吳福林,董慶海,王涵,譚靜,林紅強(qiáng),李平亞,楊娜
(吉林大學(xué)藥學(xué)院,長(zhǎng)春 130021)
止痛化癥膠囊為硬膠囊,內(nèi)容物為棕褐色和黑褐色顆粒,氣微香,味苦、微咸。由黨參等19 味藥物組成,其中黨參、炙黃芪補(bǔ)血益氣[1],具有免疫調(diào)節(jié)[2]和抗炎[3]作用;白術(shù)、山藥、芡實(shí)補(bǔ)益脾胃、益腎氣[4-6];當(dāng)歸、丹參、雞血藤具有活血補(bǔ)血、調(diào)經(jīng)止痛、舒經(jīng)活絡(luò)[7]、促進(jìn)微血管內(nèi)皮細(xì)胞和微血管增殖的作用[8];三棱、莪術(shù)行氣破血、消積止痛,具有較好的調(diào)節(jié)內(nèi)分泌激素水平[9]、抗血栓、抗炎、抗纖維組織增生等作用;延胡索、川楝子疏肝理氣、鎮(zhèn)痛抗炎[10],又有類(lèi)激素樣作用,能緩解一系列圍絕經(jīng)期癥狀;諸蟲(chóng)類(lèi)藥攻竄通絡(luò)、活血止痛;姜、肉桂散寒止痛、活血通經(jīng)。全方補(bǔ)中有消、攻中有補(bǔ),標(biāo)本兼治、攻補(bǔ)兼施,扶正不留瘀、祛瘀不傷正,共奏軟堅(jiān)散結(jié)、祛瘀止痛之效[11]。
電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)是檢測(cè)無(wú)機(jī)元素含量的主要分析技術(shù)之一,具有檢出限低、準(zhǔn)確性及重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),在食品檢測(cè)及藥學(xué)等方面得到了廣泛的應(yīng)用[12]。本研究首次利用ICP-MS法同時(shí)測(cè)定了止痛化癥膠囊中48種無(wú)機(jī)元素的含量,從元素角度分析藥效的物質(zhì)基礎(chǔ),為該藥物的進(jìn)一步研究提供科學(xué)依據(jù)。
AL104型電子天平(瑞士Mettler Toledo公司);Milli-Q超純水機(jī)(美國(guó)Millipore公司);FW177型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(北京市永光明醫(yī)療儀器廠);7500a型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(美國(guó)Agilent公司)。
銦(In)、銠(Rh)單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(50 mg/L);鋰(Li)、鈹(Be)、硼(B)、鈧(Sc)、鈦(Ti)、釩(V)、鉻(Cr)、錳(Mn)、鈷(Co)、鎳(Ni)、銅(Cu)、鋅(Zn)、鎵(Ga)、鍺(Ge)、砷(As)、硒(Se)、銣(Rb)、鍶(Sr)、釔(Y)、鋯(Zr)、鈮(Nb)、鉬(Mo)、銀(Ag)、鎘(Cd)、錫(Sn)、銻(Sb)、銫(Cs)、鋇(Ba)、鑭(La)、鈰(Ce)、鐠(Pr)、釹(Nd)、釤(Sm)、銪(Eu)、釓(Gd)、鋱(Tb)、鏑(Dy)、鈥(Ho)、鉺(Er)、銩(Tm)、鐿(Yb)、镥(Lu)、鉭(Ta)、鎢(W)、汞(Hg)、鉈(Tl)、鉛(Pb)、鉍(Bi)標(biāo)準(zhǔn)溶液(10 mg/L,);Li、Y、Co、Bi質(zhì)譜調(diào)諧液(10 mg/L)(美國(guó)安捷倫公司);硝酸(優(yōu)級(jí)純,=1.42 g/mL)、氫氟酸(色譜純)(賽默飛世爾公司);超純水(18.2 MΩ/cm,美國(guó)Millipore公司)。試驗(yàn)用器皿均用10%硝酸浸泡過(guò)夜,用超純水沖洗后備用。本實(shí)驗(yàn)所用各種酸均經(jīng)亞沸騰二次蒸餾后使用。
止痛化癥膠囊由吉林金寶藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn),規(guī)格0.3 g/粒,國(guó)藥準(zhǔn)字Z22020845,產(chǎn)品批號(hào)160701、160904、161003,分別編號(hào)為 S1、S2、S3。
用Li、Y、Co、Bi調(diào)諧液篩選出最優(yōu)工作條件,使儀器參數(shù)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn),儀器射頻(RF)發(fā)射功率為1350W,載氣流速1.12 L/min,冷卻氣流速13.0 L/min,等離子體氣速15.0L/min,氧化物指標(biāo)(CeO+/Ce)及雙電荷指標(biāo)(Ba2+/Ba+)分別小于0.5%和1.0%,采取錐孔徑1.0mm,霧化室溫度2℃,采樣深度7.0mm,截取錐孔徑0.4mm,蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速0.1 r/s。
2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 將48種待測(cè)元素精密吸取適量,分別進(jìn)行稀釋?zhuān)渲瞥少|(zhì)量濃度為10mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。取各標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,用3%HNO3溶液逐級(jí)稀釋?zhuān)瑢、Sc、Ti、Ge、Y、Zr、Nb、Mo、Ag、La、Ce、Pr、Nd、Sm、W的標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成濃度分別為5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0ug/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液;將 Li、Be、V、Cr、Mn、Co、Ni、Cu、Zn、Ga、As、Se、Rb、Sr、Cd、Sn、Sb、Cs、Ba、Hg、Pb、Bi的標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成濃度分別為10.0、30.0、60.0、120.0、250.0、500.0ug/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液;Eu的標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成濃度分別為2.0、4.0、8.0、15.0、30.0、50.0ug/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液;Gd、Dy的標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成濃度分別為 0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、10.0ug/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液;Tb、Ho、Er、Tm、Yb、Lu、Ta、Tl的標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成濃度分別為 0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0ug/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2.2.2 供試品溶液的制備[13]精密稱(chēng)取止痛化癥膠囊內(nèi)容物0.2g置于5.0mL溶樣彈中,依次加入1.0mL硝酸和0.5mL雙氧水(30%)后混合均勻,將溶樣彈放在120℃的電熱板上加熱,當(dāng)樣品液體蒸發(fā)到濕鹽狀時(shí),依次加入1.4mL氫氟酸和1.6 mL硝酸,密閉后放入190℃干燥箱中恒溫48 h后。使其自然冷卻至室溫溫度,再將溶樣彈置于電熱板上繼續(xù)蒸至濕鹽狀,冷卻后加入50%硝酸3.0mL,密閉溶樣彈,再放入150℃干燥箱中恒溫12h。冷卻后用高純水對(duì)樣品進(jìn)行消解后,把液體轉(zhuǎn)移至聚氯乙烯樣品瓶中定容至50mL,搖勻備用。同種方法制備空白溶液。
2.2.3 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密適量吸取In、Rh標(biāo)準(zhǔn)溶液置于容量瓶中,用3%HNO3溶液稀釋?zhuān)渲瞥?u g/L的內(nèi)標(biāo)溶液。
2.3.1 線性關(guān)系 按照“2.1”項(xiàng)下工作參數(shù)對(duì)配制的不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè),以混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度(C,ug/L)為橫坐標(biāo)、測(cè)量值與內(nèi)標(biāo)測(cè)量值之間的比值(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出各元素的相關(guān)系數(shù),并給出線性方程,結(jié)果見(jiàn)表1。
2.3.2 檢測(cè)限與定量限 精密吸取3%HNO3空白溶液適量,在“2.1”項(xiàng)下工作參數(shù)下連續(xù)測(cè)定11次,將檢測(cè)出元素信號(hào)響應(yīng)值的3 倍標(biāo)準(zhǔn)偏差(3σ)所對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度為各個(gè)元素的儀器檢出限,以連續(xù)測(cè)定空白對(duì)照溶液信號(hào)響應(yīng)值的10 倍標(biāo)準(zhǔn)偏差(10σ)為定量限,結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 各元素的線性方程、檢測(cè)限、定量限Table 1 Linear equation,detection limit and limit of quantitation of each element
2.3.3 精密度試驗(yàn) 取止痛化癥膠囊粉末(樣品S1)0.1 g,按“2.2.2”項(xiàng)下制備方法制備供試品溶液,將樣品溶液平行測(cè)定6 次,測(cè)定各元素的含量,并計(jì)算各元素RSD,結(jié)果發(fā)現(xiàn),RSD 均小于4.69%,說(shuō)明該方法精密度良好
2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取止痛化癥膠囊粉末(樣品S1)0.1 g,按照“2.2.2”項(xiàng)下制備方法,將其平行制備6 份供試品溶液,測(cè)定各元素含量,計(jì)算各元素RSD,結(jié)果發(fā)現(xiàn),RSD 均小于4.93%,表明重復(fù)性良好。
2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取止痛化癥膠囊粉末(樣品S1)0.1 g,按照“2.2.2”項(xiàng)下制備方法制備供試品溶液,分別在 0、2、4、8、12、24 h 按照“2.1”工作參數(shù)依次進(jìn)樣,測(cè)定各元素的含量,并且計(jì)算各元素RSD,結(jié)果發(fā)現(xiàn),RSD 均小于4.44%,表明在24 h 內(nèi)樣品穩(wěn)定性良好。
2.3.6 加樣回收試驗(yàn) 精密稱(chēng)取止痛化癥膠囊粉末(樣品S1)0.2 g,精密稱(chēng)定,分別加入適量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,按“2.2.2”項(xiàng)下的方法平行制備6 份,測(cè)定各元素含量,計(jì)算回收率,見(jiàn)表2。
表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Sample recovery test results (n=6)
續(xù)表2
按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備止痛化癥膠囊(樣品S1、S2、S3)的供試品溶液,分別測(cè)定7Li、9Be、11B、45Sc、47Ti、51V、53Cr、55Mn、59Co、60Ni、65Cu、66Zn、71Ga、72Ge、75As、82Se、85Rb、88Sr、89Y、90Zr、93Nb、95Mo、107Ag、111Cd、118Sn、121Sb、133Cs、137Ba、139La、140Ce、141Pr、146Nd、147Sm、153Eu、157Gd、159Tb、163Dy、165Ho、166Er、169Tm、172Yb、175Lu、181Ta、182W、202Hg、205Tl、208Pb、209Bi 共48 種無(wú)機(jī)元素的含量,結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 樣品中無(wú)機(jī)元素含量測(cè)定結(jié)果Table 3 Determination of inorganic element content in the samples ( g/g)
無(wú)機(jī)元素在人體生命活動(dòng)中起關(guān)鍵作用,其中,Cu參與和維持機(jī)體的造血功能,通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞色素氧化酶的活性,促進(jìn)生物氧化為組織供氧[14]。有研究表明,鋇能夠?qū)?dòng)物生長(zhǎng)和存活有促進(jìn)作用,鋇具有解毒及維持肌肉興奮性的作用,也與視覺(jué)功能有關(guān)[15]。Mn可以維持血脂、血糖及血壓的正常[16],是體內(nèi)多種酶的組成成分或激活劑,促進(jìn)糖和脂肪代謝,具有維持骨骼發(fā)育及抗氧化等功能[17]。B 可調(diào)整影響Ca、Mg、P的代謝,可以增加骨密度,預(yù)防絕經(jīng)后婦女的骨質(zhì)疏松[18]。Cr、Co 可以明顯改善蛋白質(zhì)、糖和脂肪代謝[19-20]。Zn、Ni 元素在體內(nèi)參與多種酶的合成。Se、V 在預(yù)防心血管疾病中有著重要的作用[21,22]。綜上所述,無(wú)機(jī)元素是人體中必不可少的物質(zhì),發(fā)揮著重要生理作用。
本研究首次采用ICP-MS法測(cè)定了止痛化癥膠囊中的48 種無(wú)機(jī)元素含量,填補(bǔ)該藥品無(wú)機(jī)元素研究的空白。結(jié)果表明,止痛化癥膠囊中 Ba、Cu、Mn、B 等元素含量較高,其中,重金屬元素含量分別為Pb1.864ug/g、As 1.689ug/g、Cd 0.122ug/g、Hg 0.131ug/g,均低于2015 版藥典對(duì)于中藥材重金屬含量的限定(Pb5.0ug/g、As 2.0ug/g、Cd0.3ug/g、Hg 0.2ug/g)[27]。本方法檢出限低、準(zhǔn)確度好、精密度高,能同時(shí)檢測(cè)多元素,是一種測(cè)定中藥及其制劑無(wú)機(jī)元素的有效分析方法。