龔建英 王華新 陳寶玲 唐遒冥 蒙芳 蘇莉花
摘要:【目的】建立潑墨石斛(Dendrobium Enobi Purple ‘Splashi’)高位芽組培快繁體系,為減少其無菌播種引起的子代植株花色性狀分離提供技術(shù)支持?!痉椒ā恳詽娔鷤?cè)芽、高位芽和花梗為外植體,分析不同消毒時間對其不定芽誘導(dǎo)率的影響;以高位芽為外植體,分析不同激素組合對其不定芽誘導(dǎo)、叢生芽增殖及生根壯苗效果的影響?!窘Y(jié)果】潑墨石斛高位芽的不定芽誘導(dǎo)效果優(yōu)于側(cè)芽和花梗,其中以0.1% HgCl2消毒2.5 min時的不定芽誘導(dǎo)率最高;以高位芽進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+3.00 mg/L 6-芐氨基嘌呤(6-BA)+0.50 mg/L α-萘乙酸(NAA)+30.0 g/L蔗糖+5.0 g/L瓊脂+2.0 g/L蛋白胨+0.5 g/L活性炭+100.0 mL/L椰汁,誘導(dǎo)率達(dá)73.3%;最佳增殖培養(yǎng)基為MS+4.00 mg/L NAA+0.20 mg/L 6-BA+30.0 g/L蔗糖+5.0 g/L瓊脂+2.0 g/L蛋白胨+0.5 g/L活性碳+100.0 g/L土豆泥,增殖倍數(shù)達(dá)5.0倍;最佳生根壯苗培養(yǎng)基為MS+0.50 mg/L NAA+0.10 mg/L 6-BA+30.0 g/L蔗糖+5.0 g/L瓊脂+2.0 g/L蛋白胨+0.5 g/L活性碳+50.0 g/L香蕉泥+30.0 g/L土豆泥,平均株高7.30 cm,莖粗0.990 cm,生根數(shù)16條,根長6.10 cm,根粗0.140 cm;生根苗用水苔包裹根部后移栽至穴盤中,成活率達(dá)100.0%;以高位芽進(jìn)行誘導(dǎo)獲得的潑墨石斛再生植株,可保持其品種的典型潑墨花色特征。【結(jié)論】以高位芽為外植體建立的潑墨石斛組培快繁體系能同時實(shí)現(xiàn)種苗快繁和保持品種優(yōu)良花色性狀,可用于其種苗工廠化育苗。
關(guān)鍵詞: 潑墨石斛;外植體;高位芽;消毒時間;組培快繁
中圖分類號: S682.31? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號:2095-1191(2019)01-0125-06
0 引言
【研究意義】潑墨石斛(Dendrobium Enobi Purple ‘Splashi’)是我國近年從泰國或日本引進(jìn)的石斛蘭新品種,屬迷你型秋石斛種類,株高20.00~30.00 cm,花瓣和萼片呈白色,其邊緣鑲嵌紫紅色花斑,唇瓣白色帶紫紅色條紋,每株開花10~30朵,花徑6.00~8.00 cm,自然花期為5月或9月,群體花期45~60 d。潑墨石斛由于發(fā)生花色突變,其花朵上的大部分部位失去紫紅色素,從而形成類似國畫中潑墨效果的變異花色(王雁等,2015),是當(dāng)前不可多得的精品盆栽石斛蘭。潑墨石斛引入我國時間較短,當(dāng)前僅海南和廣東等地有少量種植,其繁殖方式主要為分株繁殖,繁殖效率低,無法滿足市場需求。筆者經(jīng)前期試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),潑墨石斛無菌播種極易引起花色性狀分離,子代植株的花朵變?yōu)槠胀ǖ陌谆ɑ蚣t花,觀賞價值和經(jīng)濟(jì)價值顯著下降。因此,建立潑墨石斛組培快繁體系繁育種苗,對解決其無菌播種引起的子代植株花色性狀分離及分株繁殖效率低等問題具有重要意義?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】國內(nèi)在秋石斛組織培養(yǎng)方面已有一些研究報(bào)道。羅嵐等(2004)以秋石斛小苗的莖尖為材料進(jìn)行離體繁殖,結(jié)果顯示,自制培養(yǎng)基NX+1.5 mg/L 6-芐氨基嘌呤(6-BA)+0.15 mg/L α-萘乙酸(NAA)為較佳的秋石斛原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基,誘導(dǎo)率達(dá)57.7%,自制培養(yǎng)基NX+1.5 mg/L 6-BA+0.20 mg/L NAA為較佳的秋石斛原球莖增殖培養(yǎng)基,培養(yǎng)35 d可增殖7.52倍。陳亞鴻等(2009)研究顯示,在含不同配比激素的MS培養(yǎng)基中添加0.5~1.0 g/L活性炭(AC)和0.5~1.0 g/L胰蛋白胨進(jìn)行秋石斛原球莖增殖、芽分化和生根培養(yǎng),能降低其組培苗的褐化率。張娟(2015)以秋石斛品種陽光的高位芽為外植體開展組織培養(yǎng)研究,發(fā)現(xiàn)最佳不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 3-吲哚丁酸(IBA)+80.0 g/L土豆泥+1.0 g/L活性炭,增殖系數(shù)達(dá)4.50;最佳生根壯苗培養(yǎng)基為MS+0.8 mg/L IBA+80.0 g/L土豆泥+活性炭1.0 g/L,生根率達(dá)99.0%。陳齊明等(2017)研究發(fā)現(xiàn),秋石斛三亞陽光側(cè)芽莖尖的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.3 mg/L 6-BA,誘導(dǎo)率達(dá)92.86%;繼代增殖最佳培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA+30.0 g/L葡萄糖,增殖系數(shù)達(dá)8.15。莫遠(yuǎn)琪等(2018)以澳洲鴿子石斛幼嫩假鱗莖為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)和快速繁殖研究,結(jié)果表明,外植體消毒成功率達(dá)92.5%,在MS培養(yǎng)基中添加5.0 mg/L 6-BA適用于進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)和前期增殖,而在MS+0.50 mg/L NAA+2.0 mg/L KT中增殖倍數(shù)最大,為6.96倍?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】秋石斛組培快繁體系的建立主要以莖尖和側(cè)芽為外植體,但秋石斛品種繁多,不同品種和試驗(yàn)材料的最佳培養(yǎng)基配方差異明顯,目前關(guān)于系統(tǒng)比較以潑墨石斛側(cè)芽、高位芽和花梗為外植體誘導(dǎo)不定芽的研究鮮見報(bào)道?!緮M解決的關(guān)鍵問題】利用潑墨石斛高位芽、側(cè)芽和花梗為外植體,比較不同消毒時間對潑墨石斛不定芽誘導(dǎo)效果的影響;在此基礎(chǔ)上,以高位芽為外植體建立潑墨石斛組培快繁體系,為潑墨石斛種苗的規(guī)?;敝炒蛳禄A(chǔ)。
1 材料與方法
1. 1 試驗(yàn)材料
潑墨石斛由廣西林業(yè)科學(xué)研究院國家石斛屬種質(zhì)資源保存庫提供。于2017年5月的睛天上午,在無病蟲害、生長健壯潑墨石斛植株上選取高位芽、側(cè)芽和花梗,剝?nèi)ト~片或花蕾,用洗潔精洗凈,以流水沖洗20 min,置于超凈工作臺上用濾紙吸干表面水分,用75%酒精消毒30 s,無菌水沖洗4次,接著用0.1% HgCl2溶液消毒1~4 min,無菌水沖洗5次,用無菌濾紙吸干水分備用。
以MS為基本培養(yǎng)基,添加30.0 g/L蔗糖、5.0 g/L瓊脂、2.0 g/L蛋白胨和0.5 g/L活性碳;在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加100.0 mL/L椰汁,在增殖培養(yǎng)基中添加100.0 g/L土豆泥,在生根壯苗培養(yǎng)基中添加50.0 mg/L香蕉泥和30.0.0 mg/L土豆泥;培養(yǎng)基pH 5.6~5.8;光照時間12 h/d,光照強(qiáng)度2000~3000 lx,培養(yǎng)溫度23~25 ℃。
1. 2 試驗(yàn)方法
1. 2. 1 潑墨石斛外植體及其消毒時間篩選 以潑墨石斛側(cè)芽、高位芽和花梗3種材料為外植體,設(shè)0.1% HgCl2消毒時間為1.0、1.5、2.5和4.0 min,共12個處理,每處理15瓶,每瓶2個外植體,重復(fù)3次。外植體切成1.5 cm左右的小段,接種于激素組合為2.00~4.00 mg/L 6-BA+0.20~0.50 mg/L NAA的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,培養(yǎng)30 d后統(tǒng)計(jì)不定芽誘導(dǎo)率,篩選出最佳外植體和外植體消毒時間。
1. 2. 2 潑墨石斛不定芽誘導(dǎo)最佳激素組合和培養(yǎng)基篩選 將消毒好的高位芽切成1.5 cm左右的帶節(jié)莖段,接種于分別添加不同質(zhì)量濃度6-BA(1.00、2.00、3.00、5.00 mg/L)和NAA(0.20、0.50、1.00 mg/L)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,共12個處理組合。每處理15瓶,每瓶接種2個外植體,重復(fù)3次。誘導(dǎo)培養(yǎng)30 d后統(tǒng)計(jì)不定芽誘導(dǎo)率,篩選出誘導(dǎo)不定芽的最佳激素組合和培養(yǎng)基。
1. 2. 3 潑墨石斛叢生芽增殖最佳激素組合和培養(yǎng)基篩選 當(dāng)誘導(dǎo)出的不定芽長至2~4 cm時,從其基部切下,接種于分別添加不同質(zhì)量濃度NAA(1.00、2.00、3.00、4.00 mg/L)和6-BA(0.05、0.20、0.50 mg/L)的增殖培養(yǎng)基中,共12個處理組合。每處理30瓶,每瓶接種1個不定芽,重復(fù)3次。培養(yǎng)75 d后統(tǒng)計(jì)芽的增殖倍數(shù),篩選出叢生芽增殖的最佳激素組合和培養(yǎng)基。
1. 2. 4 潑墨石斛生根壯苗最佳激素組合和培養(yǎng)基篩選 當(dāng)增殖的叢生芽有3~4片葉、高度達(dá)4.0 cm左右時,從基部切下,將生長較好、長勢一致的單株接種于激素組合分別為2.00 mg/L NAA+(0.05、0.20、0.50 mg/L)6-BA、3.00 mg/L 6-BA+(0.05、0.20、0.50 mg/L)NAA、0.50 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA和0.50 mg/L NAA+0.10 mg/L 6-BA的生根壯苗培養(yǎng)基中,共8個處理組合。每處理8瓶,每瓶接種5個單株,重復(fù)3次。培養(yǎng)75 d后統(tǒng)計(jì)生根苗的株高、莖粗、根數(shù)、根長和根粗,篩選出生根壯苗的最佳激素組合和培養(yǎng)基。
1. 2. 5 潑墨石斛組培苗移栽 將潑墨石斛組培瓶苗(生根苗)置于溫室中煉苗7~15 d后,清水洗凈根部培養(yǎng)基,用80%多菌靈可濕性粉劑1000倍液浸泡植株10~15 min,將小苗撈出,瀝干水分后用水苔包裹根頸移栽至50孔穴盤中,30 d后統(tǒng)計(jì)成活率。移栽植株自然開花時,逐株觀察其花色特征。
1. 2. 6 測定指標(biāo)及方法 不定芽誘導(dǎo)率(%)=(誘導(dǎo)芽數(shù)/接種芽數(shù))×100;外植體污染率(%)=(污染芽數(shù)/接種芽數(shù))×100;增殖倍數(shù)=叢生芽數(shù)/接種芽數(shù);移栽苗成活率(%)=(成活苗數(shù)/移栽苗數(shù))×100。以游標(biāo)卡尺測定根長、根粗和莖粗,以直尺測定株高。
1. 3 統(tǒng)計(jì)分析
試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2007和DPS v9.01進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
2 結(jié)果與分析
2. 1 不同外植體和消毒時間對潑墨石斛不定芽誘導(dǎo)效果的影響
由表1可知,潑墨石斛高位芽和側(cè)芽均可直接誘導(dǎo)出單生不定芽,花梗可誘導(dǎo)出愈傷組織;同一消毒時間,花梗的污染率最低,高位芽次之,側(cè)芽的最高,說明花梗更容易消毒;同一外植體,隨0.1% HgCl2消毒時間的增加,其不定芽誘導(dǎo)率呈先上升后下降的變化趨勢,污染率持續(xù)降低;12個處理組合中,消毒時間為2.5 min時,高位芽的不定芽誘導(dǎo)率最高,為61.1%,顯著高于其他消毒時間處理的高位芽、側(cè)芽和花梗(P<0.05,下同),污染率也較低(16.7%)。說明以潑墨石斛高位芽為外植體進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)的效果優(yōu)于側(cè)芽和花梗,其中以0.1% HgCl2消毒2.5 min的潑墨石斛高位芽誘導(dǎo)效果最佳。
2. 2 不同激素組合對潑墨石斛不定芽誘導(dǎo)效果的影響
由表2可知,在12個激素處理組合中,處理組合5的不定芽誘導(dǎo)率最高,為73.3%,與處理組合8(66.7%)差異不顯著(P>0.05,下同),但二者顯著高于其他10個處理組合。在同一質(zhì)量濃度6-BA的處理組合中,隨著NAA質(zhì)量濃度由0.20 mg/L增加至1.00 mg/L,潑墨石斛不定芽誘導(dǎo)率呈先增加后降低的變化趨勢,當(dāng)NAA質(zhì)量濃度增加至1.00 mg/L時,誘導(dǎo)出的不定芽均發(fā)生了變異。在同一質(zhì)量濃度NAA處理中,隨著6-BA質(zhì)量濃度由2.00 mg/L增加至5.00 mg/L,不定芽誘導(dǎo)率也呈先增加后降低的變化趨勢;當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度增至5.00 mg/L時,處理組合10~12的芽誘導(dǎo)率均較處理組合7~9(4.00 mg/L 6-BA處理組合)顯著下降。由此可見,6-BA質(zhì)量濃度升至5.00 mg/L和NAA質(zhì)量濃度升至1.00 mg/L均會抑制潑墨石斛不定芽生長。即潑墨石斛最佳不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+3.00 mg/L 6-BA+0.50 mg/L NAA+30.0 g/L蔗糖+5.0 g/L瓊脂+2.0 g/L蛋白胨+0.5 g/L活性碳+100.0 ml/L椰汁(不定芽誘導(dǎo)情況見圖1-A)。
2. 3 不同激素組合對潑墨石斛叢生芽增殖效果的影響
由表3可知,12個激素處理組合潑墨石斛叢生芽的增殖系數(shù)為1.25~5.00;其中處理組合11的增殖效果最佳,增殖系數(shù)為5.00,顯著高于其他11個處理組合。當(dāng)NAA質(zhì)量濃度為1.00~3.00 mg/L時,隨著6-BA質(zhì)量濃度由0.05 mg/L增加至0.50 mg/L,叢生芽增殖系數(shù)逐步增加;當(dāng)NAA質(zhì)量濃度為4.00 mg/L時,隨6-BA質(zhì)量濃度的增加,叢生芽增殖系數(shù)呈先增加后減少的變化趨勢,當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度為0.20 mg/L時,叢生芽增殖系數(shù)最大,為5.00。同一質(zhì)量濃度6-BA的處理組合中,隨著NAA質(zhì)量濃度由1.00 mg/L增加至4.00 mg/L,叢生芽增殖系數(shù)增加。由此可見,在適宜的激素濃度范圍內(nèi),高質(zhì)量濃度NAA與低質(zhì)量濃度6-BA組合更有利于潑墨石斛增殖。根據(jù)叢生芽增殖系數(shù)判斷,篩選出MS+4.00 mg/L NAA+0.20 mg/L 6-BA+30.0 g/L蔗糖+5.0 g/L瓊脂+2.0 g/L蛋白胨+0.5 g/L活性碳+100.0 g/L土豆泥為潑墨石斛最佳叢生芽增殖培養(yǎng)基(叢生芽增殖情況見圖1-B)。
2. 4 不同激素組合對潑墨石斛生根壯苗效果的影響
由表4可知,8個激素處理組合潑墨石斛的生根數(shù)為14~24條,相互間差異不顯著。處理組合4的株高最高(9.40 cm),處理組合3的生根數(shù)(24條)最多,處理組合7的株高、莖粗、根數(shù)、根長和根粗與處理組合8差異不顯著,二者的壯苗與生根效果均較佳。說明高質(zhì)量濃度(3.00 mg/L)6-BA與低質(zhì)量濃度(0.05 mg/L)NAA組合對潑墨石斛的株高生長有利,但植株假鱗莖偏細(xì)(莖粗僅0.590 cm);高質(zhì)量濃度(2.00 mg/L)NAA與低質(zhì)量濃度(0.50 mg/L)6-BA組合有利于潑墨石斛根系分蘗(根數(shù)24條),而低質(zhì)量濃度(0.50和0.10 mg/L)6-BA和低質(zhì)量濃度(0.10和0.50 mg/L)NAA組合有利于潑墨石斛生根和壯苗,如處理組合7的莖粗達(dá)0.986 cm,根數(shù)為22條,處理組合8的莖粗達(dá)0.990 cm,根數(shù)為16條。綜合潑墨石斛的5項(xiàng)生長指標(biāo)及其植株整體長勢,以處理組合8的生根壯苗效果最佳,其株高為7.30 cm,莖粗為0.990 cm,生根數(shù)為16 條,根長為6.10 cm,根粗為0.140 cm。即MS+0.50 mg/L NAA+0.10 mg/L 6-BA+30.0 g/L蔗糖+5.0 g/L瓊脂+2.0 g/L蛋白胨+0.5 g/L活性碳+50.0 g/L香蕉泥+30.0 g/L土豆泥為潑墨石斛最佳生根壯苗培養(yǎng)基(壯苗生根情況見圖1-C和圖1-D)。
2. 5 潑墨石斛組培苗移栽及觀察
將苗高5.00~7.00 cm、莖粗≥0.40 cm、根數(shù)≥10條的潑墨石斛組培瓶苗經(jīng)煉苗后移栽至穴盤中,在溫度20~30 ℃、相對濕度70%~80%、遮光度50%~75%的條件下培育,小苗長出新芽后,每隔7~10 d葉面噴施0.05%~0.10%水溶性復(fù)合肥(N∶P∶K=30∶10∶10或20∶20∶20)1次。移栽2周后澆透水,1個月后視天氣情況澆水,干燥天氣每2~3 d澆1次,陰天每5~7 d澆1次。45 d后,統(tǒng)計(jì)移栽成活率達(dá)100.0%(圖1-E)。移栽后經(jīng)1年培育獲得的潑墨石斛組培苗生長健壯,能自然開花,其花色未發(fā)生變異,保持了該品種的典型潑墨花色特征(開花株情況見圖1-F)。
3 討論
在石斛蘭組培快繁方面,國內(nèi)研究人員已通過莖尖、莖段等外植體誘導(dǎo)原球莖的途徑,建立了多個石斛品種的再生體系(汪杰等,2009;賀佳等,2010;張彥妮等,2010;陸順教等,2017)。潑墨石斛屬于精品盆栽迷你型秋石斛,花色獨(dú)特,觀賞價值極高,但其花色易受繁殖方式影響而發(fā)生變化。目前,通過分株繁殖,潑墨石斛子代植株可保持其典型的花色特征,但繁殖效率低,無法滿足市場需求;通過無菌播種繁殖,其子代植株會喪失花色的潑墨特征,觀賞價值和經(jīng)濟(jì)價值顯著下降;以莖尖和莖段為外植體誘導(dǎo)原球莖途徑獲得的再生植株,在培養(yǎng)過程中幼芽變異率較高,石斛蘭的優(yōu)良性狀不易保持(陸順教等,2017);以石斛蘭花梗為外植體誘導(dǎo)不定芽的文獻(xiàn)報(bào)道較少。
易雙雙等(2016)對樹蘭的研究結(jié)果表明,通過頂芽或腋芽誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽,能較好地保持親本的優(yōu)良性狀,其體細(xì)胞的變異率低,遺傳穩(wěn)定。為減少組培苗的花色變異,本研究采用與易雙雙等(2014,2016)的相似策略建立潑墨石斛組培快繁體系,其中,高位芽和側(cè)芽均有較高的不定芽誘導(dǎo)率,但高位芽污染率(16.7%)顯著低于側(cè)芽(30.0%),因此確定以高位芽為最適宜的組培外植體,并在激素組合為3.00 mg/L 6-BA+0.50 mg/L? NAA的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中獲得最高不定芽誘導(dǎo)率,在激素組合為4.00 mg/L NAA+0.20 mg/L 6-BA的增殖培養(yǎng)基中獲得最高叢生芽增殖系數(shù),在激素組合為0.50 mg/L NAA+0.10 mg/L 6-BA的生根壯苗培養(yǎng)基中獲得最佳生根壯苗效果。以高位芽為外植體培育的潑墨石斛組培苗移栽后生長良好,能正常開花,且能保持潑墨石斛的典型花色性狀。說明本研究構(gòu)建的潑墨石斛高位芽組培快繁體系能實(shí)現(xiàn)種苗快繁和保持品種優(yōu)良花色性狀的雙重目標(biāo)。
本研究結(jié)果表明,高質(zhì)量濃度(3.00 mg/L)6-BA與低質(zhì)量濃度(0.50 mg/L)NAA組合有利于潑墨石斛不定芽誘導(dǎo),與賀佳等(2010)的研究結(jié)果一致。本研究還發(fā)現(xiàn),高質(zhì)量濃度(4.00 mg/L)NAA與低質(zhì)量濃度(0.20 mg/L)6-BA組合有利于潑墨石斛叢生芽增殖,增殖倍數(shù)達(dá)5.00倍,略高于陸順教等(2015)的研究結(jié)果(4.75倍)。低質(zhì)量濃度(0.50 mg/L)NAA和低質(zhì)量濃度(0.10 mg/L)6-BA組合有助于提高組培苗質(zhì)量,其株高、莖粗、根數(shù)和根長分別為7.30 cm、0.990 cm、16條和6.10 cm,優(yōu)于陸順教等(2015)單獨(dú)以0.70 mg/L NAA處理的生根壯苗效果(4.18 cm、0.410 cm、12條和3.50 cm)。
4 結(jié)論
高位芽是潑墨石斛組培快繁的適宜外植體,其最佳不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+3.00 mg/L 6-BA+0.50 mg/L NAA+30.0 g/L蔗糖+5.0 g/L瓊脂+2.0 g/L蛋白胨+0.5 g/L活性炭+100.0 mL/L椰汁,最佳增殖培養(yǎng)基為MS+4.00 mg/L NAA+0.20 mg/L 6-BA+30.0 g/L蔗糖+5.0 g/L瓊脂+2.0 g/L蛋白胨+0.5 g/L活性碳+100.0 g/L土豆泥,最佳生根壯苗培養(yǎng)基為MS+0.50 mg/L NAA+0.10 mg/L 6-BA+30.0 g/L蔗糖+5.0 g/L瓊脂+2.0 g/L蛋白胨+0.5 g/L活性碳+50.0 g/L香蕉泥+30.0 g/L土豆泥;經(jīng)煉苗后的組培瓶苗用水苔包裹根部移栽至穴盤中,成活率達(dá)100.0%,生長正常,能自然開花,且花色性狀保持典型的潑墨特征。因此,以高位芽為外植體建立的潑墨石斛組培快繁體系可用于潑墨石斛種苗快繁與工廠化育苗。
參考文獻(xiàn):
陳齊明,鮑曉紅,高小坤,舒婷. 2017. 秋石斛叢生芽誘導(dǎo)增殖技術(shù)研究[J]. 福建林業(yè),(6):33-37. [Chen Q M,Bao X H,Gao X K,Shu T. 2017. The techniques of cluster bud induction and propagation for Dendrobium hybrida[J]. Fujian Forestry,(6):33-37.]
陳亞鴻,洪磊,陳雄庭. 2009. 減少秋石斛在組織培養(yǎng)中的褐化研究[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學(xué),16(3):44-48. [Chen Y H,Hong L,Chen X T. 2009. A study on reducing brown of Dendrobium hybrida in vitro[J]. Modern Agricultural Scien-ce,16(3):44-48.]
賀佳,彭峰,江玉梅,夏冰,汪仁. 2010. 石斛蘭組織培養(yǎng)和快速繁育體系的建立與優(yōu)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),(6):70-72. [He J,Peng F,Jiang Y M,Xia B,Wang R. 2010. Establishment and optimization of tissue culture and rapid propagation system of Dendrobium[J]. Jiangsu Agriculture Science,(6):70-72.]
陸順教,易雙雙,冷青云. 2017. 秋石斛原球莖途徑再生體系的建立[J]. 分子植物育種,15(3):1014-1021. [Lu S J,Yi S S,Leng Q Y. 2017. The Construction of regeneration system of Dendrobium hybrida through protocorm induction[J]. Molecular Plant Breed,15(3):1014-1021.]
陸順教,易雙雙,任羽,冷青云,黃少華,楊光穗. 2015. 秋石斛新生側(cè)芽中部莖段組培快繁體系的建立[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),46(8):1436-1441. [Lu S J,Yi S S,Ren Y,Huang S H,Yang G S. 2015. Establishment of tissue culture and rapid propagation for middle stem of Dendrobium hybrida young lateral bud[J]. Journal of South Agriculture,46(8):1436-1441.]
羅嵐,關(guān)仕港,劉建昌,林少娟. 2004. 秋石斛蘭離體快速繁殖研究[J]. 佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),22(2):69-71. [Luo L,Guan S G,Liu J C,Lin S J. 2004. Study of rapid propagation of Dendrobium[J]. Journal of Fo-shan University(Natural Science Edition),22(2):69-71.]
莫遠(yuǎn)琪,鄭楓,房林,李琳,江南,吳坤林,曾宋君. 2018. 澳洲鴿子石斛組織培養(yǎng)快速繁殖研究[J]. 植物生理學(xué)報(bào),54 (4):677-685. [Mo Y Q,Zheng F,F(xiàn)ang L,Li L,Jiang N,Wu K L,Zeng S J. 2018. Tissue culture and rapid propagation of Dendrobium kingianum Bidwill[J]. Plant Physio-logy Journal,54(4):677-685.]
汪 杰,劉小青,錢森和. 2009. 不同激素水平對石斛蘭組織培養(yǎng)的影響[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué),(12):21-23. [Wang J,Liu X Q,Qian S H. 2009. The effects of different hormone levels on tissue culture of Dendrobium[J]. Hunan Agriculture Science,(12):21-23.]
王雁,周進(jìn)昌,鄭寶強(qiáng),陳振皇,黃禎宏. 2015. 石斛蘭[M]. 北京:中國林業(yè)出版社. [Wang Y,Zhou J C,Zheng B Q,Chen Z H,Huang Z H. 2015. Dendrobium[M]. Beijing:China Forestry Publishing House.]
易雙雙,陸順教,尹俊梅,冷青云,楊光穗. 2014. 樹蘭組織培養(yǎng)外植體消毒方法初探[J]. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué),33(4):897-901. [Yi S S,Lu S J,Yin J M,Leng Q Y,Yang G S. 2014. The preliminary study in explants disinfection method of epidendrum in tissue culture[J]. Genomics and Applied Biology,33(4):897-901.]
易雙雙,陸順教,冷青云,王存,楊光穗. 2016. 樹蘭莖段叢生芽快繁體系的建立[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),44 (12):157-162. [Yi S S,Lu S J,Leng Q Y,Wang C,Yang G S. 2016. Establishment of rapid propagation system for clustered buds of Epidendrum stem[J]. Journal of Northwest A & F University(Natural Science Edition),44(12):157-162.]
張娟. 2015. 秋石斛組織培養(yǎng)的研究[J]. 湖北林業(yè)科技,44 (3):20-22. [Zhang J. 2015. Tissue culture technique of Dendrobium hybrid[J]. Hubei Forestry of Science and Technology,44(3):20-22.]
張彥妮,錢燦,陳立新. 2010. 石斛蘭莖段組織培養(yǎng)再生體系的初步建立[J]. 北方園藝,(8):129-131. [Zhang Y N,Qian C,Chen L X. 2010. Primary development of tissue culture systems for stem of Demdrobium nobile[J]. North Horticulture,(8):129-131.]
(責(zé)任編輯 思利華)