異常糖鏈糖蛋白檢測(cè)對(duì)甲狀腺癌診斷意義的研究

徐 陽(yáng)

近年甲狀腺癌發(fā)病率逐年攀升且發(fā)病年齡相對(duì)年輕［1，2］。 早期甲狀腺癌無(wú)明顯癥狀或體征，多在查體中以甲狀腺結(jié)節(jié)的形式發(fā)現(xiàn)，甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性的判斷直接影響患者的治療方式及具體術(shù)式的選擇［3，4］。目前臨床雖有超聲檢查及細(xì)針穿刺抽吸活檢等檢測(cè)方法，但部分患者仍因不能確定病變性質(zhì)而需要密切隨訪甚至選擇手術(shù)切除以避免漏診或是延誤治療，這增加了患者的心理負(fù)擔(dān)和身體創(chuàng)傷，因此尋找腫瘤標(biāo)志物來(lái)協(xié)助判斷甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性具有重大意義。異常糖鏈糖蛋白（tumor abnormal protein，TAP，又稱腫瘤異常蛋白）是細(xì)胞惡變時(shí)，癌基因和抑癌基因突變后所表達(dá)的異常糖蛋白和鈣-組蛋白復(fù)合物［5］，隨著患者體內(nèi)癌細(xì)胞異常增殖，TAP被釋放進(jìn)入血液，并較多的存在于外周血液中［6，7］。TAP檢測(cè)技術(shù)將外周血液中二十余種與腫瘤相關(guān)的異常糖鏈蛋白一次性組合檢測(cè)［8，9］，對(duì)惡性腫瘤具有很高的敏感性和準(zhǔn)確性，已廣泛應(yīng)用于消化系統(tǒng)、乳腺及婦科等惡性腫瘤的篩查和診斷中，但在甲狀腺癌診斷中的應(yīng)用少有報(bào)道，該研究通過對(duì)比甲狀腺良性結(jié)節(jié)和甲狀腺癌患者的TAP檢測(cè)陽(yáng)性率，探討TAP檢測(cè)在甲狀腺癌診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取筆者所在醫(yī)院2017年10月—2018年7月因甲狀腺結(jié)節(jié)來(lái)院診治的167例患者為研究資料，其中男33例，女134例；年齡13～69 歲，平均（48.19±11.68）歲。隨機(jī)將其分為兩組：甲狀腺癌組及甲狀腺良性結(jié)節(jié)組。門診或術(shù)前將TAP檢測(cè)作為輔助檢查之一，經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為甲狀腺癌的93例患者為甲狀腺癌組，其中男19例，女74例，年齡13～68歲；經(jīng)超聲檢查、細(xì)針穿刺抽吸活檢、多次隨訪等方法或術(shù)后病理證實(shí)的甲狀腺良性結(jié)節(jié)74例患者為甲狀腺良性結(jié)節(jié)組，其中男14例，女60例，年齡19～69歲。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，兩組在年齡及性別上的差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 采血與制片 取指端末梢的第一滴和第二滴新鮮全血，分別在載玻片上推成占玻片長(zhǎng)度2/3以上的均勻血片，平放待干，共2張為檢測(cè)標(biāo)本。干燥后的血片在溫度1～35℃、相對(duì)濕度不超過80%的環(huán)境下可以存放48 h。

1.2.2 加試劑與凝聚反應(yīng) 取異常糖鏈蛋白檢測(cè)試劑盒 （凝集法）（浙江瑞生醫(yī)療科技有限公司）試劑上層液在每張血片上均勻滴加3滴（每滴約50μl），形成3個(gè)斑點(diǎn)（10～12 mm/Φ），平放靜置進(jìn)行凝集反應(yīng)（約需2 h左右）。

1.2.3 凝聚物觀察 在腫瘤異常蛋白檢測(cè)系統(tǒng)圖像分析儀（浙江瑞生醫(yī)療科技有限公司）下，用4x平場(chǎng)消色差物鏡，在顯示屏上依次掃描觀察血片標(biāo)本的3個(gè)斑點(diǎn)，尋找特異形態(tài)的凝聚物，遇可疑圖像轉(zhuǎn)用高倍鏡分辨。

1.2.4 結(jié)果判定 采用雙盲方法，由病理科醫(yī)師對(duì)TAP結(jié)果進(jìn)行判定，TAP陰性：凝聚物面積0～225μm2（圖1）；TAP陽(yáng)性： 凝聚物面積≥225μm2（圖 2）。

1.2.5 敏感度、特異度及陽(yáng)性預(yù)測(cè)值計(jì)算 敏感度=A/（A+C）×100%，特異度=D/（B+D）×100%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=A/（A+B）×100%。

圖1 TAP陰性：凝聚物面積138.264μm2

圖2 TAP陽(yáng)性：凝聚物面積263.321μm2

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 20.0進(jìn)行一般數(shù)據(jù)處理，率的比較采用單因素方差分析及卡方檢驗(yàn)，取P＜0.01為差異具有極顯著性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 敏感度、特異度及陽(yáng)性預(yù)測(cè)值經(jīng)計(jì)算，敏感度為73.02%，特異度為97.56%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為98.92%，即，敏感度=92/（92+34）×100%=73.02%；特異度=40/（1+40）×100%=97.56%； 陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=92/（92+1）×100%=98.92%。

2.2 甲狀腺良性結(jié)節(jié)與甲狀腺癌患者TAP檢測(cè)結(jié)果比較甲狀腺癌組陽(yáng)性92例，陰性1例；甲狀腺良性結(jié)節(jié)組陽(yáng)性34例，陰性40例。甲狀腺癌患者TAP檢測(cè)凝聚物較大比率98.9%，明顯高于甲狀腺良性結(jié)節(jié)患者（45.9%），兩組差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=62.443，P＜0.01）。

3 討論

甲狀腺結(jié)節(jié)是常見的甲狀腺疾病，其中約5%～15%為甲狀腺癌［3，10］。甲狀腺良性結(jié)節(jié)與惡性結(jié)節(jié)的治療及預(yù)后完全不同，準(zhǔn)確及時(shí)的判斷甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性是醫(yī)患雙方共同的迫切愿望。目前超聲檢查和術(shù)前細(xì)針穿刺抽吸活檢雖廣泛應(yīng)用于甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性判斷，但由于甲狀腺結(jié)節(jié)聲像圖多種多樣，惡性結(jié)節(jié)并無(wú)特異性表現(xiàn)，尤其對(duì)于較小結(jié)節(jié)超聲常難以做出精確判斷。術(shù)前細(xì)針穿刺抽吸活檢對(duì)甲狀腺癌的診斷具有較高的敏感度和特異度［11］，有報(bào)道稱其假陰性率最高達(dá)11%，假陽(yáng)性率最高達(dá)7%，無(wú)法鑒別甲狀腺濾泡狀癌和甲狀腺濾泡細(xì)胞瘤［12］，另有約20%患者細(xì)針穿刺抽吸活檢后仍不能確定病變性質(zhì)［13，14］。同時(shí)超聲檢查及細(xì)針穿刺抽吸活檢對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性的鑒別能力與檢查設(shè)備、超聲科醫(yī)師經(jīng)驗(yàn)、取材部位、病理科醫(yī)師經(jīng)驗(yàn)等息息相關(guān)［15］，因此人們希望尋找敏感度高、特異度強(qiáng)的腫瘤標(biāo)志物來(lái)彌補(bǔ)上述缺陷。

蛋白質(zhì)翻譯后糖基化修飾是人體細(xì)胞實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)多種功能的重要修飾方式之一，糖基化異常與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后息息相關(guān)［16，17］。烏克蘭醫(yī)學(xué)科學(xué)院在1967年首創(chuàng)臨床常用糖基化蛋白標(biāo)志物“甲胎蛋白”，異常糖鏈糖蛋白檢測(cè)即在此研究基礎(chǔ)上，利用細(xì)胞惡變時(shí)糖基化異常而產(chǎn)生的異常糖鏈糖蛋白即TAP來(lái)判斷腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后，并逐漸成為新的研究熱點(diǎn)［18-22］。較多研究表明，TAP檢測(cè)對(duì)于惡性腫瘤患者的敏感度高。靳麗亞［23］通過研究發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤患者的TAP檢測(cè)陽(yáng)性率達(dá)90.63%，明顯高于陰性患者。裴志剛、成琳等［24，25］研究發(fā)現(xiàn)，乳腺惡性腫瘤患者的 TAP 檢測(cè)陽(yáng)性率明顯高于乳腺良性腫瘤患者，而當(dāng)乳腺癌合并腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)，患者的TAP表達(dá)水平明顯升高。Liqing［26］對(duì)以肉眼血尿、超聲發(fā)現(xiàn)膀胱占位為主要臨床表現(xiàn)的87位患者進(jìn)行TAP檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)膀胱惡性腫瘤患者的TAP檢測(cè)陽(yáng)性率達(dá)78.16%，因此認(rèn)為TAP檢測(cè)有利于膀胱癌的診斷。該項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌患者TAP檢測(cè)陽(yáng)性率達(dá)98.9%，甲狀腺良性結(jié)節(jié)陽(yáng)性率僅為45.9%，兩者差異明顯，敏感度和特異度以及陽(yáng)性預(yù)測(cè)值分別達(dá)73.02%、97.6%及98.92%。因此當(dāng)難以判斷甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性時(shí)，如果TAP檢測(cè)凝聚物較大，則結(jié)節(jié)性質(zhì)為惡性的可能性更大，因此可以認(rèn)為TAP檢測(cè)有利于甲狀腺癌的診斷。該研究中，有1例甲狀腺癌患者TAP檢測(cè)結(jié)果為陰性，說明對(duì)于TAP檢測(cè)結(jié)果陰性的甲狀腺結(jié)節(jié)患者，仍不能僅憑這一單一指標(biāo)而排除甲狀腺癌。而部分甲狀腺良性結(jié)節(jié)患者TAP檢測(cè)呈陽(yáng)性，且陽(yáng)性率達(dá) 45.9%，高于施南峰等［20，27］報(bào)道的其他良性腫瘤患者的陽(yáng)性率，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)該次研究數(shù)據(jù)共有32例門診患者，診斷為甲狀腺良性結(jié)節(jié)而未收入院，32例患者TAP檢測(cè)陽(yáng)性率為0，而實(shí)際工作中部分的門診患者在考慮為甲狀腺良性結(jié)節(jié)后未接受進(jìn)一步TAP檢測(cè)，這些患者存在隨機(jī)性，因此甲狀腺良性結(jié)節(jié)患者的樣本量較少可能是導(dǎo)致上述結(jié)果較高的原因。

綜上所述，TAP檢測(cè)對(duì)甲狀腺癌的診斷具有一定的輔助價(jià)值，可作為篩查的一個(gè)補(bǔ)助指標(biāo)，但對(duì)于甲狀腺癌篩查的意義以及與甲狀腺癌患者的病理性質(zhì)、分期及預(yù)后的關(guān)系尚需進(jìn)一步的研究。