金線蓮生藥鑒定、活性成分影響因素及藥理作用研究進展

陳育青 林藝華 鄒毅輝 田惠橋 林美珍*

（1.漳州衛(wèi)生職業(yè)學院， 福建漳州363000； 2.廈門大學生命科學學院， 福建廈門361005）

金線蓮基原植物為蘭科金線蘭Anoectochilus roxburghii（wall） Lind1.，別名“花葉開唇蘭” “虎頭蕉” “鳥人參”“金石松” “金不換” 等，主要分布在福建、廣西、云南、臺灣等地，據(jù)李時珍《本草綱目》 記載，金線蓮全草均可入藥，性平、味甘，具有清熱涼血、祛風利濕、平衡陰陽、扶正固本、生津養(yǎng)顏、潤肺止咳、消腫解毒、止血降壓、強心利尿等功效，享有“藥王” “神藥” 之美稱［1］。金線蓮含有多種生物活性成分，鑒于金線蓮具有地方傳統(tǒng)食用藥用習慣，通過國家衛(wèi)生健康委員會公眾查詢系統(tǒng)得知，金線蓮按照地方特色食品管理；由于金線蓮可減少自由基對細胞的損傷，在2020 年伊始，金線蓮被列為新型冠狀病毒肺炎中醫(yī)藥防治儲備藥物。金線蓮在民間廣為使用，是具有較高經濟價值的藥食兩用植物。人們對金線蓮的研究做了大量工作［2］，查閱中國知網，近10 年有關金線蓮研究的文獻達1 219 篇，同時，查閱PubMed 數(shù)據(jù)庫，報道文獻達52 篇。本文主要從金線蓮的生藥鑒定、活性成分影響因素、藥理作用研究進展進行綜述，旨在為進一步開發(fā)金線蓮資源提供依據(jù)。

1 生藥鑒定

中草藥鑒定是保證中草藥質量標準、用藥安全有效、開發(fā)和發(fā)展中草藥資源的基礎，包括基源鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定等，隨著生物技術的發(fā)展，分子鑒定突顯其獨特的優(yōu)勢。

1.1 基源鑒定 金線蓮基原植物為金線蘭A.roxburghii，始載于《中藥大辭典》，其中的拉丁文、植物形態(tài)特征描述、原植物墨線圖與《中國植物志》 《福建植物志》 的載錄一致［1］。區(qū)別植物種的主要特征為，葉面具有金黃色的網狀葉脈；花冠唇瓣裂片狹條形，頸部兩側各具5～6 枚流蘇；唇瓣基部凹陷呈圓錐狀距，指向唇瓣。

金線蓮來源植物混雜，同名異物和同物異名的現(xiàn)象存在，同時金線蓮價格逐年飆升，一些藥商將蘭科植物開唇蘭屬AnoectochilusBL.中帶金黃色、黃色或黃白色網脈的種類以及齒唇蘭屬OdontochilusBl.、斑葉蘭屬GoodyeraR.Br.中外形近似種均當作金線蓮收購，還有一些地方將血葉蘭Ludisia discolorA.Rich.也當做金線蓮使用，加上近年來，國內不斷有金線蘭屬新種、新分布種的報導和金線蘭屬植物葉的形態(tài)多變，因此，金線蓮基原植物的鑒定應以花為主要特征。即有唇瓣，呈T 型或Y 型，唇瓣基部具有圓錐狀距，中部全緣或有乳突或流蘇或細齒，唇瓣向上或向下，以花的唇瓣特征來檢索物種，包括臺灣金線蘭、浙江金線蘭以及最近報道的乳突金線蘭Anoectochilus papillosusAver.等［3］，至于其他的斑葉蘭屬、齒唇蘭屬、血葉蘭屬的植物為混偽品。

1.2 顯微鑒定 鄭麗香等［3］資源調查并收集了全國各地的金線蓮栽培品種和野生混偽品，對31 批栽培金線蓮進行顯微制片、觀察，并將結果與野生品進行對比，發(fā)現(xiàn)二者顯微特征無明顯區(qū)別［1］。林美珍等［4］對野生金線蓮A.roxburghii與臺灣金線蓮A.formosanus顯微結構進行比較，其共同的顯微特征如下。

①根橫切面，表皮細胞多為1 層；皮層寬廣，可見草酸鈣針晶束和黏液多糖，內皮層凱氏點明顯；中柱維管束輻射型，髓部明顯。②根莖與莖橫切面，表皮細胞1 層；皮層寬廣，可見草酸鈣針晶束，內皮層可見凱氏點；中柱維管束外韌型、散生。③葉橫切面，上表皮細胞乳突狀突起；葉肉細胞分化不明顯；中脈維管束1 個，外韌型。④葉表皮制片，葉上下表皮細胞多邊形；可見直軸式、不等式及不定式氣孔，以3 或4 個副衛(wèi)細胞的不定式氣孔多見。⑤粉末制片，根毛成團或散在，呈螺旋狀；草酸鈣針晶束多見；葉表皮細胞可見乳突狀突起；螺紋、環(huán)紋的導管和管胞，偶見網紋［1，4］。

上述特征，特別是中柱維管束類型、髓部明顯與否、葉橫切面上表皮乳頭狀突起及草酸鈣針晶束和黏液多糖細胞等顯微特征可作為鑒定依據(jù)。

1.3 分子鑒定 越來越多學者采用生物分子技術對金線蓮進行鑒定，主要是利用分子標記技術進行種質資源鑒定和遺傳多樣性分析。一些學者采用RAPD 技術對同名異物“金線蓮” 包括不同產地、不同葉面特征、不同種質資源進行DNA 指紋圖譜鑒定，能夠區(qū)分金線蓮及其混偽品，而且能夠在種內水平上區(qū)分金線蓮不同品種及變種或變型［5］，可用于金線蓮資源鑒定。

有報道對文山地區(qū)野生的滇越金線蓮和3 種葉面特征不同的“金線蓮” 植物進行PAPD 指紋鑒別，結果這4 種材料為不同物種或不同變種或變型，因此分類上可根據(jù)其葉面性狀結合DNA 指紋圖譜作為鑒別特征［6］。梅瑜等［5］對32 份金線蓮種質資源的4 個DNA 條形碼基因進行PCR擴增及測序，最終從4 個DNA 條形碼候選序列中篩選出ITS 基因能夠快速而準確區(qū)分金線蓮及其混偽品，并在種內水平上區(qū)分不同品種。趙會賢等［7］采用ISSR?PCR 分子標記技術對福建省不同產地和不同生長環(huán)境的金線蓮進行鑒定，發(fā)現(xiàn)相同種類、相同產地的金線蓮無遺傳差異性。陳瑩等［8］對37 批不同來源金線蓮（組培、栽培、野生）及11 批近緣植物（臺灣金線蓮、血葉蘭） 指紋圖譜分析，結果表明臺灣金線蓮與野生金線蓮典型指紋圖譜相似度高，血葉蘭與野生金線蓮典型指紋圖譜明顯不同，可用于鑒別。

綜合金線蓮的分子鑒定、基源鑒定、顯微鑒定，結果表明金線蓮基原植物是蘭科金線蘭屬的金線蘭，其他同屬同名“金線蓮” 則有種間差異，包括臺灣金線蘭、浙江金線蘭、滇越金線蘭、海南金線蘭、峨眉金線蘭、恒春金線蘭、短唇金線蘭、興仁金線蘭、南丹金線蘭、高金線蘭、屏邊金線蘭、保亭金線蘭、乳突金線蘭等［3］。

2 活性成分影響因素

許多研究表明，金線蓮含有多糖、生物堿、甾體及其衍生物、黃酮類、強心苷類、揮發(fā)油、氨基酸、微量元素、有機酸等成分［9］，李榮峰［10］指出金線蓮所含的微量元素和氨基酸均高于國產人參，不同基原、栽培條件、生長時期、植物器官所含的活性成分不同，這為金線蓮的產業(yè)化生產和采收加工奠定研究基礎。

2.1 基原植物 多糖是金線蓮重要的活性成分之一，主要由6 種單糖組成，分別為葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、半乳糖、鼠李糖、甘露糖，其中半乳糖和葡萄糖占主導地位［11］；另一項研究通過柱前衍生HPLC 法測金線蓮多糖中的單糖組成，發(fā)現(xiàn)是由甘露糖、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖組成，但不同基原植物其單糖組分略有異同［12］。

龔秀會等［13］應用硫酸?蒽酮法和分光光度法對福建金線蓮A.roxburghii、臺灣金線蓮A.formosanus組培苗中的多糖、總黃酮含有量進行比較分析，結果臺灣金線蓮這二者含有量均較高，這與李丹丹等［14］的研究結果一致。何淑敏、張賽男等［15?16］研究表明臺灣金線蓮、云南大圓葉金線蓮、福建大葉金線蓮多糖含有量較高，湖南郴州金線蓮總黃酮含有量高。然而，張志信等［17］表明福建金線蓮總黃酮含有量較高，滇越金線蘭多糖含有量高。魏翠華等［18］對4個組培金線蓮品種進行氨基酸和多糖含有量測定，顯示不同品種金線蓮氨基酸、多糖含有量有差異。關璟等［19］測定福建金線蓮與云南金線蓮中黃酮類化合物母核類型，結果發(fā)現(xiàn)這二種金線蓮之間，黃酮苷元含有量及黃酮結構類型存在顯著差異。總之，不同物種導致其活性成分的差異。

2.2 藥用部位 在歷代本草中記載，金線蓮全草入藥，故較少學者分別對其根、莖、葉的化學成分進行對比研究，陳曉蘭等［20］采用微波?超聲協(xié)同萃取法提取不同產地金線蓮根莖和葉中多糖，結果表明根莖部的多糖含有量高于葉，這與林美珍等［21］采用植物組織化學方法定位不同基源金線蓮根、莖、葉中的多糖成分結果一致，根、莖中的多糖高于葉，葉僅含很少甚至不含多糖成分。李帥玲［11］以福建尖葉金線蓮為試驗材料，研究顯示金線蓮多糖主要積累在根部。許恩婷等［22］比較了金線蓮中黃酮和多酚含有量為葉高于全草高于莖高于根狀莖及根，其體外抗氧化實驗結果表明，葉中的多酚對自由基的清除能力顯著高于其他器官，這一結論可為金線蓮藥用部位的選擇與不同藥理功能的應用提供依據(jù)。

2.3 栽培因素 林方等［23］研究表明金線蓮野生苗和組培苗多糖、阿魏酸、天麻素含有量無顯著差異，但組培苗黃酮類以及初級代謝產物如氨基酸、有機酸、寡糖等組分含有量高于野生苗［24］；黃麗華等［25］報道金線蓮組培苗多糖含有量為栽培苗的3 倍；大棚栽培總黃酮含有量和多糖含有量低于林下栽培［26］。楊翠芹等［27］則表明4%蔗糖對金線蓮組培苗多糖積累最有利；1%蔗糖、繼代天數(shù)50 d 時，總生物堿的含有量最高；內生真菌可提高無菌苗多糖含有量［28］。福建金線蓮組培苗隨著移植至林下，多糖含有量明顯增高，但移植時間越長，多糖含有量反而降低；組培5個月，移植林下4 個月時多糖含有量最高［29］。這些研究可為篩選栽培方法和質量控制提供參考。

2.4 生長時間 金線蓮為多年生草本植物，開花期11 至12 月，應在種植4 個月開花前根和莖中的多糖含有量達到最高值時進行采收［11］。若為組培苗，從培養(yǎng)室生根壯苗培養(yǎng)5 個月時多糖含有量達最大值；而大棚移栽培植階段3個月后多糖含有量開始增長，應在3 個月后進行采收；高溫抑制金線蓮可溶性多糖累積，培植時應避開7 至8 月份的高溫天氣［30］。同時，金線蓮多糖含有量隨著栽培月齡的增加而降低，總黃酮含有量則隨著金線蓮栽培月齡增加而上升［31］。李惠華等［32］考察4～9 個月移栽月齡的廣西金線蓮多糖、多酚、黃酮含有量的變化，多糖含有量的變化趨勢為先下降后上升，近似“V” 字形，9 月齡與4 月齡無明顯差異，4 月齡含有量呈現(xiàn)最高值；多酚和總黃酮含有量均以6 月齡最高。這些研究可為金線蓮最佳采收時間提供依據(jù)。

3 藥理作用

金線蓮為珍稀瀕危的藥食同源植物，幾十年來，科學工作者開展了廣泛的研究，結果顯示金線蓮具有降血糖、保肝降脂、消除自由基、抗腫瘤、抗炎、提高免疫力等藥理作用，可為金線蓮的資源開發(fā)奠定研究基礎。

3.1 降血糖 Liu 等［33］發(fā)現(xiàn)，金線蓮苷可顯著增強鏈脲霉素誘導的糖尿病小鼠模型抗氧化能力，并降低血糖和膽固醇水平。金線蓮多糖可顯著激活天冬氨酸轉氨酶（AST）和丙氨酸轉氨酶（ALT），下調血糖濃度，并緩解糖尿病小鼠胰臟和肝臟的病理損傷［34］。張曉輝［35］報道金線蓮多糖具抗糖尿病活性，對氣陰兩虛型2 型糖尿病患者給予復方金線蓮膠囊治療，結果顯示金線蓮降血糖效果良好，養(yǎng)陰益氣，使糖尿病患者的臨床癥狀得到明顯改善［36］。

3.2 保肝降脂 金線蓮多糖能改善肝臟脂質代謝及修復脂肪肝病程內由于脂質積聚而導致的肝損傷，改善肝功能及肝臟脂肪變性，使肝細胞免受脂質過氧化及氧化應激的損傷，有效逆轉非酒精性脂肪肝病變［37］。金線蓮有抗乙型肝炎病毒（HBV） 活性，抑制轉染HBV 的細胞株分泌乙肝表面抗原（HBsAg） 和乙型肝炎E 抗原（HBeAg）［2］。劉政芳等［38］研究表明，復方金線蓮口服液聯(lián)合恩替卡韋治療慢性乙型肝炎具有顯著療效，可協(xié)同抗乙型肝炎病毒，顯示其在病毒性肝炎治療上的作用。這些可為金線蓮功能性產品的進一步開發(fā)和臨床應用提供科學依據(jù)。

3.3 清除自由基 馬利等［39］研究表明金線蓮乙醇提取物及其不同極性部位對DPPH 自由基、ABTS 自由基、羥基自由基有不同程度的清除作用；金線蓮中的黃酮對DPPH 自由基有很強的清除作用［19］；金線蓮多糖能顯著提高小鼠血清中的SOD 活性和GSH?Px 活性，降低血清中的MDA 含有量，從而抑制血清脂質過氧化物的生成，提高機體消除自由基的能力［11］。金線蓮多糖的羥自由基清除能力與多糖濃度成量效關系，并可延長線蟲壽命［40］。可見金線蓮多糖類化合物是一種很好的抗氧化劑，可作為天然抗衰老綠色食品，在天然抗氧化劑和醫(yī)藥保健領域具有廣闊的開發(fā)前景。

3.4 抗腫瘤 戴林東［41］從金線蓮中提取黃酮在體外對人肺癌A549 細胞具有一定的抑制作用，并與給藥濃度成正相關；黃酮、多糖提取物都能增強巨噬細胞的吞噬功能，并且能夠促進淋巴細胞的增殖，從而表現(xiàn)出抗腫瘤作用和提高免疫功能。金線蓮多糖對肝癌細胞（SMMC?7721）、宮頸癌細胞（Hela）、肺腺癌細胞（SPC?A1）、人乳腺癌細胞（BCAP37） 具有較好的殺傷效果［2］；也作用于人前列腺癌細胞（PC?3），可顯著抑制PC?3 細胞的增殖和生長，且具有劑量和時間依賴性，其機制可能與誘導凋亡基因caspase?3 表達有關［42］；也能顯著抑制食道癌［43］。這些研究可為金線蓮抗腫瘤作用的進一步研究提供依據(jù)。

3.5 抗炎提高免疫力 金線蓮多糖是可對抗小鼠結腸癌的一種免疫調節(jié)劑，并且具有免疫刺激作用［44］；其對小鼠免疫系統(tǒng)以及溶血素水平具有顯著影響，可明顯提高小鼠的免疫功能［15］，同時能減輕小鼠肝臟損傷后產生的炎癥［45］。Tseng 等［46］發(fā)現(xiàn)金線蓮水提物可激活巨噬細胞和T 細胞分泌細胞因子起到免疫監(jiān)視的作用；且有一定的鎮(zhèn)痛抗炎作用。Li 等［47］發(fā)現(xiàn)金線蓮多糖提取物可抑制P38 MAPK 信號通路激酶級聯(lián)反應，緩解炎癥反應和高葡萄糖誘導的腎損傷。以此表明金線蓮具有抗炎、提高免疫力的藥理作用。

4 問題與展望

近年來，隨著金線蓮野生資源的減少和藥理作用研究的深入，其價格逐年飆升，加上民間百年來對金線蓮功效的崇拜，已經成為我國珍稀瀕危植物，從而大量人工組培種植，但有關金線蓮的質量標準卻未見權威性出臺，開發(fā)的金線蓮產品未見臨床試驗及檢測標準，因此，金線蓮只能被列入新增新食品原料終止審查目錄。金線蓮至今尚未被收錄《中國藥典》，展望科研工作者在這些方面有所突破，以期為我國民間傳統(tǒng)中草藥文化傳承與發(fā)展做出努力。