藍(lán)莓花青素的提取及抗氧化性分析

摘要：本文借助正交試驗(yàn)以及單因素試驗(yàn)獲得提取藍(lán)莓花青素的最佳條件，分別是80%甲醇，1：10的料液比，80°C的溫度，30min的時(shí)間以及3.5的pH值。在濃縮提取物之后，借助聚酰胺樹脂純化從藍(lán)莓中提取出來的花青素，能夠獲得較高純度的樣品。純化完成后，測(cè)定所得花青素抗氧化性，經(jīng)由試驗(yàn)可知，其能夠有效清除DPPH自由基以及OH自由基。

關(guān)鍵詞：藍(lán)莓;花青素;提取;抗氧化性;甲醇

1.實(shí)驗(yàn)材料以及方法

1.1材料、儀器與試劑

采購(gòu)適量的市售藍(lán)莓漿果、紫外可見分光光度計(jì)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、酶標(biāo)儀、高速離心機(jī)以及花青素標(biāo)品。實(shí)驗(yàn)所用的分析純主要有乙醇、甲醇、香草醛以及鹽酸等。此外還會(huì)應(yīng)用Vc、聚酰胺吸附樹脂以及DPPH自由基等。

1.2預(yù)處理聚酰胺樹脂

向三角瓶中放適量聚酰胺樹脂，隨后加濃度為95%的乙醇（4倍體積）進(jìn)行浸泡，并且過夜放置，繼而將浸泡液清理掉，完成厚用濃度為95%的乙醇將其洗到洗滌液內(nèi)，并將3倍體積的水添加其中，直至不會(huì)有白色的渾濁物，最終用水進(jìn)行清洗，確保不再有醇的味道后進(jìn)行抽濾、抽干，處理后留下以備后用。

1.3藍(lán)莓預(yù)處理

選出一部分藍(lán)莓，在此過程中應(yīng)當(dāng)將破碎以及沒有成熟的藍(lán)莓處理掉，隨后把選好的樣品放到冰箱里（設(shè)置-20°C的溫度），等到實(shí)驗(yàn)需要的時(shí)候?qū)悠啡〕鰜?，取出之后?duì)其進(jìn)行搗碎，直至其呈現(xiàn)出勻漿的狀態(tài)。

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1配置試劑

以甲醇為主要溶劑配置有1∶1顯色劑體積的兩類試劑：第一種試劑為1%濃度的香草醛溶液，第二種試劑為8%濃度的鹽酸溶液，試劑都是在需要的時(shí)候進(jìn)行現(xiàn)配，隨后配置有0.1%濃度鹽酸以及濃度不同、pH值3.5甲醇混合液。

2.2提取藍(lán)莓花青素的主要程序

1.破碎藍(lán)莓鮮果;2.浸提甲醇;3.過濾;4.離心處理;5.獲得藍(lán)莓花青素的提取液;6.吸附聚酰胺樹脂;7.洗脫60%的乙醇;8.旋蒸處理;9.純化藍(lán)莓花青素;10.萃取石油醚;11.石油醚的回收處理;12.展開顯色研究。

2.3配置標(biāo)準(zhǔn)溶液、制作相應(yīng)曲線

以甲醇為主要溶劑對(duì)藍(lán)莓花青素的標(biāo)液進(jìn)行配制，標(biāo)液擁有1.2g/L的濃度。隨后移取1-5ml溶液五份，分別用甲醇溶劑進(jìn)行定容，最終定為10mL。完成定容之后，分別取出1mL溶液并且各自加入到顯色劑（5ml）當(dāng)中，將其搖勻，并進(jìn)行避光處理，隨即將其放入恒溫水浴當(dāng)中進(jìn)行30min的保溫處理，進(jìn)而將其放置到500nm的波長(zhǎng)當(dāng)中對(duì)吸光值進(jìn)行測(cè)定，最后對(duì)藍(lán)莓花青素標(biāo)液標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行繪制。

2.4藍(lán)莓花青素的提取率受提取條件的影響

選出藍(lán)莓5g，將其粉碎，隨后將適量鹽酸-甲醇混合液添加其中，并且在相應(yīng)溫度環(huán)境中進(jìn)行攪拌和提取，對(duì)提取液進(jìn)行30min離心處理，將上清液提取出來并利用聚酰胺樹脂對(duì)其進(jìn)行純化處理，最終展開研究。對(duì)藍(lán)莓花青素進(jìn)行提取的時(shí)候，要在超聲功率、料液比、浸提液的濃度、時(shí)間與溫度等都不同的條件下進(jìn)行，各做平行試驗(yàn)3個(gè)，對(duì)相應(yīng)提取率進(jìn)行考察。

2.5純化藍(lán)莓花青素

對(duì)花青素進(jìn)行提取、抽濾，所得提取液為紫紅色，隨后純化提取液，選用的洗脫劑是60%濃度的乙醇溶液，對(duì)樣品進(jìn)行采集。

2.6測(cè)定純度

定容提取液至100mL，借助標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)花青素濃度進(jìn)行計(jì)算，隨即將相應(yīng)質(zhì)量以及純度計(jì)算出來。

3.分析和探討

3.1確定最大的吸收波長(zhǎng)

在室溫環(huán)境下借助鹽酸-香草醛溶液對(duì)藍(lán)莓花青素的標(biāo)準(zhǔn)樣品展開避光處理，隨后于分光光度計(jì)當(dāng)中展開300-700nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的掃描，能夠獲得500nm的最大吸收波長(zhǎng)，其屬于藍(lán)莓花青素特征吸收的相應(yīng)波長(zhǎng)。

3.2開展單因素試驗(yàn)

香草醛和花青素產(chǎn)生反應(yīng)的最終產(chǎn)物，一旦受到光照便會(huì)呈現(xiàn)出不穩(wěn)定的狀態(tài)，所以在進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)的時(shí)候，檢測(cè)人員應(yīng)該進(jìn)行避光處理。

3.3確定最佳提取工藝條件

通過觀察試驗(yàn)以及方差分析的相應(yīng)結(jié)果可知，溫度有最大極差，由此可見，溫度對(duì)提取效果有較大影響，位列其后的分別為料液比、提取時(shí)間以及甲醇溶液的濃度。最終結(jié)合前文實(shí)驗(yàn)獲知，最佳提取條件為1∶10料液比、80°C提取溫度、30min提取時(shí)間以及80%濃度甲醇溶液，此時(shí)擁有高達(dá)4.4%的得率以及約86%的純度。

基金項(xiàng)目：

2019浙江經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院院級(jí)科研項(xiàng)目“不同采收期條斑紫菜中總硒含量調(diào)查研究”（編號(hào)：19YB09）;2020省屬高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目“藍(lán)莓中花青素類檢測(cè)關(guān)鍵技術(shù)研究與應(yīng)用”（編號(hào)：20KCTD01）

作者簡(jiǎn)介：

凌云（1982.1-），女，漢族，江蘇南通人，畢業(yè)于南京師范大學(xué)，碩士研究生，高級(jí)工程師，研究方向：食品質(zhì)量安全與營(yíng)養(yǎng)檢測(cè)。