美沙拉秦聯(lián)合雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌治療潰瘍性結(jié)腸炎效果及對患者血清sRAGE、Vaspin、炎性因子等影響

吳 可，蘇鵬飛，佟延新

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis， UC)是一種以腹痛、腹瀉及黏液血便等為主要臨床表現(xiàn)的多發(fā)生于結(jié)、直腸的非特異性炎性疾病[1]。UC發(fā)病率隨著人們飲食結(jié)構(gòu)的改變和生活水平的提高呈上升趨勢，且UC易反復(fù)發(fā)作，多遷延日久，對患者身心健康造成嚴(yán)重影響[2]。目前，臨床多采用水楊酸類、免疫抑制劑和糖皮質(zhì)激素治療UC，取得了一定效果。但水楊酸制劑單用難以發(fā)揮滿意治療效果，免疫抑制劑和糖皮質(zhì)激素易引起中毒和腸穿孔等不良反應(yīng)，且部分患者不耐受，不適用于UC的長期治療。隨著研究的深入，部分學(xué)者發(fā)現(xiàn)腸道微生態(tài)環(huán)境改善對提高UC治療效果有一定幫助[3]。為此，本研究觀察美沙拉秦聯(lián)合雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌治療UC效果及對患者血清可溶性晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(sRAGE)、內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑(Vaspin)、炎性因子等影響，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年5月—2017年5月遼陽市中心醫(yī)院收治符合納入及排除標(biāo)準(zhǔn)的UC 96例，根據(jù)治療方法不同將其分為研究組(51例)和對照組(45例)兩組。研究組男32例，女19例；年齡20～54(38.31±7.49)歲。病程5個月～10年(3.08±1.39)年。病變部位：全結(jié)腸21例，左半結(jié)腸16例，右半結(jié)腸14例。對照組男29例，女16例；年齡21～56(37.42±6.73)歲。病程5個月～11年(3.14±1.42)年。病變部位：全結(jié)腸18例，左半結(jié)腸14例，右半結(jié)腸13例。兩組性別、年齡、病程及病變部位等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)同意執(zhí)行。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合“炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年,廣州)”[4]中UC診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡18～65歲；③患者和(或)其家屬對本研究知情同意，自愿參與本研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并惡性腫瘤及嚴(yán)重心、肝、腎功能不全者；②并發(fā)腸穿孔及腸梗阻等嚴(yán)重消化道疾病者；③自身免疫系統(tǒng)疾病者；④有胃腸道手術(shù)史者；⑤近1個月內(nèi)接受糖皮質(zhì)激素及其他水楊酸類等藥物治療或?qū)Ρ狙芯克幬镞^敏者；⑥精神和(或)智力障礙者。

1.3治療方法 所有患者均給予營養(yǎng)支持、對癥治療及心理輔導(dǎo)等常規(guī)治療。研究組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上給予美沙拉秦(生產(chǎn)企業(yè)：黑龍江天宏藥業(yè)股份有限公司，規(guī)格：0.25 g，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20103359)每次1 g，每日3次口服；雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌(生產(chǎn)企業(yè)：上海信誼藥廠有限公司，規(guī)格：0.21 g，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字S10950032)每次0.42 g，每日3次餐后口服。對照組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上僅給予美沙拉秦(生產(chǎn)企業(yè)：黑龍江天宏藥業(yè)股份有限公司，規(guī)格：0.25 g，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20103359)每次1 g，每日3次口服。兩組均治療2個月。

1.4觀察指標(biāo)、方法及評價標(biāo)準(zhǔn) ①治療效果比較：以“炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年,廣州)”[4]為依據(jù)對兩組治療2個月后臨床效果進(jìn)行評價比較：臨床癥狀消失，結(jié)腸鏡檢查見黏膜大致正?；驘o活動性炎癥為緩解；臨床癥狀基本消失，結(jié)腸鏡檢查見黏膜輕度炎癥為有效；臨床癥狀及結(jié)腸鏡檢查均無改善為無效?？傆行?緩解+有效。②血清sRAGE、Vaspin、炎性因子及氧化應(yīng)激指標(biāo)水平比較：炎性因子包括白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素8(IL-8)及腫瘤壞死因子α(TNF-α)。氧化應(yīng)激指標(biāo)包括一氧化氮(NO)、過氧化脂質(zhì)(LPO)及超氧化物歧化酶(SOD)。分別于治療前及治療2個月后采集兩組清晨空腹靜脈血8 ml，離心分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測血清sRAGE、Vaspin、IL-6、IL-8及TNF-α水平(試劑盒均購自上海穎心實驗室設(shè)備有限公司)；亞硝酸鹽還原酶比色法測定NO，硫代巴比妥酸反應(yīng)產(chǎn)物比色法測定LPO，黃嘌呤氧化酶法測定SOD(試劑盒均購自北京索萊寶科技有限公司)。③便基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、鈣衛(wèi)蛋白(Cal)及髓過氧化物酶(MPO)水平比較：分別于治療前和治療2個月后留取兩組便5～10 g，按質(zhì)量容積比1∶50加入0.9%氯化鈉注射液，充分振蕩20 min，取1 ml均漿離心，取上清液0.5 ml采用ELISA法檢測MMP-9、Cal及MPO水平，試劑盒購自上海潤裕生物科技有限公司。④治療期間不良反應(yīng)發(fā)生情況比較：治療期間不良反應(yīng)包括惡心及腹脹加重等。

2 結(jié)果

2.1治療效果比較 治療2個月后，研究組總有效率為92.16%高于對照組總有效率75.56%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.998，P=0.025)，見表1。

2.2血清sRAGE和Vaspin水平比較 治療前，兩組血清sRAGE和Vaspin水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療2個月后，兩組血清sRAGE和Vaspin水平均較治療前降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(研究組：t=14.055、P<0.001，t=21.139、P<0.001；對照組：t=8.771、P<0.001，t=15.831、P<0.001)。治療2個月后，研究組血清sRAGE和Vaspin水平均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

表1 采用不同方法治療的潰瘍性結(jié)腸炎兩組治療2個月后臨床效果比較[例(%)]

注：研究組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上采用美沙拉秦聯(lián)合雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌進(jìn)行治療，對照組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上僅采用美沙拉秦進(jìn)行治療；aP<0.05

表2 采用不同方法治療的潰瘍性結(jié)腸炎兩組治療前后血清sRAGE及Vaspin水平比較

注：sRAGE為可溶性晚期糖基化終末產(chǎn)物受體，Vaspin為內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑；研究組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上采用美沙拉秦聯(lián)合雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌進(jìn)行治療，對照組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上僅采用美沙拉秦進(jìn)行治療；與本組治療前同一指標(biāo)比較，bP<0.01

2.3血清炎性因子比較 治療前，兩組各血清炎性因子水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療2個月后，兩組血清IL-6、IL-8及TNF-α水平均較治療前降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(研究組：t=26.378、P<0.001，t=25.794、P<0.001，t=28.941、P<0.001；對照組：t=19.626、P<0.001，t=20.751、P<0.001，t=23.273、P<0.001)。治療2個月后，研究組血清IL-6、IL-8及TNF-α水平均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表3。

表3 采用不同方法治療的潰瘍性結(jié)腸炎兩組治療前后血清炎性因子水平比較

注：研究組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上采用美沙拉秦聯(lián)合雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌進(jìn)行治療，對照組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上僅采用美沙拉秦進(jìn)行治療；IL-6為白細(xì)胞介素6，IL-8為白細(xì)胞介素8，TNF-α為腫瘤壞死因子α；與本組治療前同一指標(biāo)比較，bP<0.01

2.4血清氧化應(yīng)激指標(biāo)比較 治療前，兩組各血清氧化應(yīng)激指標(biāo)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療2個月后，兩組血清NO和LPO水平均較治療前降低(研究組：t=23.992、P<0.001，t=11.913、P<0.001；對照組：t=17.082、P<0.001，t=5.803、P<0.001)，血清SOD水平均較治療前升高(研究組：t=28.510、P<0.001；對照組：t=15.435、P<0.001)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。治療2個月后，研究組血清NO和LPO水平低于對照組，血清SOD水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表4。

表4 采用不同方法治療的潰瘍性結(jié)腸炎兩組治療前后血清氧化應(yīng)激指標(biāo)比較

注：研究組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上采用美沙拉秦聯(lián)合雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌進(jìn)行治療，對照組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上僅采用美沙拉秦進(jìn)行治療；NO為一氧化氮，LPO為過氧化脂質(zhì)，SOD為超氧化物歧化酶；與本組治療前同一指標(biāo)比較，bP<0.01

2.5便MMP-9、Cal及MPO水平比較 治療前，兩組便MMP-9、Cal及MPO水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療2個月后，兩組便MMP-9、Cal及MPO水平均較治療前降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(研究組：t=34.180、P<0.001，t=26.706、P<0.001，t=34.155、P<0.001；對照組：t=26.122、P<0.001，t=21.786、P<0.001，t=23.479、P<0.001)。治療2個月后，研究組便MMP-9、Cal及MPO水平均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表5。

表5 采用不同方法治療的潰瘍性結(jié)腸炎兩組治療前后便MMP-9、Cal及MPO水平比較

注：研究組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上采用美沙拉秦聯(lián)合雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌進(jìn)行治療，對照組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上僅采用美沙拉秦進(jìn)行治療；MMP-9為基質(zhì)金屬蛋白酶9，Cal為鈣衛(wèi)蛋白，MPO為髓過氧化物酶；與本組治療前同一指標(biāo)比較，bP<0.01

2.6不良反應(yīng)發(fā)生情況比較 治療期間，研究組出現(xiàn)惡心2例，腹脹加重1例；對照組出現(xiàn)惡心2例。兩組出現(xiàn)不良反應(yīng)者癥狀均較輕微，未對治療產(chǎn)生影響，后皆自行緩解。

3 討論

UC的發(fā)病機(jī)制現(xiàn)尚未闡明，相關(guān)研究顯示其與炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、腸道屏障功能缺陷和菌群失調(diào)等因素有關(guān)[5]。晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)作為一種于單核巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞中普遍存在的跨膜傳導(dǎo)多配體受體，在機(jī)體免疫和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。樊潔等[6]研究發(fā)現(xiàn)，UC患者體內(nèi)RAGE與配體作用可誘導(dǎo)氧化及多種炎性介質(zhì)表達(dá)，并可活化NF-κB，從而導(dǎo)致TNF-α及IL-6等大量炎性因子釋放，且與炎性因子的表達(dá)呈正相關(guān)。RAGE的內(nèi)源分泌型sRAGE可反映RAGE水平，對評估UC患者炎癥發(fā)展程度有重要價值。Vaspin作為脂肪細(xì)胞因子，可促進(jìn)脂聯(lián)素表達(dá)，抑制瘦素、抵抗素以及TNF-α表達(dá)。Vaspin可對炎性介質(zhì)進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)，其在UC患者的血清水平與疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)[7]。由上可見Vaspin對UC的治療效果評估有一定作用。便檢測因取樣便捷及相對于結(jié)腸鏡檢查更易被患者接受等優(yōu)勢臨床應(yīng)用廣泛。UC患者腸黏膜屏障缺陷，中性粒細(xì)胞可進(jìn)入腸腔由糞便排出。相關(guān)研究證實，便MMP-9、Cal及MPO等中性粒細(xì)胞衍生產(chǎn)物可直接反映腸道炎癥程度[8]，對藥物治療效果有良好判定價值。

氧化應(yīng)激也是UC發(fā)病機(jī)制之一。IL-6及IL-8等炎性因子可刺激炎性細(xì)胞一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表達(dá)，促進(jìn)NO生成，但大量NO的堆積將影響線粒體的功能，阻礙DNA的合成等過程，導(dǎo)致組織損傷[9]。LPO作為不飽和脂肪酸經(jīng)自由基作用產(chǎn)生過氧化物，可破壞生物膜、RNA和DNA結(jié)構(gòu)及功能，并可抑制免疫功能[10]。SOD可通過抑制或清除氧自由基減輕氧化應(yīng)激損傷發(fā)揮抗氧化作用。近年UC的抗氧化治療已逐漸引起人們重視。有動物實驗顯示，抗氧化治療可減輕UC大鼠模型腸道炎癥損傷程度，改善大鼠臨床表現(xiàn)[11]。

美沙拉秦作為水楊酸制劑，有效成分為5-氨基水楊酸(5-ASA)，主要通過抑制花生四烯酸的代謝途徑減少白三烯及前列腺素等炎性介質(zhì)的合成，從而發(fā)揮非特異性抗炎作用[12]。本研究中，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上僅采用美沙拉秦進(jìn)行治療的對照組治療2個月后血清sRAGE、Vaspin、炎性因子及便MMP-9、Cal、MPO水平均較治療前降低，表明美沙拉秦對UC患者腸道炎癥改善有一定幫助，推測與其可抑制花生四烯酸的代謝途徑以減少炎性介質(zhì)的合成有關(guān)。吳海霞和周珂瑋[13]研究顯示，美沙拉秦可通過誘導(dǎo)NF-κB的活化抑制前列腺素E2(PGE2)等炎性介質(zhì)的合成，減少TNF-α及IL-8等炎性因子的釋放，與本研究結(jié)果基本一致。此外，本研究結(jié)果還顯示，治療2個月后，對照組氧化應(yīng)激指標(biāo)水平均較治療前改善，推測與美沙拉嗪可增強(qiáng)機(jī)體清除氧自由基的能力有關(guān)。

隨著微生態(tài)學(xué)的發(fā)展，部分學(xué)者在抗感染治療的基礎(chǔ)上予以UC患者可促進(jìn)宿主機(jī)體微生態(tài)平衡的益生菌治療并取得了一定效果[14]。本研究中，研究組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上采用美沙拉秦聯(lián)合雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌進(jìn)行治療，對照組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上僅采用美沙拉秦進(jìn)行治療，結(jié)果顯示，治療2個月后，研究組總有效率為92.16%高于對照組總有效率75.56%，提示美沙拉秦聯(lián)合雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌對提高UC患者治療效果有一定幫助。雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌作為一種三聯(lián)活菌復(fù)方制劑，可通過直接補(bǔ)充正常生理菌叢抑制致病菌，改善腸道微生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收，抑制腸源性毒素的產(chǎn)生和吸收，利于腸道炎癥反應(yīng)的改善[15]。雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌在進(jìn)入腸道后可與有益菌占據(jù)腸道黏膜表面，形成生物學(xué)屏障，阻止致病菌的定植和入侵。陳靜等[16]研究也顯示，雙歧桿菌和乳酸桿菌等腸道內(nèi)優(yōu)勢菌群，與人體生物拮抗、營養(yǎng)吸收及代謝、調(diào)節(jié)免疫等生理功能密切相關(guān)，在予以水楊酸制劑治療的同時改善UC患者腸道微生態(tài)環(huán)境對提升療效有重要意義，與本研究結(jié)果基本一致。

雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌中的益生菌可抑制NF-κB的釋放，并可促進(jìn)激活過氧化物酶體增殖因子激活受體γ(PPAR-γ)，從而發(fā)揮促進(jìn)白細(xì)胞介素10(IL-10)及轉(zhuǎn)化生長因子β等抗炎細(xì)胞因子表達(dá)，抑制TNF-α及IL-8等促炎細(xì)胞因子表達(dá)的作用[17]。此外，該藥物還可通過改善腸道微生態(tài)平衡加速損傷上皮修復(fù)。本研究結(jié)果顯示，治療2個月后，研究組血清sRAGE、Vaspin、IL-6、IL-8、TNF-α、NO、LPO及便MMP-9、Cal、MPO水平均低于對照組，血清SOD高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。說明在常規(guī)治療基礎(chǔ)上采用美沙拉秦聯(lián)合雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌進(jìn)行治療的研究組血清sRAGE、Vaspin、炎性因子、氧化應(yīng)激指標(biāo)及便炎性標(biāo)志物水平改善情況均優(yōu)于在常規(guī)治療基礎(chǔ)上僅采用美沙拉秦治療的對照組，推測可能與該聯(lián)合療法可在美沙拉秦治療基礎(chǔ)上予以益生菌促進(jìn)腸道菌群平衡、加速損傷上皮修復(fù)等作用有關(guān)。另外，本研究結(jié)果還顯示，治療期間，研究組出現(xiàn)惡心2例，腹脹加重1例；對照組出現(xiàn)惡心2例。兩組出現(xiàn)不良反應(yīng)者癥狀均較輕微，未對治療產(chǎn)生影響，后皆自行緩解。提示在常規(guī)治療基礎(chǔ)上采用美沙拉秦聯(lián)合雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌治療UC的安全性良好。美沙拉秦為5-ASA控釋劑型，服用后僅在處于pH≥6環(huán)境中時聚甲基丙酸或乙基纖維素外層才會溶解，使5-ASA于小腸末端及結(jié)腸處釋放發(fā)揮抗炎作用，相對于柳氮磺胺吡啶顯著減少了不良反應(yīng)[18]，與本研究結(jié)果一致。而雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌僅補(bǔ)充腸道有益菌，亦無明顯不良反應(yīng)。

總之，美沙拉秦聯(lián)合雙歧桿菌嗜酸乳桿菌腸球菌三聯(lián)活菌治療UC效果顯著，可減輕患者腸道炎癥反應(yīng)，改善患者免疫功能和腸道黏膜損傷，且安全性良好。