed/）查詢“崩漏”“異常子宮出血”的標(biāo)準(zhǔn)化表達(dá)，分別為metrorrhagia、AUB。分別以“metrorrhagia”和“AUB”為關(guān)鍵詞，檢索GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.genecards.org/），將得到的基因進(jìn)行整合，作為崩漏疾病基因。

參照《中醫(yī)婦科學(xué)》[6]和《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則（試行）》[7]崩漏的相關(guān)內(nèi)容擬定肝腎陰虛型崩漏辨證標(biāo)準(zhǔn)：①非月經(jīng)期出現(xiàn)異常子宮出血;②腰膝酸軟、頭暈耳鳴;③煩躁易怒、五心煩熱、潮熱盜汗;④舌紅、少苔、脈弦細(xì)數(shù)。以上①必備，兼有其余項(xiàng)即可辨證。通過(guò)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www. genecards.org/）依次查找“soreness and weakness of waist and knees”（腰膝酸軟）、“dizziness and tinnitus”（頭暈耳鳴）、“anxiety and irritability”（煩躁易怒）、“palms and soles”（五心煩熱）、“tidal fever and night sweating”（潮熱盜汗）、“red tongue”（舌紅）、“tongue coating less”（苔少）、“pulse string thin”（脈弦細(xì)）、“rapid pulse”（脈數(shù)）各癥狀對(duì)應(yīng)的基因，并將其分為3組。第1組：腰膝酸軟、頭暈耳鳴;第2組：煩躁易怒、五心煩熱、潮熱盜汗;第3組：舌紅、少苔、脈弦細(xì)數(shù)。分別進(jìn)行組內(nèi)基因去重，再組間合并，最后與崩漏疾病基因進(jìn)行整合，即為肝腎陰虛型崩漏的疾病基因。

1.4? 成分-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

篩選二至丸有效成分和肝腎陰虛型崩漏疾病基因的共同靶蛋白，導(dǎo)入String11.0數(shù)據(jù)庫(kù)（https：// string-db.org），設(shè)置蛋白種類為“Homo sapiens（人類）”，最低相互作用值為“highest confidence（0.900）”，其他參數(shù)保持初始默認(rèn)設(shè)置，構(gòu)建蛋白-蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)[8-10]。

1.5? 潛在靶點(diǎn)通路分析

GO富集分析主要涵蓋生物學(xué)的3個(gè)方面：生物過(guò)程（biological process）、分子功能（molecular function）及細(xì)胞組分（cellular component）。GO分析在生物學(xué)領(lǐng)域中廣泛用于基因功能分類[11]及預(yù)測(cè)靶點(diǎn)的功能分布，并能分類統(tǒng)計(jì)蛋白/基因的數(shù)目或組成。本研究使用DAVID6.7（https：//david.ncifcrf.gov/）對(duì)二至丸主要活性成分和肝腎陰虛型崩漏的共同基因進(jìn)行GO富集分析，通過(guò)P值和錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率（FDR）評(píng)估存在于各GO注釋中的蛋白質(zhì)群[12]，以P<0.05和FDR<0.05為標(biāo)準(zhǔn)篩選，反映蛋白質(zhì)群生物學(xué)功能的顯著性和準(zhǔn)確性。對(duì)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG分析，探求潛在靶點(diǎn)的信號(hào)通路分布。

1.6? 靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

將二至丸治療肝腎陰虛型崩漏的主要活性成分、靶點(diǎn)和疾病基因通過(guò)Cytoscape3.6.1（http：//www. cytoscape.org）軟件進(jìn)行可視化網(wǎng)絡(luò)分析。網(wǎng)絡(luò)中的節(jié)點(diǎn)代表化合物和靶點(diǎn)，邊代表節(jié)點(diǎn)之間的相互作用，每個(gè)節(jié)點(diǎn)的重要性則通過(guò)拓?fù)鋮?shù)度數(shù)進(jìn)行評(píng)估，節(jié)點(diǎn)度指與節(jié)點(diǎn)相連邊的數(shù)量，度值越大，表明該節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中越重要。

2? 結(jié)果

2.1? 藥物活性成分

通過(guò)TCMSP檢索，并以O(shè)B≥30%、DL≥0.18為條件篩選，共得到23個(gè)藥動(dòng)學(xué)特征良好的化合物作為二至丸候選化合物。選取主要活性成分10個(gè)，占候選化合物的43.48%，其中女貞子的活性成分有9個(gè)，墨旱蓮的活性成分有4個(gè)，兩者共有的活性成分有3個(gè)，見表1。

2.2? 疾病-成分靶點(diǎn)

通過(guò)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)查找獲得崩漏基因1600個(gè)，肝腎陰虛證基因292個(gè)，整合后得到肝腎陰虛證崩漏疾病基因227個(gè)。經(jīng)CTD和HIT數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)二至丸有效成分進(jìn)行靶點(diǎn)的識(shí)別，整合后獲得459個(gè)成分基因，將所得靶點(diǎn)整合后映射到Uniprot進(jìn)行蛋白標(biāo)準(zhǔn)化命名，去重后最終篩選出92個(gè)關(guān)鍵靶蛋白，見表2。

2.3? 疾病-成分靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

將String對(duì)92個(gè)交集靶點(diǎn)的分析信息導(dǎo)入Cytoscape3.6.1軟件，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)模型。點(diǎn)的大小與顏色反映度值大小，度值越大表明參與生物功能越多，由外到內(nèi)強(qiáng)度遞增，其中度值>30的蛋白有1個(gè)，21～30的蛋白有11個(gè)，11～20的蛋白有29個(gè)，0～10的蛋白有51個(gè)，見圖1。通過(guò)CytoHubba插件中的MCC算法對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)中的每個(gè)節(jié)點(diǎn)進(jìn)行分析，篩選出排名前20位的靶點(diǎn)（見圖2），顏色從紅到黃漸變代表重要程度遞減。綜合圖1、圖2結(jié)果可以看出，二至丸治療肝腎陰虛型崩漏的關(guān)鍵靶點(diǎn)為STAT3、IL6、TNF、IL4、IL1B、IL10、IL13、CCL2、IL17A、CXCL8、IL2、JUN和MAPK1等。

2.4? 潛在靶點(diǎn)通路注釋

通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)92個(gè)預(yù)測(cè)靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集分析，按P<0.05且FDR<0.05條件篩選，結(jié)合文獻(xiàn)挖掘，最終篩選出與疾病密切相關(guān)的富集結(jié)果，結(jié)果顯示涉及20個(gè)生物過(guò)程、14個(gè)細(xì)胞組分、9個(gè)分子功能（見圖3）。其中，預(yù)測(cè)靶點(diǎn)在生物過(guò)程中調(diào)控程序性細(xì)胞死亡排列和細(xì)胞死亡靠前;在細(xì)胞組分中，神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞外間隙和細(xì)胞外區(qū)域部分排列靠前;在分子功能中，細(xì)胞因子活性和生長(zhǎng)因子活性排列靠前。

2.5? KEGG信號(hào)通路分析

通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)92個(gè)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行注釋分析，根據(jù)KEGG網(wǎng)站（https：//www.kegg.jp/）的通路信息及相關(guān)文獻(xiàn)調(diào)研，篩選出與二至丸治療肝腎陰虛型崩漏相關(guān)的通路29條（見圖4），可整合歸為4類：血管功能、神經(jīng)-內(nèi)分泌、糖脂代謝、炎癥與免疫（見表3）。結(jié)果提示，二至丸可能通過(guò)表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路、促分裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）信號(hào)通路、細(xì)胞周期、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用等發(fā)揮對(duì)血管功能的調(diào)控;與神經(jīng)-內(nèi)分泌相關(guān)的通路主要有孕酮介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子信號(hào)通路、促性腺激素釋放激素信號(hào)通路等;涉及糖脂代謝相關(guān)的通路包括胰島素信號(hào)通路、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白信號(hào)通路和脂肪細(xì)胞因子信號(hào)通路等;與炎癥免疫相關(guān)的通路主要有T細(xì)胞受體信號(hào)通路、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性、B細(xì)胞受體信號(hào)通路、趨化因子信號(hào)通路及p53信號(hào)通路等。

2.6? 活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

以92個(gè)靶基因作為二至丸治療肝腎陰虛型崩漏的關(guān)鍵靶點(diǎn)，建立活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)（見圖5）。該網(wǎng)絡(luò)共有102個(gè)節(jié)點(diǎn)，其中，槲皮素、木樨草素、芹菜素、山柰酚為二至丸治療肝腎陰虛型崩漏的主要活性成分。

3? 討論

系統(tǒng)藥理學(xué)從系統(tǒng)水平研究藥物與機(jī)體的相互作用及其規(guī)律和作用機(jī)制[13]，其最大特點(diǎn)是突破了傳統(tǒng)的“單基因-單受體-單機(jī)制”研究思路和方法，以網(wǎng)絡(luò)和系統(tǒng)為中心研究視角，綜合分析藥物對(duì)疾病的影響，適用于研究中藥的“多成分-多靶點(diǎn)-多通路”機(jī)制。采用系統(tǒng)藥理學(xué)方法進(jìn)行中藥活性成分鑒定與篩選、活性成分靶標(biāo)確認(rèn)和分子機(jī)制研究，可為中藥藥理學(xué)提供新的研究思路。

崩漏的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)病機(jī)制主要為：①下丘腦-垂體-卵巢軸調(diào)節(jié)異常;②子宮內(nèi)膜凝血、纖溶、生長(zhǎng)因子和前列腺素等微環(huán)境異常[14]。二至丸及其組方藥物具有顯著的促凝止血作用，其作用機(jī)制可能是縮短凝血酶原時(shí)間、活化部分凝血活酶時(shí)間及凝血酶時(shí)間，升高血小板數(shù)量和纖維蛋白原含量[15-17];二至丸可通過(guò)上調(diào)血中雌二醇含量和靶器官雌激素受體表達(dá)，發(fā)揮雌激素樣作用[18-19];操紅纓等[20]研究發(fā)現(xiàn)，二至丸能明顯改善陰虛癥狀，可通過(guò)提高皮質(zhì)醇、胰島素、睪酮等含量，降低血膽固醇含量，同時(shí)提高淋巴細(xì)胞增殖能力及自然殺傷細(xì)胞殺傷率而發(fā)揮作用。此外，二至丸水煎劑能降低血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性，對(duì)小鼠急性肝損傷有明顯保護(hù)作用[21-22]。

本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)二至丸“成分-靶點(diǎn)-通路-疾病”進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)可視化分析發(fā)現(xiàn)，二至丸主要活性成分包括槲皮素、木犀草素、芹菜素、山柰酚等10個(gè)化合物，STAT3、IL6、TNF、IL4、IL1B、IL10、IL13、CCL2、IL17A、CXCL8、IL2、JUN和MAPK1等可能是二至丸治療肝腎陰虛型崩漏的關(guān)鍵靶基因，結(jié)合KEGG通路分析和文獻(xiàn)挖掘認(rèn)為，二至丸主要作用于VEGF、孕激素介導(dǎo)的卵泡成熟等信號(hào)通路。

隨著卵巢性激素的周期性作用，子宮內(nèi)膜相應(yīng)發(fā)生增殖、分泌和脫落，內(nèi)膜血管也相應(yīng)發(fā)生增殖、彎曲、斷裂及修復(fù)。子宮內(nèi)膜血管受多種激素和生長(zhǎng)因子調(diào)控，以靶向子宮內(nèi)膜VEGF通路的研究最為全面、特異性最高[23-25]。子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)因子與血管形成密切相關(guān)，而VEGF是最主要的促血管形成的因子，具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增強(qiáng)其通透性和刺激細(xì)胞外基質(zhì)分泌的作用[26-29]。異常子宮出血患者子宮內(nèi)膜孕激素受體（PR）表達(dá)水平增高，PR間接作用于無(wú)排卵性功血內(nèi)膜腺上皮VEGF，抑制VEGF分泌，以致子宮內(nèi)膜微血管形成障礙及結(jié)構(gòu)不良，從而引起子宮不規(guī)則出血[30-31]。二至丸的多個(gè)活性成分對(duì)VEGF表達(dá)有明顯調(diào)節(jié)作用，如槲皮素、芹菜素、木犀草素和齊墩果酸等。

槲皮素屬于黃酮類化合物，不僅能通過(guò)調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和凋亡的主要信號(hào)通路（如MAPK），有效抑制凝血酶誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）增殖和遷移[32-33]，抑制子宮內(nèi)膜增生，而且能減少血小板聚集和釋放[34]，從而發(fā)揮止血作用。芹菜素屬于類黃酮中的黃酮亞類，具有多種生物學(xué)活性，如雌激素樣作用、抗雌激素樣作用、減少雄激素分泌、抑制胎牛血清和血小板衍生因子誘導(dǎo)的VSMC增殖[35-36]。此外，芹菜素還能與下丘腦內(nèi)的雌激素受體結(jié)合，刺激下丘腦產(chǎn)生反饋樣抑制作用，導(dǎo)致促性腺激素釋放激素分泌減少，從而抑制腺垂體分泌卵泡刺激素、黃體生成素，繼而抑制雌二醇和孕酮的分泌，減少內(nèi)膜增生，從而控制異常子宮出血。有研究表明，木犀草素能顯著增加子宮內(nèi)膜厚度及其上皮細(xì)胞的高度，并具有類雌激素、抗雌激素雙重作用[37]。此外，木犀草素還具有一定的抗炎活性，目前研究認(rèn)為其通過(guò)抑制核因子-κB的磷酸化，減少一氧化氮和其他炎性細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素（IL）-6的產(chǎn)生，發(fā)揮抗炎作用[38]。

若VEGF表達(dá)過(guò)多，血管過(guò)度增生，則子宮內(nèi)膜過(guò)度增生，從而引起突破性出血。研究發(fā)現(xiàn)齊墩果酸可通過(guò)VEGF途徑抑制內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和管腔形成[39];木犀草素對(duì)胃癌VEGF表達(dá)水平有顯著的抑制作用[40];槲皮素、芹菜素等能夠調(diào)節(jié)VEGF表達(dá)，影響血管新生[41-42];木犀草素能明顯抑制兔角膜血管、人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF的表達(dá)[43]。在子宮內(nèi)膜血管的生成過(guò)程中，VEGF不僅表達(dá)在子宮內(nèi)膜的腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞，侵入子宮內(nèi)膜的炎性細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞）也是重要來(lái)源[44]。因此，二至丸的活性成分通過(guò)T細(xì)胞受體信號(hào)通路、B細(xì)胞受體信號(hào)通路及趨化因子信號(hào)通路等炎癥免疫相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，可以對(duì)炎性細(xì)胞進(jìn)行有效的抑制，從而抑制VEGF生成，避免內(nèi)膜過(guò)度增生引起突破性出血。MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可刺激IL-1等炎癥因子的釋放，通過(guò)介導(dǎo)中性粒細(xì)胞的活化和炎癥聚集，從而加重血管內(nèi)皮損傷。本研究結(jié)果顯示，二至丸作用于MAPK信號(hào)通路中的EGFR、TNF、TP53、NFKB1、TGFB1、AKT1、MAPK1關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，減少炎性細(xì)胞的分泌，降低炎癥反應(yīng)，有效控制子宮出血。除VEGF外，孕酮介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟也是二至丸治療肝腎陰虛型崩漏的重要信號(hào)通路。孕酮主要通過(guò)對(duì)雌激素進(jìn)行調(diào)控，使子宮內(nèi)膜增生期轉(zhuǎn)化為分泌期，抑制子宮內(nèi)膜增厚，以藥物性刮宮的形式促進(jìn)血液凝固[45]。

綜上所述，本研究從證候-病機(jī)-治法-組方-成分-靶點(diǎn)-通路-藥理作用多方面闡釋了二至丸治療肝腎陰虛型崩漏的物質(zhì)基礎(chǔ)和分子機(jī)制（見圖6）。

將傳統(tǒng)中醫(yī)理論與現(xiàn)代藥理學(xué)和生物信息學(xué)手段有機(jī)結(jié)合，能充分闡明二至丸治療肝腎陰虛型崩漏的多成分、多靶點(diǎn)、多效應(yīng)作用特點(diǎn)，可為新藥研發(fā)提供一定的理論依據(jù)，并為相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究提供新的思路。

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（收稿日期：2019-05-15）

（修回日期：2019-06-11;編輯：陳靜）

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（81703969）;江蘇省自然科學(xué)基金（BK20160480）

通訊作者：崔樹娜，E-mail：sncui@yzu.edu.cn