膽堿能神經(jīng)病理?yè)p傷阿爾茨海默病模型構(gòu)建

李偉 (宜春學(xué)院體育學(xué)院，江西 宜春 336000)

阿爾茨海默病(AD)作為臨床上最常見(jiàn)的老年神經(jīng)病變性疾病，是一種以記憶力減退、判斷能力和理解能力下降等為主要臨床表現(xiàn)的退行性神經(jīng)疾病。隨增齡，其發(fā)病率逐年升高。AD病程緩慢且難以逆轉(zhuǎn)，早期多見(jiàn)記憶力和思維能力的明顯減退，隨后表現(xiàn)為辨認(rèn)能力缺失，如辨別方向障礙等，語(yǔ)言表達(dá)困難、生活自理能力喪失等病理特征，終會(huì)因感染等嚴(yán)重并發(fā)癥導(dǎo)致死亡。其病理特征的改變常與大腦海馬和皮層神經(jīng)元喪失，胞內(nèi)出現(xiàn)神經(jīng)纖維纏結(jié)，胞外出現(xiàn)沉淀的老年斑等相關(guān)〔1〕。為更進(jìn)一步探究和驗(yàn)證AD的發(fā)病機(jī)制，眾多學(xué)者依據(jù)其發(fā)病的病理機(jī)制，構(gòu)建了多種動(dòng)物模型，如篩選帶有認(rèn)知和記憶嚴(yán)重缺失的個(gè)體為代表的衰老認(rèn)知障礙動(dòng)物和自然發(fā)病的老化癡呆鼠模型、實(shí)施轉(zhuǎn)基因技術(shù)構(gòu)建轉(zhuǎn)基因AD動(dòng)物模型、外因造成腦供血不足致腦損傷誘導(dǎo)的老年動(dòng)物慢性腦缺血模型、依靠改變外界因素致長(zhǎng)期慢性缺氧狀態(tài)的AD模型，通過(guò)腦內(nèi)注射β-淀粉樣蛋白(Aβ)造模的AD動(dòng)物模型及采用鵝膏蕈氨酸(IBO)致基底前腦神經(jīng)元毒性損傷造AD模型、長(zhǎng)期進(jìn)行岡田軟海綿酸(OA)腦室投遞誘導(dǎo)動(dòng)物記憶嚴(yán)重缺失，導(dǎo)致腦內(nèi)Aβ淀粉樣沉積斑塊的AD模型、乙酰膽堿M受體阻斷致癡呆動(dòng)物模型、鋁元素中毒AD模型等。其中以膽堿能神經(jīng)損傷的病理改變機(jī)制進(jìn)行的AD造模是當(dāng)前研究的重要領(lǐng)域之一。乙酰膽堿(ACh)作為最早發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)遞質(zhì)，能合成乙酰膽堿并以ACh為神經(jīng)遞質(zhì)的神經(jīng)元稱(chēng)為膽堿能神經(jīng)元，膽堿能神經(jīng)元在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的分布極為廣泛，其在AD的病理機(jī)制研究中占據(jù)著極為重要的地位，扮演重要的角色〔2〕。作為慢性神經(jīng)退行性病變的AD，其重要的病理特征之一就是膽堿能神經(jīng)元的丟失，從相關(guān)研究結(jié)果來(lái)看，雖然在AD早期膽堿能神經(jīng)元并未丟失，而是收縮丟掉其表型標(biāo)記物或處于萎縮狀態(tài)〔3,4〕。

1 AD模型病理特征及其模擬方法

1.1AD的膽堿能神經(jīng)病理改變 AD的常見(jiàn)病理改變包括細(xì)胞外聚集的Aβ沉積形成老年斑塊、細(xì)胞內(nèi)高度磷酸化Tau蛋白所致的神經(jīng)纖維纏結(jié)及前腦基底膽堿能神經(jīng)元的顯著丟失等，且三者之間有著密切的相互關(guān)系，比如AD患者腦內(nèi)的Aβ可損害膽堿能神經(jīng)元，引起ACh系統(tǒng)的病變〔5〕，而Aβ比例失衡，在腦內(nèi)沉積形成老年斑，可激活小膠質(zhì)細(xì)胞，引發(fā)炎癥反應(yīng)，損害線(xiàn)粒體誘發(fā)能量代謝障礙，氧自由基生成增多，誘發(fā)氧化應(yīng)激損害，激活細(xì)胞凋亡途徑，介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，還能通過(guò)激活蛋白激酶，促進(jìn)Tau蛋白異常磷酸化〔6〕。這些病理改變又會(huì)反作用促進(jìn)Aβ生成增多導(dǎo)致異常沉積，進(jìn)一步促使正反饋的級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)，誘導(dǎo)神經(jīng)元減少，5-羥色胺、去甲腎上腺素、多巴胺等的遞質(zhì)異常。

1.2Aβ注射模擬大鼠AD模型病理特征 Aβ是由40～42個(gè)氨基酸構(gòu)成的多肽蛋白，是淀粉樣前體蛋白(APP)的水解產(chǎn)物，疏水性強(qiáng)且易聚集。Aβ在腦組織內(nèi)的異常代謝會(huì)致使腦組織細(xì)胞RNA、DNA及蛋白質(zhì)、脂質(zhì)的過(guò)氧化反應(yīng)過(guò)程〔7〕，損害線(xiàn)粒體的功能〔8〕、增強(qiáng)氧化應(yīng)激反應(yīng)，促進(jìn)Tau蛋白過(guò)度磷酸化，誘導(dǎo)神經(jīng)元的凋亡；Aβ的異常沉積還能形成免疫原應(yīng)激反應(yīng)，激活非特異性的免疫反應(yīng)介導(dǎo)神經(jīng)元損傷，進(jìn)而觸發(fā)Aβ級(jí)聯(lián)反應(yīng)，誘發(fā)一系列的神經(jīng)功能損害。因此，Aβ沉積與神經(jīng)元損傷、認(rèn)知障礙、記憶喪失等的程度高度相關(guān)，Markesbery〔9〕已經(jīng)證實(shí)Aβ是誘發(fā)腦部神經(jīng)細(xì)胞氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡的重要原因之一。研究證實(shí)，Aβ在腦組織的異常代謝和沉積是AD發(fā)病的重要環(huán)節(jié)〔10,11〕。在AD患者機(jī)體中有較強(qiáng)的神經(jīng)毒性的游離Aβ單體或寡聚體，游離的Aβ單體主要通過(guò)損傷突觸的離子通道影響突觸的可塑性、葡萄糖載體參與能量代謝，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激損傷、擾亂Ca2+平衡等途徑導(dǎo)致神經(jīng)元的毒性變化，相比Aβ單體而言，聚集早期的寡聚體毒性最強(qiáng)〔12,13〕。老年斑是AD的又一重要的病理學(xué)改變，而Aβ是老年斑的主要成分。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Aβ在較低濃度時(shí)便可產(chǎn)生神經(jīng)毒性作用，腦內(nèi)注射微量Aβ可誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生記憶缺損等行為學(xué)障礙，出現(xiàn)典型性病理特征的Aβ沉積，與AD的病理改變極為相似的。因此，采用海馬內(nèi)單點(diǎn)注射或多點(diǎn)注射是一種較好的AD動(dòng)物模型〔14,15〕。

主要的研究以Alvarez等〔16〕、Nabeshima〔17〕分別用單側(cè)或雙側(cè)海馬注射Aβ28片段，或者內(nèi)置微型滲透壓泵進(jìn)行大鼠腦室灌注Aβ，再經(jīng)被動(dòng)回避、水迷宮等行為學(xué)評(píng)定證實(shí)大鼠認(rèn)知功能受損程度，結(jié)合海馬與大腦前端皮層膽堿乙?；富钚缘淖兓u(píng)價(jià)產(chǎn)生的持續(xù)性損害。研究發(fā)現(xiàn)Aβ注射后4 w內(nèi)海馬APP的表達(dá)顯著增加，同時(shí)伴隨有較為嚴(yán)重的認(rèn)知功能損害，依此可證實(shí)Aβ過(guò)度沉積于AD的發(fā)病存在密切相關(guān)關(guān)系〔18〕。可見(jiàn)，Aβ注射可構(gòu)建急性AD損傷模型，隨之動(dòng)物出現(xiàn)與AD患者相似的記憶功能障礙，病理檢測(cè)有明顯的Aβ沉積，可較好地復(fù)制了AD病理特征〔19〕。此方法能快速建模，學(xué)習(xí)記憶障礙顯著，損害部位明確，病理學(xué)檢查可見(jiàn)明顯的海馬腦區(qū)錐體細(xì)胞丟失〔20,21〕。但該模型存在的不足也很明顯，比如在注射Aβ時(shí)，稍不注意，就會(huì)造成海馬區(qū)域周?chē)X組織的局灶性穿透損傷，導(dǎo)致注射點(diǎn)周?chē)奂罅康腁β難以彌散地分布至腦內(nèi)，易引起局部Aβ沉積過(guò)度，誘發(fā)局灶性腦細(xì)胞損傷。同時(shí)，被造模動(dòng)物自身也有Aβ的清除功能，雖然該模型病理表現(xiàn)有典型的Aβ沉積，但持續(xù)時(shí)間不長(zhǎng)，難以體現(xiàn)神經(jīng)纖維纏結(jié)等的病理改變。

1.3Tau蛋白磷酸化模型構(gòu)建AD病理特征 正常情況下，在催化磷酸化反應(yīng)的蛋白激酶和催化去磷酸化反應(yīng)的蛋白磷酸酯酶的共同調(diào)節(jié)作用下Tau蛋白處于動(dòng)態(tài)平衡。Tian等〔22〕對(duì)SD大鼠雙側(cè)基底核注射蛋白磷酸酯酶-2A的抑制劑OA，可誘導(dǎo)Tau蛋白的過(guò)度磷酸化，致使Meynert基底核呈現(xiàn)Tau蛋白ser199/202位點(diǎn)的高度磷酸化，使其空間記憶力顯著下降，并伴隨有非磷酸化蛋白的表達(dá)降低。Yin等〔23〕采用相同方法發(fā)現(xiàn)，非磷酸化Tau蛋白減少，大鼠的記憶力明顯下降，Tau蛋白ser214、ser262、ser396等過(guò)度磷酸化。類(lèi)似的研究還有Nelson等〔24〕把OA注射入大腦皮質(zhì)，使其誘導(dǎo)產(chǎn)生扭曲的營(yíng)養(yǎng)不良性神經(jīng)突；Lee等〔25〕將OA注入大鼠海馬背側(cè)，發(fā)現(xiàn)雙螺旋細(xì)絲與營(yíng)養(yǎng)不良性神經(jīng)氈模出現(xiàn)，APP免疫反應(yīng)明顯，微管蛋白-2降低；后又有學(xué)者注射OA于大鼠額葉皮質(zhì)后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期蛋白B1的表達(dá)增強(qiáng)，Tau蛋白磷酸化增加，神經(jīng)元有絲分裂樣潰變嚴(yán)重〔26〕。Rosenmann等〔27〕采用神經(jīng)性Tau蛋白免疫小鼠，誘導(dǎo)AD模型鼠組織病理學(xué)改變特征，復(fù)制出典型的神經(jīng)纖維纏結(jié)和軸突的損害。但由于采取注射藥物誘導(dǎo)Tau蛋白過(guò)度磷酸化的過(guò)程，因此只能體現(xiàn)Tau蛋白的病理表現(xiàn)，該模型多應(yīng)用于Tau蛋白磷酸化機(jī)制研究或抗Tau蛋白磷酸化作為靶標(biāo)研發(fā)新藥物的應(yīng)用研究，因此，該模型的局限性較為明顯。

2 膽堿能神經(jīng)損傷模擬AD病理?yè)p傷

伴隨著近年來(lái)化學(xué)神經(jīng)解剖學(xué)、認(rèn)知神經(jīng)科學(xué)和分子生物病理學(xué)等的發(fā)展，中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)損傷在AD認(rèn)知障礙中的作用日益受到重視。近年來(lái)的研究現(xiàn)已經(jīng)證實(shí)AD患者腦組織和腦脊液中Ach酯酶和Ach轉(zhuǎn)移酶的攝取、合成與釋放功能的下降，影響患者記憶力，出現(xiàn)典型的認(rèn)知功能障礙。因此，膽堿能系統(tǒng)的活性與人的學(xué)習(xí)記憶與認(rèn)知活動(dòng)過(guò)程密切相關(guān)。重癥AD患者尸檢結(jié)果也證實(shí)，患者基底前腦的膽堿能神經(jīng)元丟失，致使AD的合成、儲(chǔ)存與釋放功能下降，導(dǎo)致其記憶與認(rèn)知功能障礙〔28〕。也有學(xué)者早期發(fā)現(xiàn)，AD患者腦中老年斑和神經(jīng)纖維纏結(jié)部位增加了以不對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)存在的Ach受體(AchE)，其膠原樣的尾部，進(jìn)一步促進(jìn)Aβ沉積，形成老年斑〔29〕。有學(xué)者提出AD發(fā)病的膽堿能學(xué)說(shuō)，該模型的構(gòu)建主要是依靠膽堿能學(xué)說(shuō)為基礎(chǔ)，以引起包括大腦新皮層、海馬、中縫背核與基底核等在內(nèi)的腦功能部位率先出現(xiàn)膽堿能神經(jīng)元退變、膽堿能神經(jīng)功能降低，誘發(fā)AD病理改變。

3 膽堿能神經(jīng)損傷構(gòu)建AD模型

3.1物理手段切斷海馬傘致膽堿能神經(jīng)損傷進(jìn)行AD造模 采用此手段進(jìn)行AD造模是建立在AD認(rèn)知功能障礙的膽堿能學(xué)說(shuō)基礎(chǔ)上，采用手術(shù)法切斷大鼠海馬傘致穹隆-海馬傘斷裂，引起動(dòng)物空間定向和記憶障礙的同時(shí)，誘發(fā)膽堿能損傷模型〔30〕，造成大腦中樞神經(jīng)元損傷。該模型可用于觀察以膽堿能藥物的藥效學(xué)評(píng)價(jià)，或觀察和開(kāi)發(fā)新藥物對(duì)神經(jīng)功能損傷的修復(fù)作用，?？捎糜贏D臨床前藥效學(xué)研究的重要模型。龍大宏等〔31〕通過(guò)免疫電鏡和形態(tài)計(jì)量學(xué)分析和評(píng)價(jià)損傷左側(cè)穹隆海馬傘造成隔-海馬膽堿能系統(tǒng)損害的老年鼠AD模型，損傷后1個(gè)月檢測(cè)發(fā)現(xiàn)損傷側(cè)齒狀回分子層神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體陽(yáng)性突觸前終末、突觸后致密物和ACh轉(zhuǎn)移酶陽(yáng)性軸突終末面積和周長(zhǎng)都有不同程度的縮小。按照相似原理，Miyamoto等〔32〕也通過(guò)電解損傷Meynert基底核(NBM)降低大腦皮質(zhì)ACh含量，增加記憶障礙，降低認(rèn)知功能。這類(lèi)造模方法主要在20世紀(jì)的七八十年代比較常見(jiàn)，主要采取手術(shù)方法切斷扣帶束、海馬傘、背穹隆等海馬通路，損壞膽堿能神經(jīng)纖維的傳導(dǎo)功能，影響海馬定向，增加其記憶障礙。該模型的優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在造模周期短，不足主要體現(xiàn)在腦組織中單胺氧化酶B活性未見(jiàn)顯著升高，且手術(shù)定位困難，難以避免損傷鄰近組織，因此，采用此方法進(jìn)行造模的方式已被淘汰。

3.2化學(xué)藥物致膽堿能損傷進(jìn)行AD造模 采用化學(xué)藥物方法復(fù)制AD膽堿能損傷的常見(jiàn)方法包括腹腔注射東莨菪堿及樟柳堿(膽堿能拮抗劑)、1-乙基-1(2-羥乙基)氯化氮丙啶及海人藻酸(KA)、鵝膏蕈氨酸、使君子酸(QUIS)、N-甲基-D-天冬氨酸等神經(jīng)毒素，損害膽堿能神經(jīng)元功能的同時(shí)，也影響非膽堿能神經(jīng)元的功能。在這些致神經(jīng)損傷的藥物中，以IBO為首選，IBO能恒定地?fù)p害動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶有關(guān)的行為執(zhí)行。相比于IBO和QUIS對(duì)基底前腦的損害來(lái)看，基底前腦細(xì)胞對(duì)KA的敏感性低，用量大，稍有不慎便會(huì)引起動(dòng)物的不正常死亡，而且在導(dǎo)致基底前腦細(xì)胞損害的同時(shí)，也引起包括海馬錐體細(xì)胞在內(nèi)的其他部位的神經(jīng)元死亡〔33,34〕。

3.2.1乙酰膽堿M受體阻斷劑致AD動(dòng)物模型 東莨菪堿作為膽堿能拮抗劑，能有效阻斷大腦皮質(zhì)中的Ach受體的結(jié)合位點(diǎn)，而Ach是神經(jīng)系統(tǒng)重要的化學(xué)遞質(zhì)，在神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中起到重要的信使作用，由于其結(jié)合位點(diǎn)被阻斷進(jìn)而誘發(fā)膽堿能系統(tǒng)的功能障礙。付君〔35〕參考Ahmed等〔36〕、Kotani等〔37〕的方法采取腹腔注射氫溴酸東莨菪堿〔1.5 mg/(kg·d)，連續(xù)7 d〕的方法進(jìn)行AD建模。第7天水迷宮試驗(yàn)后檢測(cè)血液和腦組織發(fā)現(xiàn)AchE含量明顯增高，膽堿乙?；D(zhuǎn)移酶(ChAT)含量明顯降低，說(shuō)明造模效果明顯。葉翠飛等〔38〕于每天試驗(yàn)前0.5 h對(duì)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物進(jìn)行腹腔注射給藥東莨菪堿制劑，腦組織測(cè)試結(jié)果顯示M受體結(jié)合力明顯下降。有研究指出，東莨菪堿或樟柳堿急性注射模型難以出現(xiàn)AD的組織病理學(xué)改變，而AD作為一種進(jìn)行性不可逆的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，采用此模型造模的突觸后AchM受體未見(jiàn)明顯減少。因此，此模型主要以造成受試認(rèn)知功能障礙，對(duì)長(zhǎng)時(shí)記憶功能及海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)無(wú)明顯影響〔39〕，從病理上來(lái)看，尚缺乏AD特殊病理特征，且阻斷是可逆的。

3.2.2IBO致AD大鼠模型 具有強(qiáng)烈神經(jīng)興奮毒性作用的IBO是一種谷氨酸受體激動(dòng)劑，常與神經(jīng)元樹(shù)突或胞體上的N-甲基-D-天冬氨酸受體結(jié)合誘發(fā)神經(jīng)元潰變性中毒損傷〔40〕。采用此方法造模時(shí)，常在大鼠腦立體定位后〔41〕，采用常規(guī)消毒大鼠頭部皮膚后，在頭部中線(xiàn)處，縱向1.0～2.0 cm切口。用10%過(guò)氧化氫擦拭，暴露大鼠前囟點(diǎn)，再用微量進(jìn)樣器的針頭對(duì)準(zhǔn)前囟，抽取1 μl IBO，待拔出三棱針后，將標(biāo)尺移回到原定位點(diǎn)，繼續(xù)向硬膜下移動(dòng)8.2 mm。10 min內(nèi)單側(cè)勻速注射IBO 5 μg，留針5 min出針，對(duì)側(cè)相同位置采用同樣方法注射IBO5 μg。雙側(cè)注射藥物后，取下大鼠，縫合大鼠頭皮，酒精常規(guī)消毒?；艚瓭取?2,43〕選擇4月齡的SD雄性小鼠，采用NBM位置注射KA構(gòu)建AD實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀＞唧w如下：首先采用1%的巴比妥鈉(20 mg/kg體重)進(jìn)行腹腔注射，用以麻醉，然后用腦立體定位儀將其固定，再在顱骨線(xiàn)處將皮膚剪開(kāi)，確定NBM的位置后，在顱骨上鉆出約1.0 mm的孔徑，再在NBM的兩側(cè)用微量注射器注入1 μl的KA，為破壞該區(qū)域的膽堿能細(xì)胞，需要?jiǎng)蛩倬徛⑸洌⑸浜蟛⒘翎? min，術(shù)后及時(shí)進(jìn)行處理，不僅要縫合皮膚，且為避免感染，需要按時(shí)給予青霉素注射消炎，連續(xù)進(jìn)行3 d。Ahmed等〔44〕將IBO微量注射入大鼠NBM后，發(fā)現(xiàn)該方法一方面造成大鼠被動(dòng)逃避反應(yīng)潛伏期縮短，另一方面組織學(xué)檢查可見(jiàn)腹側(cè)丘腦和小丘腦外側(cè)區(qū)損毀，蒼白球腹內(nèi)側(cè)核膽堿能神經(jīng)元大部分消失，膠質(zhì)細(xì)胞增生等病理癥狀。該造模方法屬于興奮性毒素致基底核損害模型，通過(guò)IBO注射?？蓪?dǎo)致反應(yīng)學(xué)習(xí)記憶功能下降、基底前腦膽堿能神經(jīng)元缺失等的病理學(xué)改變，雖然該類(lèi)模型的缺陷是難以誘導(dǎo)產(chǎn)生AD的病理學(xué)特征，不能誘導(dǎo)出AD的病因，但廣泛應(yīng)用于膽堿能神經(jīng)元損傷藥物的篩選與藥效研究。侯雪芹等〔45〕對(duì)比了氫溴酸東莨菪堿致記憶障礙模型、鵝膏蕈酸致癡呆大鼠模型、快速老化模型及雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果顯示快速老化小鼠的Morris水迷宮測(cè)試、Bcl-2蛋白表達(dá)及凋亡檢測(cè)較其他模型組更為明顯，提示快速老化模型對(duì)于老年癡呆凋亡機(jī)制的研究?jī)?yōu)勢(shì)明顯，可為臨床研究防治老年癡呆的新藥開(kāi)發(fā)提供指導(dǎo)。

3.2.3OA慢性損害進(jìn)行AD造模 OA可特異性抑制絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸化酶，激活蛋白激酶(PK)C，一旦絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸化酶受到抑制便可引起Tau蛋白過(guò)磷酸化，誘發(fā)神經(jīng)纖維纏結(jié)的形成，引起慢性損害，誘導(dǎo)AD病理?yè)p傷，此方法可用于AD造模。因此，作為絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸化酶特異性抑制劑，長(zhǎng)期進(jìn)行腦室投遞，可引起動(dòng)物記憶缺失，腦內(nèi)出現(xiàn)神經(jīng)纖維纏結(jié)樣磷酸化Tau蛋白和Aβ沉積斑塊。Arendt等〔46〕發(fā)現(xiàn)絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸化酶的活性抑制、PKC激活均可刺激Aβ的生成，進(jìn)而引起Aβ的沉積和神經(jīng)纖維纏結(jié)的形成。正是由于OA的這一作用，可同時(shí)復(fù)制AD典型的病理改變神經(jīng)纖維纏結(jié)和老年斑的形成，因此該模型具有明顯的優(yōu)勢(shì)，比如通過(guò)該模型從Aβ和Tau蛋白代謝異常及二者相互作用誘導(dǎo)AD發(fā)病探究其病理機(jī)制。該模型的研究主要傾向于認(rèn)知缺失與前腦膽堿能系統(tǒng)損傷模擬AD病理改變〔47〕。

3.2.4自身免疫抗膽堿能神經(jīng)元損傷AD模型 成威〔48〕的研究結(jié)果顯示AD患者血清與腦脊液中含有抗膽堿能神經(jīng)元抗體，患者腦內(nèi)存在炎癥免疫反應(yīng)，并在老年斑中發(fā)現(xiàn)了多種補(bǔ)體成分，可見(jiàn)該AD患者所患疾病為自身免疫性疾病。羅秀梅等〔49〕建立了大鼠側(cè)腦室注射免疫毒素192-IgG-Saporin AD模型，Y迷宮檢測(cè)和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黃遞酶(NADPH-d)組織化學(xué)法染色分析結(jié)果顯示，造模后的大鼠學(xué)習(xí)、記憶能力明顯損害，基底前腦內(nèi)側(cè)隔核和斜角帶垂直支一氧化氮合酶(NOS)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)明顯減少，基底前腦的膽堿能細(xì)胞選擇性地嚴(yán)重破壞，細(xì)胞周長(zhǎng)和面積降低，灰度值升高等典型癥狀，進(jìn)一步證實(shí)自身膽堿能神經(jīng)元抗體誘導(dǎo)膽堿能神經(jīng)元損傷的可能。

3.2.5其他化學(xué)方法致膽堿能神經(jīng)損傷造AD模型 除了以上常用化學(xué)毒性藥物進(jìn)行膽堿能損傷造模以外，還有學(xué)者采用乙基膽堿氮芥丙啶(AF64A)、白喉毒素、免疫毒素192-IgG-Saporin等進(jìn)行損害大腦膽堿能神經(jīng)元進(jìn)行AD造模。如Fisher等〔50〕發(fā)現(xiàn)AF64A可誘導(dǎo)大鼠大腦皮層與海馬組織的膽堿能神經(jīng)持續(xù)性損害，于是直接將AF64A注射入大鼠背側(cè)海馬，發(fā)現(xiàn)該方法引起的損傷與認(rèn)知功能長(zhǎng)期損害呈相同改變；也有研究在小腦室內(nèi)注射AF64A，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大腦皮層與海馬組織內(nèi)的高親和力膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)(HAChT)呈非競(jìng)爭(zhēng)性最大速率的下降，而紋狀體不受此干擾。Kudo等〔51〕也選擇將白喉毒素與神經(jīng)生長(zhǎng)因子結(jié)合形成白喉-神經(jīng)生長(zhǎng)因子結(jié)合毒素，通過(guò)神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體介導(dǎo)的入胞作用，輸注入大鼠大腦皮質(zhì)，避開(kāi)非膽堿能神經(jīng)元及周?chē)窠?jīng)纖維選擇性損傷前腦基底核的膽堿能神經(jīng)元。

綜上，AD發(fā)病率呈逐年遞增，且年輕化趨勢(shì)明顯，因此，針對(duì)AD發(fā)病機(jī)制的研究探索刻不容緩。ACh在調(diào)節(jié)突觸的可塑性方面起關(guān)鍵作用，可參與調(diào)節(jié)海馬及皮層的神經(jīng)元活動(dòng)，因此，針對(duì)膽堿能神經(jīng)損傷類(lèi)方法進(jìn)行AD造模是一種病理模仿過(guò)程，在AD研究中占據(jù)重要的地位。但由于這類(lèi)損傷膽堿能神經(jīng)元AD模型，重點(diǎn)在于復(fù)制AD膽堿能功能減退和認(rèn)知功能障礙、記憶功能損害為主要特征的病理性改變，但難以出現(xiàn)AD的典型性病理特征老年斑和神經(jīng)纖維纏結(jié)。因此，該類(lèi)造模方法常可用于評(píng)價(jià)藥物對(duì)AD樣膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)損害及其學(xué)習(xí)記憶與認(rèn)知功能障礙的改善作用。