天然產(chǎn)物安全性評(píng)價(jià)研究方法

黃秀麗++徐紅艷

摘要：安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)被用于天然產(chǎn)物的開(kāi)發(fā)研究，主要包括4個(gè)階段試驗(yàn)。文章綜述了目前我國(guó)在天然產(chǎn)物安全性評(píng)價(jià)中采用的主要方法，并列舉了這些方法在科學(xué)研究與實(shí)際中的應(yīng)用及取得的良好效果。

關(guān)鍵詞：天然產(chǎn)物；安全性評(píng)價(jià)；方法與應(yīng)用

中圖分類號(hào)：S-3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A DOI編號(hào)： 10.14025/j.cnki.jlny.2014.20.0016

隨著人們營(yíng)養(yǎng)、健康和安全意識(shí)的不斷提升，對(duì)天然的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和藥物的需求量不斷加大，為了最大限度地發(fā)揮天然化學(xué)物的效益，又不致對(duì)人類的健康造成影響，于是安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)被用于天然產(chǎn)物的開(kāi)發(fā)研究中。根據(jù)我國(guó)的《安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》，安全性評(píng)價(jià)主要包括4個(gè)階段試驗(yàn)。

1 急性毒性試驗(yàn)

急性毒性試驗(yàn)主要用于確定測(cè)試化學(xué)物的毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能作用的靶器官，為進(jìn)一步毒性試驗(yàn)的劑量選擇提供依據(jù)。常采用經(jīng)口染毒測(cè)定LD50值，若劑量達(dá)到10克/公斤體重仍然不引起受試動(dòng)物死亡，則不必繼續(xù)測(cè)定。王東升等[1]按改良的寇氏法確定白術(shù)提取液小鼠腹腔注射和肌肉注射的1日最大給藥量分別為100克/公斤和20克/公斤，分別相當(dāng)于臨床日用量的400倍和80倍。表明白術(shù)提取液較為安全，可在臨床研究試用。孫蕾等[2]采用Horn實(shí)驗(yàn)法，經(jīng)口給藥，測(cè)定黑松和赤松花粉的LD50值均大于10克/公斤，確定為無(wú)毒物質(zhì)。

2 蓄積毒性突變?cè)囼?yàn)

蓄積毒性試驗(yàn)以20天喂養(yǎng)試驗(yàn)中1/20 LD50組出現(xiàn)動(dòng)物死亡，且存在劑量—反應(yīng)關(guān)系為強(qiáng)蓄積性；若無(wú)動(dòng)物死亡，則為弱蓄積性。當(dāng)急性毒性試驗(yàn)的LD50值大于10克/公斤體重時(shí)，則不必進(jìn)行蓄積毒性試驗(yàn)。致突變?cè)囼?yàn)是對(duì)受試化學(xué)物是否具有遺傳毒性進(jìn)行篩選，主要有Ames試驗(yàn)或枯草桿菌試驗(yàn)、骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和精子畸形試驗(yàn)。

關(guān)于微核的首次觀察可追朔到19世紀(jì)末20世紀(jì)初，微核評(píng)估與胞質(zhì)分裂阻滯技術(shù)的結(jié)合，為評(píng)價(jià)已分裂細(xì)胞中的微核提供了一種有力的生物學(xué)方法。由于多倍體只增加染色體分離錯(cuò)誤，而滯后的染色體會(huì)被核膜包裹并形成微核，于是檢測(cè)微核中的染色粒和著絲粒就可以有效地對(duì)遺傳毒性因子進(jìn)行分類，如多倍體或是誘變劑[3]，并且可以鑒別誘導(dǎo)微核的機(jī)制。Saleh等[4]研究發(fā)現(xiàn)，大鼠灌胃5天殺蟲(chóng)環(huán)，不引起骨髓細(xì)胞微核數(shù)的顯著增加，無(wú)遺傳毒性。孫蕾等[6，7]采用微核試驗(yàn)、Ames試驗(yàn)和精子畸形試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)赤松和黑松花粉對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞未見(jiàn)明顯致突變作用，無(wú)誘發(fā)菌株基因變化作用，不引起小鼠精子畸形，確定兩種松花粉為安全食品。來(lái)偉旗等[5]采用Ames試驗(yàn)研究銀杏葉提取物A（銀杏葉干品）、B（黃酮含量>24%的淡黃色粉末）、C（黃酮含量>40%的淡黃色粉末）的致突變性，結(jié)果表明A不引起TA97a、TA98、TA100和TA102四種菌株回變菌落數(shù)增加，B和C誘發(fā)TA97a和TA98兩種菌株回變菌落數(shù)增加，結(jié)果為陽(yáng)性，提示銀杏葉提取物B和C中含有致移碼突變物質(zhì)。

3 亞慢性毒性試驗(yàn)

亞慢性毒性試驗(yàn)包括90天喂養(yǎng)試驗(yàn)、繁殖試驗(yàn)和致畸試驗(yàn)。是為了觀察對(duì)受試動(dòng)物的毒性作用性質(zhì)、作用的靶器官、繁殖功能的影響和對(duì)子代的致畸作用。Lu等[6]采用90天喂養(yǎng)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)竹葉抗氧化物不誘發(fā)SD大鼠血液指標(biāo)、臨床癥狀及組織病理學(xué)的改變，結(jié)合急性毒性試驗(yàn)和突變?cè)囼?yàn)結(jié)果，確定竹葉抗氧化物可作為食品添加劑安全使用。并通過(guò)傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)和繁殖試驗(yàn)[7]，發(fā)現(xiàn)竹葉抗氧化物對(duì)SD大鼠的繁殖沒(méi)有影響，且未見(jiàn)任何胚胎毒性變化和致畸效應(yīng)。證明了竹葉抗氧化物的安全性。

4 慢性毒性試驗(yàn)

慢性毒性試驗(yàn)是用于發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期接受受試化學(xué)物而可能出現(xiàn)的毒性作用，尤其是那些進(jìn)行性或不可逆的毒性作用以及致癌作用。研究中一般將兩年毒性試驗(yàn)和致癌試驗(yàn)結(jié)合在一個(gè)試驗(yàn)中。Hagiwara等[8]研究發(fā)現(xiàn)，小鼠連續(xù)飲用96周1.25%和5%的焦糖溶液后，血液中白細(xì)胞的數(shù)量隨劑量的增加而增加，但未呈現(xiàn)顯著性差異。臨床癥狀、體重及臟器重量、尿檢分析和組織學(xué)特征均未出現(xiàn)與作用效果相關(guān)的表現(xiàn)，表明5%以下的焦糖溶液對(duì)小鼠無(wú)致癌作用。

毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)是目前被廣為認(rèn)可并得到應(yīng)用的方法。其中經(jīng)口染毒求LD50值是急性毒性試驗(yàn)的常規(guī)方法。Ames試驗(yàn)是致突變?cè)囼?yàn)的主要檢測(cè)項(xiàng)目，主要用于分析體外遺傳突變。骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)是從體內(nèi)角度檢測(cè)外源化學(xué)物對(duì)遺傳物質(zhì)的影響，進(jìn)行誘變劑的篩選[9]，進(jìn)而初步判定天然產(chǎn)物的安全性。隨著國(guó)家對(duì)天然產(chǎn)物安全性管理的重視，以及百姓認(rèn)識(shí)的不斷提高，毒理學(xué)安全生評(píng)價(jià)方法必將得到更廣泛的應(yīng)用，并會(huì)對(duì)促進(jìn)人類健康發(fā)揮更大的作用。

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作者簡(jiǎn)介：黃秀麗，延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)專業(yè)，學(xué)生，研究方向：天然產(chǎn)物活性、功能性食品與食品安全。

通訊作者：徐紅艷，博士，延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)專業(yè)，講師，研究方向：天然產(chǎn)物活性、功能性食品與食品安全