牙周牙髓聯(lián)合病變牙周袋內(nèi)厭氧菌的培養(yǎng)檢測(cè)和藥敏試驗(yàn)

林璐，張春春，沈肖明

龍巖人民醫(yī)院 （福建龍巖 364000）

牙周牙髓聯(lián)合病變指患牙同時(shí)出現(xiàn)牙髓炎癥、牙周破壞的一種細(xì)菌感染性疾病[1]。目前，牙周牙髓聯(lián)合病變是導(dǎo)致失牙的主要原因，備受人們重視，而徹底消除感染源是該病的主要治療原則。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，厭氧菌感染是導(dǎo)致牙周牙髓聯(lián)合病變牙周袋發(fā)生的主要原因，臨床多采取抗生素治療[2]?；诖?，對(duì)牙周牙髓聯(lián)合病變牙周袋內(nèi)厭氧菌進(jìn)行培養(yǎng)檢測(cè)，并開(kāi)展藥敏試驗(yàn)，可以提高抗生素的治療效果，對(duì)改善患者癥狀，提高患者生命質(zhì)量具有重要意義。本研究對(duì)74例牙周牙髓聯(lián)合病變患者厭氧菌進(jìn)行培養(yǎng)檢測(cè)，并開(kāi)展藥敏試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年4月至2017年4月我院收治的牙周牙髓聯(lián)合病變患者74例，其中男38例，女36例；年齡24～68歲，平均（46.86±3.14）歲。本研究獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：存在牙髓炎、根尖周炎病史；X線檢查顯示根尖周區(qū)、牙根側(cè)存在齒槽骨破壞的X線透影區(qū)，可探到牙周袋、電活力測(cè)驗(yàn)敏感、溫度測(cè)驗(yàn)疼痛（或者無(wú)反應(yīng)）[3]。

納入標(biāo)準(zhǔn)：確診為牙周牙髓聯(lián)合病變；患者自愿簽署同意書(shū)[4]。

排除標(biāo)準(zhǔn)：3個(gè)月內(nèi)應(yīng)用過(guò)抗生素治療的患者；存在全身性疾病的患者；精神障礙患者[5]。

1.2 細(xì)菌培養(yǎng)及檢測(cè)

（1）試劑：10%羊血Oxoid布氏血瓊脂培養(yǎng)基，10%脫纖維羊血的Oxoid 厭氧菌基礎(chǔ)瓊脂培養(yǎng)基，青霉素、甲硝唑、克林霉素、阿莫西林（所有藥物試劑均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）。（2）采樣及接種：對(duì)患者進(jìn)行采樣前，先用濃度為3%的過(guò)氧化氫（廣東恒健制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H44023919，100 ml/瓶）漱口，用紗條隔濕，用碘酊、乙醇棉球?qū)佳?、牙齦進(jìn)行消毒3次，達(dá)到無(wú)菌；去除菌斑后，將紙尖放置在深牙周袋中20 s，在1 h內(nèi)將其置于羊血瓊脂培養(yǎng)基平板上，放入?yún)捬醮鼉?nèi)，進(jìn)行厭氧培養(yǎng)。（3）培養(yǎng)及鑒定：設(shè)置培養(yǎng)溫度為35～38 ℃，時(shí)間為48～72 h，CO2、H2、N2濃度分別為5%、10%、85%；應(yīng)用的培養(yǎng)基為10%脫纖維羊血的Oxoid厭氧菌基礎(chǔ)瓊脂培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基（加入卡那霉素100 mg/L），培養(yǎng)后得到的細(xì)菌進(jìn)行耐氧試驗(yàn)2次，保證所有細(xì)菌均為專性厭氧菌；對(duì)各致病菌進(jìn)行分離、革蘭染色，在電子顯微鏡下進(jìn)行觀察，并應(yīng)用API20a試劑（厭氧菌鑒定試劑條，江蘇澤源生物科技有限公司）進(jìn)行生化鑒定；加入甘油、脫纖維羊血（20%、80%）在溫度為-70 ℃下進(jìn)行保存，留備藥敏試驗(yàn)。

1.3 藥敏試驗(yàn)

采用瓊脂稀釋法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，將菌落懸浮在厭氧瓊脂Wikins-Chalgren液體培養(yǎng)基（上海信裕生物科技有限公司）中，調(diào)整菌落濃度至1×106cfu/ml，借助多點(diǎn)接種器點(diǎn)種于10%脫纖維羊血布氏培養(yǎng)基中（含抗生素），培養(yǎng)時(shí)間為45 h，最低抑菌濃度（MIC）為無(wú)菌落形成或者形成菌落數(shù)量低于5個(gè)，用2個(gè)10%羊血布氏平板（不含抗生素）分別作為有氧對(duì)照、厭氧對(duì)照，質(zhì)控菌株為 ATCC25285（脆弱擬桿菌）。以美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，對(duì)各抗生素的耐藥濃度判斷如下：青霉素、甲硝唑、克林霉素、阿莫西林最低抑菌濃度分別為不低于2 mg/L、32 mg/L、8 mg/L、16 mg/L[6]。

2 結(jié)果

2.1 厭氧菌分布結(jié)果

74例牙周牙髓聯(lián)合病變患者經(jīng)耐氧試驗(yàn)，結(jié)果顯示，厭氧菌檢出率為100%，分離厭氧菌株77株，其中牙周源性牙周牙髓聯(lián)合病變培養(yǎng)的厭氧菌37株（48.05%），牙髓源性牙周牙髓聯(lián)合病變培養(yǎng)的厭氧菌40株（51.95%），經(jīng)生化鑒定，以鏈球菌屬最多，其次為普雷沃屬，見(jiàn)表1。

表1 厭氧菌分布結(jié)果[株（%）]

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，克林霉素耐藥最高，其次為青霉素，見(jiàn)表2。

表2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

牙髓組織和牙周組織在解剖學(xué)方面是相互溝通的，因此兩者的感染和病變可以互相影響和擴(kuò)散，導(dǎo)致聯(lián)合病變的發(fā)生。牙周牙髓聯(lián)合病變的發(fā)生包括3種：（1）牙周發(fā)生細(xì)菌感染進(jìn)而導(dǎo)致牙髓病變；（2）牙髓病變感染導(dǎo)致牙周病變；（3）牙周、牙髓獨(dú)立存在，并出現(xiàn)交叉感染[7]。牙周牙髓聯(lián)合病變的發(fā)生對(duì)人們的牙齒健康具有極大的危害，且影響人們的生活與工作，因此，采取積極的治療至關(guān)重要[8]。在對(duì)患者進(jìn)行治療時(shí)，選取有效的抗生素將直接影響整體療效，因此，治療前需要掌握致病菌分布情況，并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，找出最敏感的抗生素，從而合理應(yīng)用，達(dá)到治療的目的。

本研究結(jié)果顯示，分離出的77株厭氧菌株，經(jīng)生化鑒定，以鏈球菌屬最多，其次為普雷沃屬；耐藥試驗(yàn)方面，克林霉素耐藥最高，分析原因在于，克林霉素可以滲透牙骨質(zhì)，對(duì)生物膜形成具有抑制作用[9-10]。

綜上所述，牙周牙髓聯(lián)合病變與厭氧菌關(guān)系密切，藥敏試驗(yàn)可以找出敏感的治療藥物，為臨床治療提供借鑒依據(jù)。