中國(guó)李組織培養(yǎng)技術(shù)研究

摘 要：以中國(guó)李“帥李”莖段為外植體，通過對(duì)不同基本培養(yǎng)基、不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)種類和濃度的篩選，建立“帥李”的組織培養(yǎng)再生體系，為”帥李”的組織快繁提供技術(shù)指導(dǎo)。結(jié)果表明：初代培養(yǎng)宜選用培養(yǎng)基WPM+0.2～0.4mg/L 6- 芐基腺嘌呤（ 6-BA ）+0.08～0.12mg/L 吲哚丁酸（ IBA ）;最佳增殖培養(yǎng)基為WPM+1.0mg/L苯基噻二唑基脲（ TDZ ）+0.08mg/L IBA +0.4mg/L 6-BA，能誘導(dǎo)形成4～5個(gè)叢生芽，將嫩莖接種在添加0.5mg/L萘乙酸（ NAA） 的 1/2MS培養(yǎng)基中，生根率為33.3%。

關(guān)鍵詞：帥李;組織培養(yǎng);再生體系

中圖分類號(hào)：S-3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20190730014

李（Prunus）是我國(guó)栽培歷史悠久的果樹之一，有著豐富的種質(zhì)資源[1]。李的童期長(zhǎng)，雌蕊敗育率高、遺傳高度雜合，實(shí)生苗后代普遍性狀分離，此外常規(guī)的扦插或嫁接方法繁殖苗木速度慢、繁殖系數(shù)低，這些問題已成為李生產(chǎn)發(fā)展的制約因素;如何縮短李的育種時(shí)間，快速繁育苗木是李育種工作者長(zhǎng)期努力的目標(biāo)。

“帥李”是山東臨沂主栽李品種，是中國(guó)李的一個(gè)優(yōu)良品種，果實(shí)卵圓形，果皮紫紅色，果肉淡黃色，口感極好，耐貯運(yùn)[2]。到目前為止，“帥李”的再生相關(guān)研究工作開展較少。本試驗(yàn)對(duì)中國(guó)李“帥李”的組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行初步的研究，以期建立“帥李”的莖段再生系統(tǒng)，為中國(guó)李的苗木快速繁育提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

于2016年4月在臨沂市農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)基地“帥李”上采取一年生枝條上的活動(dòng)芽包括頂芽和莖段為試材。

1.2 試驗(yàn)方法

將田間取回來(lái)的外植體，剪成3cm左右?guī)а壳o段，浸泡30min，用流動(dòng)的自來(lái)水沖洗1h左右。在超凈工作臺(tái)上，先用70%酒精消毒30s，再用0.5%NaClO加吐溫-20℃ 2～3滴消毒15min[3]。再用無(wú)菌水沖洗3～4次，將莖段剪成1cm左右，每個(gè)莖段帶有一個(gè)腋芽，接種到初代培養(yǎng)基上，先暗培養(yǎng)7d，然后轉(zhuǎn)移到光下培養(yǎng)。

1.3 初代培養(yǎng)基的篩選

試驗(yàn)采用3因素3水平的正交設(shè)計(jì)L9（33）（見表1），將消毒過的莖段或頂莖接種到初代培養(yǎng)基，每個(gè)處理接種外植體30個(gè)，重復(fù)3次，30d后統(tǒng)計(jì)成活率、增殖倍數(shù)。培養(yǎng)溫度為（25 ± 1 ）℃， pH 5.6～5.8，光照時(shí)間為 12h/d，光照強(qiáng)度為2 000 lx。

基本培養(yǎng)基：MS、WPM、LP，其中附加蔗糖30g/L，瓊脂 6.5g/L;植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑：IBA（0.04mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L），6-BA（0.2mg/L、0.4mg/L、1.0mg/L）

1.4 無(wú)菌苗增殖

培養(yǎng)基：WPM，其中添加IBA 0.08mg/L，6-BA 0.4mg/L，蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L;

細(xì)胞分裂素： TDZ（0、0.2mg/L、0.4mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.2mg/L）。將選取初代培養(yǎng)獲得的生長(zhǎng)均勻的無(wú)菌苗接種到增殖培養(yǎng)基，每個(gè)處理接種10個(gè)，重復(fù)3次。30d后分別統(tǒng)計(jì)增殖倍數(shù)。

1.5 生根培養(yǎng)

基本培養(yǎng)基：1/2MS，其中附加蔗糖15g/L，瓊脂6.5g/L;

生長(zhǎng)素：NAA （0、0.25mg/L、0.5mg/L、0.75mg/L、1.0mg/L）。將長(zhǎng)度大于2cm嫩莖接種到生根培養(yǎng)基，每個(gè)處理接種15個(gè)嫩莖，先暗培養(yǎng)7d后再轉(zhuǎn)入光下培養(yǎng)。處理重復(fù)3次，30d后統(tǒng)計(jì)生根率，生根倍數(shù)。

1.6 觀察結(jié)果及統(tǒng)計(jì)方法

成活率=成活外植體/接種外植體總數(shù)×100%;

增殖倍數(shù)=增殖芽總數(shù)/接種芽苗總數(shù)×100%;

生根率=生根苗數(shù)/接種苗總數(shù)×100%;

生根倍數(shù)=生根總條數(shù)/生根苗總數(shù);

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)借助于DPS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1? 初代培養(yǎng)基中不同基本培養(yǎng)與植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度的篩選? 將消毒過的莖段或頂莖接種到表1中9個(gè)不同處理的培養(yǎng)基上，30d后觀察統(tǒng)計(jì)成活率。試驗(yàn)結(jié)果表明，WPM基本培養(yǎng)基誘導(dǎo)效果最好，MS誘導(dǎo)效果其次，LP培養(yǎng)后期生長(zhǎng)較差。其中處理9成活率最高，達(dá)47.7%，與處理2、7、8沒有表現(xiàn)出顯著差異，但與處理1、3、4、5、6表現(xiàn)出差異顯著。結(jié)合嫩芽生長(zhǎng)后期，處理8、9效果較好 ，即WPM+0.08～0.12mg/L IBA +0.2～0.4mg/L 6-BA。

2.2 不同TDZ濃度對(duì)增殖的影響

將初代培養(yǎng)獲取的無(wú)菌苗嫩芽切下后分別接種在不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合的WPM培養(yǎng)基中， 從表2可看出，隨著TDZ濃度的增加，增殖倍數(shù)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。處理5增殖倍數(shù)最高，達(dá)4.7，與處理4、6之間差異不顯著，但與處理1、2、3差異顯著。單從增殖倍數(shù)來(lái)看，處理5即WPM+1.0mg/L TDZ+0.08mg/L IBA +0.4mg/L 6-BA為最佳增殖培養(yǎng)基。

2.3 不同濃度NAA對(duì)生根的影響

在1/2MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的NAA對(duì)生根影響很大，從表3結(jié)果可以看出，5個(gè)處理生根率差異顯著，處理3、4之間沒有差異。其中處理3（NAA 0.5mg/L）生根率最高，達(dá)33.3%，生根倍數(shù)達(dá)2.1。處理4次之，根的基部產(chǎn)生少量的愈傷團(tuán)，以致阻礙了生根，且嫩芽后期生長(zhǎng)緩慢，因此，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.5mg/L NAA。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)以中國(guó)李“帥李”的莖段為外植體，分析了不同基本培養(yǎng)與植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)成活率、增殖和生根的影響，初步建立起“帥李”的組織培養(yǎng)植株再生體系。結(jié)果表明最佳初代培養(yǎng)基WPM+0.08～0.12mg/L IBA +0.2～0.4mg/L 6-BA;最佳增殖培養(yǎng)基WPM+1.0mg/L TDZ +0.08mg/L IBA +0.4mg/L 6-BA;最佳生根培養(yǎng)基1/2MS+0.5mg/L NAA。

參考文獻(xiàn)

[1] 李玉琴，張玉梅.生物技術(shù)在李上的應(yīng)用[J].河北林業(yè)科技，2006（1）：35-36.

[2] 牛慶霖，苑克俊，于婷娟，等.山東省李產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀研究[J].北方園藝，2015（18）：185-188.

[3] 鄒英寧，李國(guó)懷，樊青峰，等不同抗氧化劑對(duì)中國(guó)李莖段培養(yǎng)的影響[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，25（1）：84-86.