Box—Behnken響應(yīng)面法結(jié)合多指標(biāo)綜合評分法優(yōu)選柴胡安心膠囊的水提工藝

王玲嬌 郝玉佩 劉坤申 楊繼章 孫國祥 于靜

中圖分類號 R932；R283；R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2019）05-0632-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.05.11

摘 要 目的：優(yōu)化柴胡安心膠囊的水提工藝。方法：以提取液中沒食子酸、綠原酸、葛根素、大豆苷、蘆丁、肉桂酸、槲皮素的含量和出膏率的綜合評分值為考察指標(biāo)，以加液倍數(shù)、浸泡時間、回流時間、提取次數(shù)為因素，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上運(yùn)用Box-Behnken響應(yīng)面法對柴胡安心膠囊的水提工藝進(jìn)行優(yōu)化并進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果：最優(yōu)提取工藝為加11倍水、浸泡10 h，提取2次，每次回流1.5 h；驗(yàn)證試驗(yàn)中3批樣品提取后的綜合評分值（91.37%）與預(yù)測值（91.38%）相比較，相對誤差為1.87%（RSD<2%，n=3）。結(jié)論：優(yōu)選的提取工藝方法簡單、結(jié)果穩(wěn)定，可用于后續(xù)柴胡安心膠囊的制劑生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞 柴胡安心膠囊；有效成分；Box-Behnken響應(yīng)面法；多指標(biāo)；綜合評分；水提工藝；優(yōu)化

Optimization of Water Extraction Technology of Chaihu Anxin Capsules by Box-Behnken Response Surface Method Combined with Multi-index Comprehensive Scoring Method

WANG Lingjiao1，HAO Yupei1，LIU Kunshen2，YANG Jizhang1，SUN Guoxiang3，YU Jing1（1.Dept. of Pharmacy， the First Hospital of Hebei Medical University， Shijiazhuang 050031， China；2.Dept. of Cardiology， the First Hospital of Hebei Medical University， Shijiazhuang 050031， China；3.College of Pharmacy， Shenyang Pharmaceutical University， Shenyang 110016， China）

ABSTRACT OBJECTIVE： To optimize the water extraction technology of Chaihu anxin capsules. METHODS： Taking comprehensive scoring value of the contents of gallic acid，chlorogenic acid，puerarin，glycoside，rutin，cinnamic acid， quercetin and the yield of extract as investigation index， using multiple of adding liquid， soaking time， reflux time and extraction times as factors， water extraction technology of Chaihu anxin capsule was optimized by Box-Behnken response surface method based on single factor test. Validation test was conducted. RESULTS： The optimal extraction technology of Chaihu anxin capsules was adding 11 times of water， soaking for 10 h， extracting for 2 times， refluxing for 1.5 h each time. In validation test， the relative deviation of comprehensive scoring value to predicted value was 1.87% for 3 batches of samples （RSD<2%， n=3）. CONCLUSIONS： The optimal extraction technology is simple， stable and suitable for further production of Chaihu anxin capsules.

KEYWORDS Chaihu anxin capsules； Active ingredients； Box-Behnken response surface method；Multi-index； Comprehensive scoring； Water extraction technology； Optimization

柴胡安心膠囊為河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)處方制成的醫(yī)院制劑（批準(zhǔn)文號：冀藥制字Z20060013），主要由柴胡、葛根、白芍、桂枝、夏枯草等14味藥材組成，具有疏肝理氣、鎮(zhèn)靜安神、調(diào)和營衛(wèi)之功效，主治焦慮抑郁和心臟神經(jīng)官能癥[1]。在該制劑組方中，君藥為葛根，其可辛涼解肌、生津止渴，主要活性成分為葛根素、大豆苷等黃酮類化合物[2-3]，具有擴(kuò)張血管、降低血壓、改善微循環(huán)、保護(hù)心肌細(xì)胞、增加纖溶活性、降低血黏度等作用[4-5]。臣藥為白芍和桂枝，白芍可養(yǎng)血斂陰、柔肝止痛；桂枝可溫通經(jīng)脈、解表通陽；兩藥合用則可柔肝斂陰、益陽通脈、調(diào)和營衛(wèi)；其中白芍含有芍藥苷等單萜類成分和沒食子酸等成分[6-7]，具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、解痙、抗炎、抗?jié)?、調(diào)節(jié)免疫、擴(kuò)張血管、耐缺氧等作用；桂枝含有肉桂酸、桂皮醛等成分[8-9]，具有擴(kuò)張血管、抗氧化、降血脂等作用。佐藥夏枯草歸肝膽經(jīng)，可清利肝經(jīng)郁熱、升清降濁、散結(jié)消腫，主要成分為蘆丁、槲皮素、綠原酸等黃酮類化合物[10-11]，具有降壓、抗抑郁的作用。本研究根據(jù)處方中各藥材有效成分的理化性質(zhì)及藥理作用，以葛根素、大豆苷、沒食子酸、綠原酸、槲皮素、肉桂酸和蘆丁7個有效成分的含量、出膏率為指標(biāo)進(jìn)行綜合評價[12-13]，采用響應(yīng)面法[14]對柴胡安心膠囊的水提工藝進(jìn)行優(yōu)選，為后續(xù)制劑的生產(chǎn)提供改進(jìn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

1200 Series高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；Sartorius BS 110S分析天平[Sartorius科學(xué)儀器（北京）有限公司]；KQ-400KDE高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

沒食子酸（批號：17062510，純度：≥98%）、大豆苷（批號：17060913，純度：≥98%）、肉桂酸（批號：20171102，純度：≥98%）、葛根素（批號：17072302，純度：≥98%）、綠原酸（批號：17081021，純度：≥98%）對照品均購自上海士鋒生物科技有限公司；蘆?。ㄅ枺?0130809，純度：≥98%）、槲皮素（批號：20121205，純度：≥98%）對照品均購自大連美侖生物技術(shù)有限公司；甲醇、乙腈均為色譜純，水為市售娃哈哈純凈水。

1.3 藥材

柴胡（批號：180601CP254）、白芍（批號：180601CP- 072）、龍骨（批號：20180101）、夏枯草（批號：20180401）、延胡索（批號：20160901）、炙甘草（批號：20180101）等藥材均購自河北新祁中藥顆粒飲片有限公司；葛根（批號：18031901）、清半夏（批號：18070701）、珍珠母（批號：18011501）、干姜（批號：18011601）等藥材均購自國藥樂仁堂河北藥業(yè)有限公司；桂枝（批號：180601CP252）、茯苓（批號：180601CP212）、牡蠣（批號：180501CP154）、大棗（批號：171201CP611）等藥材均購自河北萬修藥業(yè)有限公司；上述所有藥品經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)大學(xué)第一醫(yī)院張一民主管中藥師鑒定均符合2015年版《中國藥典》（一部）的藥用標(biāo)準(zhǔn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 7個有效成分的含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.5%乙酸水（A）-甲醇（B），梯度洗脫（0～40 min，5%→25%B；40～60 min，25%→60%B；60→80 min，100%B）；檢測波長：275 nm；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30 ℃。分別取“2.1.2”和“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液和混合對照品溶液進(jìn)樣分析，結(jié)果，各相鄰峰間分離度均大于 1.5，理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)不低于4 000。2種溶液的色譜圖見圖1。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱取提取后的浸膏（試驗(yàn)號28）0.5 g，加入約50 mL的50%乙醇回流1.5 h，過濾，殘?jiān)屑尤?0 mL的50%乙醇繼續(xù)回流1.5 h，重復(fù)2次，合并3次濾液，減壓濃縮至約15 mL，加50%乙醇定容至25 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 混合對照品溶液的制備 精密稱取葛根素對照品30 mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻得對照品溶液。分別稱取大豆苷、沒食子酸、綠原酸、肉桂酸、蘆丁、槲皮素對照品17、7、21、12、21、18 mg，用甲醇稀釋并定容于25 mL量瓶中，與葛根素對照品溶液混勻后作為混合對照品溶液備用。

2.1.4 線性關(guān)系與定量限考察 分別量取“2.1.3”項(xiàng)下的混合對照品溶液8、4、2、1、0.5 mL，置于25 mL量瓶中，用甲醇定容，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以色譜峰面積為縱坐標(biāo)（y）、待測物質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（x）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到?jīng)]食子酸、綠原酸、葛根素、大豆苷、蘆丁、肉桂酸、槲皮素回歸方程分別為y=5 486.6x+52.33（r=0.999 5）、y=3 187.9x+26.08（r=0.999 1）、y=4 260.7x+70.97（r=0.999 3）、y=4 985.7x+66.92（r=0.999 7）、y=1 807.4x-1.22（r=0.999 4）、y=3 634.4x+23.31（r=0.999 8）、y=1 969.5x+51.80（r=0.999 5）。結(jié)果表明 ，沒食子酸、綠原酸、葛根素、大豆苷、蘆丁、肉桂酸、槲皮素檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為1.78～28.52、5.25～84.00、18.72～299.66、4.24～67.86、3.02～48.39、5.27～84.35、4.52～72.39 μg/mL。按相關(guān)方法操作，得定量限分別為1.78、5.25、18.72、4.24、3.02、5.27、4.52 μg/mL。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.1.3”項(xiàng)下混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。分別計(jì)算沒食子酸、綠原酸、葛根素、大豆苷、蘆丁、肉桂酸、槲皮素峰面積的RSD，結(jié)果分別為 0.77%、0.86%、2.30%、1.12%、1.04%、1.33%、2.06%（n=6）。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取“2.1.2”項(xiàng)下供試品溶液，在室溫下放置0、2、4、8、12、24 h后進(jìn)樣分析。分別計(jì)算沒食子酸、綠原酸、葛根素、大豆苷、蘆丁、肉桂酸、槲皮素峰面積的RSD，結(jié)果分別為1.04%、1.96%、1.53%、0.93%、0.96%、1.12%、1.66%（n=6）。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，進(jìn)樣測定。分別計(jì)算沒食子酸、綠原酸、葛根素、大豆苷、蘆丁、肉桂酸、槲皮素峰面積的RSD，結(jié)果分別為1.28%、1.96%、2.25%、1.66%、1.35%、1.58%、2.58%（n= 6）。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的供試品溶液9份，分別加入沒食子酸、綠原酸、葛根素、大豆苷、肉桂酸、蘆丁、槲皮素對照品適量，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算平均回收率和RSD，結(jié)果均符合要求，詳見表1。

2.2 出膏率的測定

精密量取水提工藝篩選試驗(yàn)中的水提液50 mL，置于已干燥至恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后于105 ℃干燥至恒質(zhì)量；置于干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定質(zhì)量，計(jì)算出膏率[出膏率（%）=干膏質(zhì)量×50/藥材質(zhì)量×100%]。

2.3 水提工藝考察因素與指標(biāo)的確定

本研究在考察提取工藝時，設(shè)計(jì)在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上結(jié)合響應(yīng)面法對各因素與指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化。根據(jù)前期試驗(yàn)結(jié)果，確定柴胡安心膠囊處方的藥效部位為水溶性部分，因此對其水提工藝進(jìn)行考察。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，選擇對水提效果可能有影響的因素，即加液倍數(shù)、浸泡時間、回流時間、提取次數(shù)作為考察因素。采用層次分析法（AHP）進(jìn)行分析[15]，由于柴胡安心膠囊中葛根為君藥，白芍和桂枝為臣藥，故葛根中主要有效成分葛根素和大豆苷與白芍中的代表性成分沒食子酸比較，葛根素和大豆苷相對重要，記為3.00；由于夏枯草為佐藥，與其有效成分蘆丁、槲皮素、綠原酸比較，葛根素和大豆苷則更為重要，則記為7.00；另外，出膏率與葛根素和大豆苷比較同等重要，故與沒食子酸比較時也記為3.00；按照AHP法以此類推，各指標(biāo)權(quán)重的判斷矩陣見表2。

采用AHP計(jì)算，最終確定沒食子酸、綠原酸、葛根素、大豆苷、肉桂酸、蘆丁、槲皮素及出膏率的權(quán)重系數(shù)分別為0.064 7、0.029 7、0.254 8、0.254 8、0.081 9、0.029 7、0.029 7、0.254 8。進(jìn)而根據(jù)權(quán)重系數(shù)計(jì)算綜合評分（Y）=ΣDiJ×權(quán)重，DiJ=某指標(biāo)值/某指標(biāo)值中的最大值，即Y（%）=DiJ沒食子酸×0.064 7+DiJ綠原酸×0.029 7+DiJ葛根素×0.254 8+DiJ大豆苷×0.254 8+DiJ肉桂酸×0.081 9+DiJ蘆丁×0.029 7+ DiJ槲皮素×0.029 7+DiJ出膏率×0.254 8。

2.4 水提工藝篩選的單因素試驗(yàn)

2.4.1 加液倍數(shù)考察 按處方比例稱取藥材207 g，分別加入6、8、10、12、14倍藥材量的水浸泡10 h，回流2次，每次1.5 h，考察提取液的Y值。結(jié)果顯示，加液量為6～10倍水時，Y值呈上升趨勢，10倍之后趨于平緩，且10倍與12倍的結(jié)果相差不大，考慮生產(chǎn)中的實(shí)際操作，選取加液倍數(shù)10為響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)的考察水平，具體結(jié)果見圖2A。

2.4.2 浸泡時間考察 按處方比例稱取藥材207 g，加10倍水，回流2次，每次1.5 h，考察浸泡6、8、10、12、14、18 h后提取液的Y值。結(jié)果顯示，浸泡10 h內(nèi)Y值呈上升趨勢，10 h后開始下降，考慮生產(chǎn)實(shí)際操作和藥材變質(zhì)時間，選擇浸泡10 h為響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)的考察水平，具體結(jié)果見圖2B。

2.4.3 回流時間考察 按處方比例稱取藥材207 g，加入10倍水，浸泡10 h，回流2次，分別考察回流1、1.5、2、2.5 h后提取液的Y值。結(jié)果顯示，回流1～1.5 h時Y值呈上升趨勢，2 h時Y值下降，2.5 h時又上升，但低于1.5 h時的Y值?？紤]生產(chǎn)實(shí)際操作，選取回流1.5 h為響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)的考察水平，具體結(jié)果見圖2C。

2.4.4 提取次數(shù)考察 按處方比例稱取藥材207 g，加10倍水，回流1.5 h，分別考察回流1、2、3、4次后提取液的Y值。結(jié)果顯示，回流1、2、3次時Y值呈上升趨勢，但2次及以后的Y值趨于平緩，考慮生產(chǎn)實(shí)際操作，取回流2次為響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)的考察水平，具體結(jié)果見圖2D。

2.5 水提工藝優(yōu)化的響應(yīng)面法

2.5.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果，選擇浸泡時間（A，h）、提取次數(shù)（B）、加液倍數(shù)（C）、回流時間（D，h）為考察因素，按1倍處方量稱取藥材207 g進(jìn)行試驗(yàn)。

2.5.2 試驗(yàn)結(jié)果與方差分析 以沒食子酸、綠原酸、葛根素、大豆苷、肉桂酸、槲皮素、蘆丁的含量及出膏率為考察指標(biāo)，按照不同權(quán)重系數(shù)進(jìn)行加權(quán)計(jì)算得到各提取液的Y值，試驗(yàn)結(jié)果見表4。

采用Design-expert 8.0.6軟件對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，得到Y(jié)對浸泡時間（A）、提取次數(shù)（B）、加液倍數(shù)（C）、提取時間（D）的回歸方程為Y=91.38+1.22A+2.33B+5.55C+3.93D+2.30AB-1.65AC+4.38AD+2.10BC+0.07BD+1.01CD-4.67A2-4.53B2-3.11C2-8.22D2，R2=0.940 7。方差分析結(jié)果見表5。

由表5可知，模型F=5.93，P=0.001<0.01，說明回歸模型極其顯著，失擬項(xiàng)F=3.84，P=0.103 2>0.05，說明模型失擬項(xiàng)不顯著，可以用于分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)。由表中P值可知，模型的一次項(xiàng)影響順序是C>D>B>A，C、D極其顯著，交互項(xiàng)均不顯著，二次項(xiàng)A2、D2均極其顯著，C2不顯著。

2.5.3 工藝優(yōu)化結(jié)果 運(yùn)用Design-expert 8.0.6軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸擬合，得到響應(yīng)面圖，見圖3。

由響應(yīng)面圖的陡峭程度可知，加液倍數(shù)和回流時間對Y值影響較大，交互項(xiàng)對Y值無顯著影響，忽略交互作用，以Y值的回歸模型的極值分析得到最優(yōu)條件為：浸泡時間為10.00 h，提取次數(shù)2.03，加液倍數(shù)11.08，回流時間1.50 h，在此條件下Y的預(yù)測值為91.38%，考慮生產(chǎn)實(shí)際操作，將最優(yōu)提取條件調(diào)整為加液倍數(shù)11，浸泡10 h，提取2次，每次回流1.5 h。

2.5.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 稱取10倍處方量的藥材2 070 g，共3份，按上述優(yōu)選條件即浸泡時間為10 h、提取2次、加液倍數(shù)11、每次回流1.5 h進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果，3次試驗(yàn)的Y值平均為91.37%（RSD<2%，n=3），與預(yù)測值相比較，相對誤差為1.87%，說明該模型預(yù)測性擬合度良好，所得數(shù)據(jù)有效可靠，具有一定的實(shí)際指導(dǎo)意義，具體結(jié)果見表6。

3 討論

3.1 指標(biāo)成分的選擇

柴胡安心膠囊由多味中藥組成，若只選擇單一成分為考察指標(biāo)，則其并不能夠全面反映復(fù)方中藥制劑的本身特點(diǎn)，且易受其他因素的影響，單一成分在藥材中的含量與在制劑中的含量不一定呈現(xiàn)真實(shí)的線性關(guān)系，而各指標(biāo)之間也可能存在相互影響，故采用多成分的含量為指標(biāo)來評價復(fù)方中藥制劑的工藝優(yōu)化勢在必行。在該制劑中，柴胡雖為君藥之一，但其主要有效成分柴胡皂苷類的紫外最大吸收波長在210 nm左右，于本研究中的液相檢測條件下基線干擾嚴(yán)重，故暫未將該成分的含量列入指標(biāo)性成分中，但通過選入另一君藥葛根，以及臣藥桂枝和白芍，佐藥夏枯草的7種有效成分，再結(jié)合真空干燥后的出膏率，基本上能反映該組方的制劑質(zhì)量和提取效率。

在設(shè)定各指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)上，本研究根據(jù)中藥的君臣佐使理論，運(yùn)用AHP法計(jì)算了8個指標(biāo)成分的權(quán)重，進(jìn)而得到綜合評分，由此兼顧了藥效與有效成分的提取效率，因此所優(yōu)化的工藝參數(shù)更符合臨床實(shí)際情況。

3.2 試驗(yàn)方法與提取方法的選擇

響應(yīng)面法與正交試驗(yàn)法、均勻試驗(yàn)設(shè)計(jì)法比較，前者兼顧了多個影響因素以及因素之間的交互作用，故預(yù)測結(jié)果與真實(shí)結(jié)果比較更為接近，能夠更精確地獲取到試驗(yàn)的最優(yōu)條件[16]。另外，在提取方法上，本試驗(yàn)從傳統(tǒng)的中藥煎煮法考慮，采用了水提方式，試驗(yàn)步驟簡單穩(wěn)定，通過單因素試驗(yàn)的結(jié)果確定對結(jié)果產(chǎn)生主要影響的因素和水平，并用于后續(xù)響應(yīng)面試驗(yàn)的設(shè)計(jì)，由此提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性，驗(yàn)證試驗(yàn)也證明實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)與擴(kuò)大樣本10倍量后的中試生產(chǎn)結(jié)果比較接近，故本研究可為后續(xù)柴胡安心膠囊的制劑生產(chǎn)提供試驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 高延秋.柴胡安心膠囊對心血管神經(jīng)癥的療效和安全性觀察[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2007.

[ 2 ] 方曉艷，張蕾，馮素香，等. HPLC法比較河南8個產(chǎn)地葛根中5種成分[J].中成藥，2016，38（9）：2073-2075.

[ 3 ] 馮玉蘭，柴薇薇，李健和，等.葛根素PEG-PE納米膠束的制備及在急性心肌缺血模型小鼠體內(nèi)的組織分布[J].中國藥學(xué)雜志，2017，52（21）：1918-1923.

[ 4 ] ZHANG X，XIONG J，LIU S，et al. Puerarin protects dopaminergic neurons in Parkinson’s disease models[J]. Neuroscience，2014，280（7）：88-98.

[ 5 ] WANG N，ZHANG YM，WU L，et al. Puerarin protected the brain from cerebral ischemia injury via astrocyte apoptosis inhibition[J]. Neuropharmacology，2014.DOI：10. 1016/j.neuropharm.2013.12.004.

[ 6 ] 錢珺，謝凡，石燕紅，等. HPLC法同時測定白芍配方顆粒中5種成分[J].中成藥，2018，40（1）：117-120.

[ 7 ] 崔運(yùn)浩，梁茂新，初杰.白芍潛在功能發(fā)掘與利用[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2016，34（5）：1240-1243.

[ 8 ] 劉沖，劉蔭貞，樂智勇.桂枝飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中草藥，2017，48（8）：1577-1583.

[ 9 ] 劉萍，張麗萍.桂枝化學(xué)成分及心血管藥理作用研究[J].遼寧中醫(yī)雜志，2012，39（10）：1926-1927.

[10] 皮勝玲，張凱強(qiáng)，胡玉珍，等.野生與栽培夏枯草5種有效成分的HPLC測定[J].中草藥，2017，48（8）：1666-1670.

[11] 劉亞敏，栗俞程，李寒冰，等.夏枯草水提物抗抑郁作用研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2017，28（4）：1577-1583.

[12] 單麗芳，楊紅梅，曹蕾，等.多指標(biāo)綜合評分法優(yōu)選參芪復(fù)方顆粒提取工藝及其熱穩(wěn)定性考察[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2016，22（7）：24-27.

[13] 張志，李聽弦，姚楠，等.多指標(biāo)正交試驗(yàn)優(yōu)化大黃的濕紙煨制工藝[J].中國藥房，2018，29（7）：964-967.

[14] 范孟雪，秦昆明，丁斐，等. Box-Behnken響應(yīng)面法結(jié)合多指標(biāo)綜合加權(quán)法優(yōu)選升麻中酚酸類成分的提取工藝[J].中國藥房，2016，27（13）：1835-1838.

[15] 陳恒文，田盼盼，何軒輝，等.多指標(biāo)綜合評分法優(yōu)化穩(wěn)心湯提取工藝[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2018，24（20）：25-31.

[16] 王萍，王宇鶴，辛愛潔，等. Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化粉葛配方顆粒提取工藝[J].中成藥，2017，39（6）：1293- 1296.

（收稿日期：2018-10-11 修回日期：2018-12-04）

（編輯：劉 萍）