銅錘白花膠囊安全性評價研究

付開聰 崔明筠 羅健 付麗紅 倪凱 高敏

【摘 要】目的：對民族藥銅錘白花膠囊進(jìn)行安全性評價研究。方法：采用長期灌胃毒性實驗，將實驗大鼠按照雌雄性別，隨機(jī)分成對照組和給藥組，給藥組給予不同劑量的銅錘白花膠囊，連續(xù)灌胃給藥13周，分別于給藥13周和停藥后4周時，檢測大鼠一般情況、血液學(xué)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)及內(nèi)臟系數(shù)，觀測其毒性癥狀。結(jié)果：以不同劑量的銅錘白花膠囊連續(xù)灌胃給藥13周，大鼠體重、血液學(xué)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo)及組織病理學(xué)未見明顯毒性反應(yīng)。結(jié)論：在長期毒性實驗條件下，銅錘白花膠囊對大鼠是安全的。

【關(guān)鍵詞】銅錘白花膠囊;長期毒理實驗;安全性評價

【中圖分類號】R285.5【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號】1007-8517（2019）20-0014-05

Abstract：Objective To evaluate the safety of TongchuiBaihua capsule. Method To employ the long term toxicity test，rats were randomly divided into blank control group and treatment group.Rats were given different doses of drugs，then observe its long term toxicity symptoms，to detected the general condition，blood indexes and blood biochemical parameters of rats after the 13 weeks treatment duration and at4 weeks after drug withdrawal.Result After 13 weeks of administration， There was no abnormal reaction between the treatment group and blank group in the test of long term toxicity.Conclusion This product can not cause any toxicity response to rats in long term toxicity test.

Keywords：TongchuiBaihua capsule; long term toxicity test; Safety evaluation

腰椎間盤突出癥是指腰椎間盤在受外力作用下，髓核從破裂處脫出，壓迫腰椎的神經(jīng)根，從而引起腰痛、下肢放射性疼痛和皮膚麻木、發(fā)涼、皮溫下降、小便刺痛等一系列臨床癥狀，該病在人群中較為常見，由于缺少有效的治療方法，一旦患上，將嚴(yán)重影響患者的正常生活[1-2]。為尋求有效的治療方法，普洱市民族傳統(tǒng)醫(yī)藥研究所從哈尼族民間挖掘到一劑特效驗方，后經(jīng)普洱市民族醫(yī)院研究開發(fā)成院內(nèi)制劑銅錘白花膠囊，該制劑經(jīng)臨床驗證對腰椎間盤突出癥及腰腿疼痛的病癥具有特殊功效[3]。

處方主要由民族藥小銅錘、白花丹和中藥細(xì)辛、三七、蜈蚣、蝎子等19味藥材組成，19味藥材君臣佐使搭配合理，相輔相成，增強(qiáng)療效，起到了療傷、止痛、疏通經(jīng)絡(luò)的作用。方中含有細(xì)辛、蜈蚣、全蝎和土鱉蟲等4味毒性藥材，該民族醫(yī)藥處方在普洱市民族醫(yī)院臨床使用超過5年，先后收集到125份臨床觀察病例，患者未出現(xiàn)過臨床不良反應(yīng)，為進(jìn)一步探究銅錘白花膠囊的安全性，普洱市民族醫(yī)院聯(lián)合云南省中醫(yī)中藥研究院，開展了銅錘白花膠囊對大鼠的長期毒性實驗研究，為民族醫(yī)藥制劑銅錘白花膠囊臨床安全應(yīng)用，提供了參考依據(jù)。

1 實驗儀器、材料及動物

1.1 儀器 SQP型電子分析天平（德國賽多利斯）;小鼠灌胃器[東西儀（北京）科技有限公司];RM2235切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司）;SYSMEX XT-1800i全自動動物血液分析儀（日本希森美康公司）;Qlympus Au5400全自動生化分析儀（日本奧林巴斯有限公司）。

1.2 材料 銅錘白花膠囊，每粒裝0.45g（普洱市民族傳統(tǒng)醫(yī)藥研究所，1次5粒，1日3次，日服用量為13.65g;飲用水（昆明珍茗食品有限責(zé)任公司）;試劑盒（南京建成生物工程研究所）;鼠料和玉米芯墊料（蘇州雙獅實驗動物飼料科技有限公司）。

1.3 動物體重范圍 60～80 g 的SPF級大鼠162只，雌雄各半，由湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司提供。

2 方法

2.1 動物分組和給藥 采用分層分組法，對162只大鼠，隨機(jī)分為飲用水對照組、銅錘白花膠囊低（3g·kg-1·d-1）、中（6g·kg-1·d-1）、高（12g·kg-1·d-1）劑量組共4組，除對照組30只外，銅錘白花膠囊組每組44只，雌雄各半。連續(xù)灌胃銅錘白花膠囊3個月，依照雌雄各半，第13周隨機(jī)抽取20只對照組大鼠，銅錘白花膠囊給藥組大鼠每組抽取26只，實施剖檢。

2.2 觀察指標(biāo)

2.2.1 一般情況 每天觀察對照組和銅錘白花膠囊給藥組大鼠的一般狀態(tài)，每周1次體重和耗料量測定，停藥4周后剖檢剩余動物。觀察銅錘白花膠囊給藥期間和給藥后恢復(fù)期大鼠的毒性反應(yīng)，每周稱量1次大鼠體重和平均進(jìn)食量，每只動物每周攝食量以平均值記。

2.2.2 血液檢查 給藥結(jié)束后和恢復(fù)期結(jié)束，測定對照組和銅錘白花膠囊給藥組大鼠的血紅蛋白含量、紅細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞平均體積、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度、血小板數(shù)及白細(xì)胞計數(shù)等指標(biāo)。

2.2.3 血液生化指標(biāo) 給藥結(jié)束后和恢復(fù)期結(jié)束，測定對照組和銅錘白花膠囊給藥組大鼠的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、總膽紅素等肝功指標(biāo)，尿素等腎功指標(biāo)，葡萄糖膽固醇等生化指標(biāo)。

2.2.4 病理學(xué)檢查 給藥結(jié)束后和恢復(fù)期結(jié)束，剖檢對照組和銅錘白花膠囊給藥組大鼠，觀察雌雄大鼠的肝肺腎等主要器官的濕重，計算臟器系數(shù);并用10%中性福爾馬林液對大鼠臟器做固定處理，再對其進(jìn)行石蠟包埋切片，鏡檢。

2.2.5 數(shù)據(jù)處理方法 數(shù)據(jù)用SPSS軟件16.0處理，計量資料符合正態(tài)分布，方差齊者采用T檢驗，方差不齊采用T′檢驗;計量資料不符合正態(tài)分布，采用秩和檢驗，各組與對照組進(jìn)行比較，P<0.05表示數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 實驗結(jié)果

3.1 對一般情況的影響 實驗期間，對照組和銅錘白花膠囊給藥組大鼠未監(jiān)測到大鼠異常行為，精神狀態(tài)和飲食活動正常。給藥結(jié)束與恢復(fù)期結(jié)束，銅銅錘白花膠囊組進(jìn)食量與飲用水空白對照組比較，進(jìn)食量稍微減少，但不存在顯著性差異（P>0.05）屬于正常范疇，見表1。錘白花膠囊低、中、高劑量組雌雄動物體重與對照組比較出現(xiàn)動物體重增長緩慢，但在恢復(fù)期攝食量和體重增長恢復(fù)正常。見表2。

3.2 血液學(xué)檢查 由表3可知，灌胃13周結(jié)束時，銅錘白花膠囊組大鼠白細(xì)胞、血紅蛋白計數(shù)和活化部分凝血活酶時間，與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P>0.05）;其余銅錘白花組血液學(xué)檢查指標(biāo)和對照組比較可見統(tǒng)計學(xué)意義的增加或減少，銅錘白花膠囊劑量組大鼠的血液學(xué)指標(biāo)，未見明顯劑量時間依賴關(guān)系，綜合上述結(jié)果，故認(rèn)為是由動物個體差異所致[4-5];恢復(fù)期結(jié)束，各劑量組動物血液學(xué)指標(biāo)與對照組比較未見統(tǒng)計學(xué)差異。因此連續(xù)灌胃給予銅錘白花膠囊不會影響大鼠的血液學(xué)指標(biāo)。

3.3 血清生化學(xué)檢查 由表4可知，灌胃13周結(jié)束時，銅錘白花膠囊組大鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血糖、尿素、肌酐、與空白對照組比較不存在顯著性差異，無統(tǒng)計學(xué)意義 （P>0.05）;銅錘白花膠囊組大鼠總膽紅素、總蛋白、總膽固醇值和和空白對照組比較可見統(tǒng)計學(xué)意義的增加或降低;恢復(fù)期結(jié)束，錘白花膠囊組大鼠總膽紅素、總蛋白、總膽固醇值和空白對照組比較未見顯著性增加或降低，大鼠血清生化學(xué)指標(biāo)和銅錘白花膠囊灌胃劑量未形成明顯量效關(guān)系，考慮認(rèn)為是由動物個體差異所致出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異，未構(gòu)成毒理學(xué)意義，說明指標(biāo)的變化不是由藥物毒性反應(yīng)引起的[6-7]。

3.4 臟器系數(shù)和臟器病理組織學(xué)檢查 給藥結(jié)束后和恢復(fù)期結(jié)束胃、腦、十二指腸、骨骼肌、睪丸、附睪、子宮、卵巢、前列腺、腎上腺、甲狀腺、食管、主動脈、膀胱、胸腺、皮膚、骨髓、脊髓、氣管、心、脾、腸系膜淋巴等器官組織未觀察到與受試物有關(guān)的改變。

由表5～6的數(shù)據(jù)分析，結(jié)合對照組和銅錘白花膠囊組大鼠器官濕重、體重、病理結(jié)果和臟體比系數(shù)的變化進(jìn)行分析，給藥結(jié)束時，與對照組比較，銅錘白花膠囊組大鼠臟體比系數(shù)均增加或降低的生物學(xué)意義較大，但缺少劑量和時間依賴性，且器官組織未觀察到與受試物有關(guān)的改變，說明臟器指標(biāo)的變化可能不是藥物特異性毒性損傷;恢復(fù)期結(jié)束，雌性大鼠臟體比系數(shù)無明顯變化，雄性大鼠肝腦腎臟體比系數(shù)升高，結(jié)合大鼠尿液檢查、病理組織檢查，可視為不是毒性靶器官[8]。

4 討論

長期毒性試驗是藥物臨床前安全性評價采取的主要研究方法，文中研究試驗，通過將銅錘白花膠囊按照臨床用藥途徑大劑量重復(fù)多次給予動物，密切檢測動物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和中毒靶組織器官，獲得毒性產(chǎn)生的量效和時效關(guān)系，預(yù)測了銅錘白花膠囊在臨床上可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)性質(zhì)及發(fā)生率，對銅錘白花膠囊的臨床應(yīng)用具有重要的參考意義。

銅錘白花膠囊對大鼠長期毒性實驗結(jié)果顯示，給藥期與恢復(fù)期結(jié)束時，銅錘白花膠囊低、中、高劑量組大鼠一般狀況良好，其活動，飲食，飲水正常，與對照組比較體重部分時期增長緩慢，但在恢復(fù)期攝食量和體重增長恢復(fù)正常，其它各項臨床檢驗未見與銅錘白花膠囊灌胃劑量形成明顯量效關(guān)系，且銅錘白花膠囊組大鼠各器官組織均未觀察到與給藥明顯相關(guān)的組織形態(tài)學(xué)改變，綜合以上研究數(shù)據(jù)說明在長期毒性實驗條件下，銅錘白花膠囊對大鼠是安全的，為民族藥銅錘白花膠囊的臨床應(yīng)用提供了安全性評價依據(jù)。

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（收稿日期：2019-07-10 編輯：劉斌）