廣東省15個(gè)不同產(chǎn)地五指毛桃藥材中補(bǔ)骨脂素含量測(cè)定

蔡樹杏 羅杰 李楚源

摘? 要：目的 建立五指毛桃藥材中補(bǔ)骨脂素的高效液相色譜測(cè)定方法，測(cè)定廣東省15個(gè)不同產(chǎn)地五指毛桃藥材中補(bǔ)骨脂素含量，了解廣東省不同產(chǎn)地五指毛桃藥材質(zhì)量情況。方法 采用反相高效液相色譜法測(cè)定補(bǔ)骨脂素的含量，Waters? C18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇-水（60∶40），流速為1.0mL/min，柱溫：35℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm。結(jié)果 補(bǔ)骨脂素在9.4～198.5?g/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，平均回收率為99.94%，RSD為0.64%。廣東省不同產(chǎn)地五指毛桃的補(bǔ)骨脂素含量范圍為0.165～1.187mg/g，說(shuō)明廣東省不同產(chǎn)地五指毛桃質(zhì)量較好。結(jié)論 五指毛桃藥材中補(bǔ)骨脂素的HPLC分析方法結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為五指毛桃藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。

關(guān)鍵詞：五指毛桃? 補(bǔ)骨脂素? 含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：R282.5? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文章編號(hào)：1672-3791（2019）02（c）-0201-02

五指毛桃為嶺南常用草藥、煲湯材料，俗稱牛奶木、五指龍、土黃芪，以?？崎艑僦参锎秩~榕（Ficus hirta Vahl）的根入藥，性平，味甘、辛，具有益氣健脾、祛痰化濕、舒筋活絡(luò)的作用，用于肺虛痰喘、脾胃氣虛、肢倦無(wú)力[1]，主要分布于廣東、廣西、福建、海南、貴州、云南等地，以廣東河源人工種植面積最廣，其中河源已經(jīng)建立起多個(gè)五指毛桃的GAP種植基地，為五指毛桃的規(guī)范化種植提供了技術(shù)支持。研究表明，五指毛桃主要含有香豆素類[2]、黃酮類[2]、甾體及其他揮發(fā)性成分，其中，補(bǔ)骨脂素、佛手內(nèi)酯在不同產(chǎn)地、不同采收年份、不同采收季節(jié)、不同農(nóng)家類型品種的五指毛桃含量顯著較高，可作為五指毛桃內(nèi)在質(zhì)量評(píng)價(jià)和鑒定的依據(jù)[3-4]。五指毛桃的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)目前收載于《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn) 第一冊(cè)》（2004年版）第35頁(yè)、《廣西壯藥品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（第二卷）》第47頁(yè)、《湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（2009年版）》，只有《廣西壯藥品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)五指毛桃做出了補(bǔ)骨脂素的含量測(cè)定要求，但其流動(dòng)相使用了乙腈，毒性較大，成本較高。根據(jù)五指毛桃化學(xué)成分與藥理作用研究，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂素是其主要活性成分之一，具有抗菌[5]、鎮(zhèn)咳平喘[5]、抗炎鎮(zhèn)痛[5]、對(duì)急性肝損傷的保護(hù)[6-7]、免疫調(diào)節(jié)[8]等作用。為了分析和評(píng)價(jià)廣東省不同地區(qū)五指毛桃的質(zhì)量，該研究采用高效液相色譜法分別對(duì)廣東省15個(gè)不同地區(qū)五指毛桃中補(bǔ)骨脂素的含量進(jìn)行檢測(cè)，為制定五指毛桃質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1? 儀器與試藥

戴安U3000高效液相色譜儀;電子分析天平（梅特勒-托利多）;密理博milli-Q Direct 8 純水儀（美國(guó)Millipore公司）;超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;粉碎機(jī)（泓荃制藥機(jī)械公司）;甲醇（色譜純），補(bǔ)骨脂素對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，五指毛桃藥材采收于廣東省15個(gè)不同地區(qū)（見表1）。

2? 方法與結(jié)果

（1）色譜條件。Waters? C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：水-甲醇（40：60），流速為1.0mL/min，進(jìn)樣體積為10μL，柱溫：35℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm。

（2）對(duì)照品溶液的制備。精密稱取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含50.2?g/mL的溶液即得。

（3）供試品溶液的制備。取五指毛桃粗粉0.5g，精密稱定，置于50mL具塞錐形瓶中，精密加入10mL甲醇，稱定質(zhì)量，超聲（功率100W，頻率40kHz）提取30min，冷卻至室溫后用甲醇補(bǔ)足失質(zhì)量，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

（4）線性關(guān)系考察。分別精密稱取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成濃度為9.4μg/mL、24.6μg/mL、50.2

μg/mL、100.1μg/mL、198.5μg/mL的溶液，分別10μL，按“（1）”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，以濃度（X）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得補(bǔ)骨脂素標(biāo)準(zhǔn)品回歸方程為Y=0.838X+0.116，R2=0.999;線性范圍為9.4～198.5μg/mL。

（5）精密度試驗(yàn)。取“（2）”項(xiàng)下對(duì)照品溶液10μL，注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，重復(fù)測(cè)定6次，峰面積分別為42.159、43.106、42.841、41.984、42.562、42.618，RSD為0.98%，表明儀器的精密度良好。

（6）穩(wěn)定性試驗(yàn)。取第8號(hào)樣品，按“（3）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“（1）”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、1、2、3、8、12、24h時(shí)測(cè)定峰面積，為49.203、50.541、49.956、50.025、50.952、49.991、50.124，RSD為1.08%，結(jié)果表明補(bǔ)骨脂素在24h內(nèi)測(cè)定，穩(wěn)定性良好。

（7）重復(fù)性試驗(yàn)。取第8號(hào)樣品6份，按“（3）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“（1）”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，峰面積為49.203、49.985、50.125、50.518、49.251、50.458，RSD為1.15%，表明該方法重復(fù)性良好。

（8）加樣回收試驗(yàn)。取已測(cè)定補(bǔ)骨脂素含量的第8號(hào)五指毛桃樣品9份，每份0.3g，其中3份分別精密加入“（2）”項(xiàng)下對(duì)照品溶液5mL，另外3份分別精密加入“（2）”項(xiàng)下對(duì)照品溶液8mL，剩下3份分別精密加入“（2）”項(xiàng)下對(duì)照品溶液10mL，按“（3）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“（1）”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)行測(cè)定，分別計(jì)算低、中、高濃度組樣品的加樣回收率和RSD。結(jié)果顯示，低濃度組平均加樣回收率為100.09%，RSD為1.19%;中濃度組平均加樣回收率為99.88%，RSD為0.50%;高濃度組平均加樣回收率為99.85%，RSD為0.22%，這說(shuō)明了此方法中補(bǔ)骨脂素的加樣回收率良好。

（9）樣品測(cè)定。分別取五指毛桃粗粉，按“（3）”項(xiàng)下方法每批樣品平行制備供試品溶液2份，按“（1）”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，利用“（4）”項(xiàng)下建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算五指毛桃樣品中補(bǔ)骨脂素的含量，結(jié)果見表1。

3? 結(jié)論

補(bǔ)骨脂素是五指毛桃的主要活性成分之一，具有抗菌、抗病毒、抗凝血、抑制腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等作用，該研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂素在五指毛桃中含量較高，穩(wěn)定性好，可作為制定五指毛桃質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)性成分。五指毛桃藥材中補(bǔ)骨脂素的HPLC分析方法結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為五指毛桃藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。

4? 討論

該研究測(cè)定了廣東省15個(gè)不同地區(qū)五指毛桃中補(bǔ)骨脂素的含量，發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)的五指毛桃中的補(bǔ)骨脂素含量差別較大，在制定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)加大樣本量進(jìn)行研究，并進(jìn)一步研究不同生長(zhǎng)時(shí)期對(duì)補(bǔ)骨脂素含量的影響。

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