川芎揮發(fā)性成分的水蒸氣蒸餾提取與頂空進樣GC-MS分析

劉曉芬 張穎 胡明勛

【摘 要】 目的：分析比較不同提取方法制備的川芎中揮發(fā)性成分。方法：分別采用頂空進樣法和水蒸氣蒸餾法制備川芎揮發(fā)油，并對其進行氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）分析。結(jié)果：兩種方法制備的川芎揮發(fā)油的化學(xué)成分類型和相對含量有所差異，頂空進樣法制備的揮發(fā)油含29個化學(xué)成分，其中烯萜類成分占揮發(fā)油總量76%，苯酞類成分占揮發(fā)油總量的16%。水蒸氣蒸餾法制備的揮發(fā)油共鑒定出32個化合物，烯萜類占揮發(fā)油總量的4.50%，苯酞類占揮發(fā)油總量的88%。結(jié)論：兩種提取方法，分別提供了不同沸點川芎揮發(fā)油的化學(xué)信息，運用這兩種方法可建立更全面的川芎揮發(fā)性成分GC-MS信息。

【關(guān)鍵詞】 GC-MS聯(lián)用;頂空進樣;水蒸氣蒸餾;川芎;揮發(fā)油

【中圖分類號】R284.2 ? 【文獻標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號】1007-8517（2020）1-0044-04

Abstract：Objective To compare and analyze essential oil of Chuanxiong Rhizoma extracted by different methods. Method The essential oil of Chuanxiong Rhizoma were extracted by means of headspace sampling and steam distillation respectively， and the obtained samples were analyzed by gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS）.Result The essential oil extracted by headspace sampling method contained 29 chemical components， among which the terpene account for 76% of the total essential oil， and the phthalein components account for 16% of the total essential oil. And 32 compounds were identified from essential oil extracted by steam distillation， with terpene accounting for 4.50% of total essential oil and phthalein 88%.Conclusion The types of chemical composition and relative contents of the essential oil of Chuanxiong Rhizoma were varied by the two methods. The terpene was the main chemical type of the essential oil extracted by headspace sampling method， while the phthalide was the main chemical type of the essential oil extracted by steam distillation extraction. The information of volatile components of Chuanxiong Rhizoma could be established by two methods.

Keywords：GC-MS， Headspace Injection， Steam distillation， Chuanxiong Rhizoma， Essential Oil

川芎為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖，具有活血行氣，祛風(fēng)止痛的功效[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明川芎揮發(fā)油具有鎮(zhèn)靜止痛、擴張血管、改善心肌供氧、防血栓形成等藥理作用[2]，還具有腦神經(jīng)保護[3]、抗氧化活性[4]、解熱[5]等作用。川芎總揮發(fā)油對子宮平滑肌收縮具有顯著的抑制作用[6]。川芎揮發(fā)油是川芎的主要有效成分，是其活血化瘀、行氣止痛的主要有效組分之一，具有很大的開發(fā)利用價值。經(jīng)文獻調(diào)研，川芎揮發(fā)油中主要含苯酞類、烯萜類、烯醇類以及脂肪酸類化合物[7-9]。

現(xiàn)代多采用水蒸氣蒸餾法提取川芎揮發(fā)油，汪洋[10]比較水蒸氣蒸餾法、中性乙醇提取法與超臨界流體CO2萃取法，發(fā)現(xiàn)水蒸氣蒸餾法獲得的丁基苯酞與藁本內(nèi)酯等苯酞類占總揮發(fā)油的比例相對更高。冉霞[11]比較水蒸氣蒸餾法與CO2萃取法獲得的揮發(fā)油對體外瘢痕成纖維細(xì)胞的抑制能力，發(fā)現(xiàn)水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)油抑制能力更強。頂空進樣法是將樣品中的揮發(fā)性成分直接導(dǎo)入氣相色譜儀中進行分離和檢測的一種方法，可專一性收集樣品中易揮發(fā)性成分，同時避免了一些化學(xué)成分因加熱而分解、被氧化等問題，可廣泛應(yīng)用于中藥材揮發(fā)性成分的研究[12]。為全面認(rèn)識川芎中的揮發(fā)性成分，本實驗分別采用水蒸氣蒸餾法和頂空進樣法對川芎揮發(fā)性成分進行制備，并對其進行GC-MS分析，比較兩種提取方法制備的川芎揮發(fā)性成分。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent Technologies 7890A GC System，Agilent Technologies 5975C inert MSD with Triple-Axis Detector;頂空設(shè)備：Agilent 7697A。智能型恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海瑯玕實驗設(shè)備有限公司），BP121S十萬分之一電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 材料 川芎產(chǎn)自四川省都江堰市石羊鎮(zhèn)金花村3組，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)盧先明教授鑒定為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖。樣品貯藏于成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥標(biāo)本館。水為樂百氏純凈水，正己烷（色譜純，成都市科龍化工試劑廠），無水硫酸鈉（分析純，成都市科龍化工試劑廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品制備

2.1.1 水蒸氣蒸餾法 精密稱取川芎粉末（過二號篩）50g，參照2015年版中國藥典（四部）附錄水蒸氣蒸餾法提取，提取揮發(fā)油，所得到的產(chǎn)物為淡黃色油狀物，按每0.1mL揮發(fā)油加入10mL正己烷，置棕色瓶中，無水硫酸鈉除水，0.22μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.1.2 頂空進樣法 精密稱取1g川芎粉末（過二號篩）置于頂空瓶中密封，置頂空進樣器中按頂空進樣條件進樣。頂空進樣條件：加熱箱溫度100 ℃，定量環(huán)溫度120 ℃，傳輸線溫度140℃，樣品瓶平衡時間30min，樣品環(huán)平衡時間0.05min，進樣時間1min。

2.2 GC-MS分析條件

2.2.1 水蒸氣蒸餾提取法GC-MS分析條件 Agilent HP-5MS毛細(xì)管柱（30m×250μm×0.25μm），質(zhì)譜檢測器。載氣氦氣;流速：1.0mL/min，進樣量1μL;程序升溫：初始60℃，每分鐘5℃升至120℃，每分鐘10℃升至280℃，運行時間28min。分流比10∶ 1，進樣量1μL。質(zhì)譜條件：電離方式電子轟擊（EI），電子能量70eV，離子源溫度230 ℃，四級桿溫度150 ℃，溶劑延遲時間3min，掃描范圍：35～550，全掃描方式。檢索庫為NIST14.L質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫。

2.2.2 頂空GC-MS分析條件 Agilent HP-5MS毛細(xì)管柱（30m×250μm×0.25μm），質(zhì)譜檢測器。載氣氦氣，柱流量1.0mL/min，進樣量1μL，程序升溫：初始溫度60℃，以8 ℃/min升至220 ℃，運行時間20min，分流比5∶ 1。質(zhì)譜條件：電離方式電子轟擊（EI），電子能量70eV，離子源溫度230 ℃，四級桿溫度150 ℃，溶劑延遲時間3min，掃描范圍：50～550，全掃描方式。檢索庫為NIST14.L質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫。

2.3 結(jié)果

2種方法制備的揮發(fā)油經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析，獲得總離子流圖，分別見圖1和圖2。經(jīng)NIST14.L質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫自動檢索，得出揮發(fā)油的化學(xué)成分，結(jié)果見表1。

3 結(jié)果

本實驗采用GC-MS對水蒸氣蒸餾提取法和頂空進樣法制備的川芎揮發(fā)油的化學(xué)成分進行比較分析。從表1可知，頂空進樣法從川芎揮發(fā)油中共鑒定出29個化合物，主要是烯萜類和苯酞類成分，烯萜類主要包括檜烯（37.30%）、（+） -α-蒎烯（11.12%）、月桂烯（1.36%）、萜品油烯（7.71%）、萜品烯（5.22%）、5-Pentylcyclohexa-1，3-diene（7.27%） （+） -b-Selinene（2.79%）、Bicyclogermacrene（1.13%）等成分，約占揮發(fā)油總量76%。苯酞類成分主要包括E-Ligustilide（11.75%）、（3S，3aR） -3-Butyl-3a，4，5，6-tetrahydroisobenzofuran-1（3H） -one（0.76%）、Senkyunolide（3.19%）等，約占揮發(fā)油總量的16%。采用水蒸氣蒸餾法從川芎揮發(fā)油中共鑒定出32個化合物，主要是烯萜類、苯酞類和脂肪酸類，苯酞類約占揮發(fā)油總量的88%，其中以藁本內(nèi)酯含量最高（85.85%），烯萜類次之（4.41%），脂肪酸含量最低（0.17%）。

兩種方法得到14種相同的化合物，但含量差異大。頂空進樣法得到（+） -α-蒎烯（11.12%）、檜烯（37.30%）、月桂烯（1.36%）、萜品油烯（7.71%）、γ-松油烯（5.22%）、5-Pentylcyclohexa-1，3-diene（7.27%）、E-Ligustilide（11.75），頂空進樣法得到（+） -α-蒎烯（11.12%）、檜烯（37.30%）、月桂烯（1.36%）、萜品油烯（7.71%）、γ-松油烯（5.22%）、5-Pentylcyclohexa-1，3-diene（7.27%）、E-Ligustilide（11.75%），而水蒸氣蒸餾法得到（+） -α-蒎烯（0.05%）、檜烯（0.34%）、月桂烯（0.04%）、萜品油烯（0.43%）、γ-松油烯（0.37%）、5-Pentylcyclohexa-1，3-diene（0.61%）、E-Ligustilide（85.85%）。

頂空進樣法得到的揮發(fā)性成分含量大于5.0%的化合物有6種，分別是（+） -α-蒎烯（11.12%）、檜烯（37.30%）、萜品油烯（7.71%）、γ-松油烯（5.22%）、5-Pentylcyclohexa-1，3-diene（7.27%）、E-Ligustilide（11.75）%。水蒸氣蒸餾法得到的揮發(fā)性成分含量大于5.0%的化合物只有E-Ligustilide（85.85%）。Senkyunolide是川芎的主要藥效成分[13]，但只有頂空進樣法得到該組分，相對含量為3.19%。

4 結(jié)論與討論

本實驗通過兩種方法制備的川芎揮發(fā)油的化學(xué)成分和含量有所不同，水蒸氣蒸餾得到揮發(fā)油性成分是揮發(fā)油，頂空進樣是直接由藥材在進樣器中得到氣體直接進行檢測，減少了揮發(fā)油的冷藏、除水等中間步驟，減少步驟。頂空進樣法制備的川芎揮發(fā)油主要為烯萜類成分，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油的主要為苯酞類成分，主要是E-Ligustilide（85.85%），說明兩種方法制備的川芎揮發(fā)性成分各有側(cè)重，推測造成這種差異可能與揮發(fā)性成分的沸點有關(guān)。水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油耗時較長，這使得低沸點揮發(fā)性成分在冷凝過程中收集時損失較大。

本實驗首次采用頂空進樣GC-MS分析川芎藥材揮發(fā)油組分，通過將藥材粉末裝入頂空樣品瓶中，加熱平衡后，取揮發(fā)性氣體直接進樣分析，具有簡便、耗時短、減少化學(xué)成分加熱分解、轉(zhuǎn)化的優(yōu)點，能直接獲得藥材中低沸點的揮發(fā)性成分，且損失較小。水蒸氣蒸餾提取法和頂空進樣法這兩種制備方法分別側(cè)重于川芎中不同沸點和不同狀態(tài)下的揮發(fā)性成分，因此，在對川芎揮發(fā)油進行GC-MS表征時，應(yīng)分別采用兩種方法進行聯(lián)合表征，則可建立更全面的川芎揮發(fā)性成分GC-MS信息。

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（收稿日期：2019-10-22 編輯：劉斌）