小反芻獸疫病毒分子生物學(xué)及其疫苗研究進(jìn)展

董丹丹，劉 騰，繆秋紅，朱 杰，張 莉,2，殷冬冬，唐井玉，李傳峰，陳宗艷，劉光清

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海200241；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，合肥 230036）

小反芻獸疫（Peste des petits ruminants，PPR），又名羊瘟、偽牛瘟等，是由小反芻獸疫病毒（Peste des petits ruminants virus，PPRV）引起的一種急性病毒性傳染病，主要感染綿羊和山羊[1]，其特征是發(fā)病急劇，眼鼻分泌物增加，口腔糜爛，腹瀉和肺炎等。目前PPR在許多國家呈地方性流行并造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

1 小反芻獸疫概況

1942年，小反芻獸疫首次發(fā)現(xiàn)于西非的科特迪瓦[2]，由于其臨床癥狀和病理變化與牛瘟相似，所以起初被認(rèn)為是牛瘟的變種。直到1979年，Gibbs等[2]證實(shí)PPRV是副黏病毒科、麻疹病毒屬中不同于牛瘟病毒的新成員。2007年中國西藏阿里地區(qū)首次出現(xiàn)PPR病例，隨后又有幾次地方性流行。

PPRV只有一個(gè)血清型，根據(jù)N基因序列可將其分為4個(gè)譜系，即譜系Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ[3]。譜系Ⅰ和Ⅱ主要從西非一些國家分離得到，而西非正是PPRV的發(fā)源地。譜系Ⅲ僅限于非洲東部和中東地區(qū)，譜系Ⅳ被認(rèn)為是由新出現(xiàn)病毒組成的新譜系。有研究發(fā)現(xiàn)，譜系Ⅳ正逐漸取代其他譜系，成為PPR流行國家的優(yōu)勢(shì)譜系。

2 小反芻獸疫病原學(xué)

2.1 PPRV基因組結(jié)構(gòu) PPRV為副黏病毒科、麻疹病毒屬成員。病毒粒子呈多形性，多為粗糙的球形，平均直徑為400～500 nm。PPRV的基因組由1條單股負(fù)鏈RNA分子組成，大小為15 948 nt[4]，含有6個(gè)轉(zhuǎn)錄單位，編碼6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白和2個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白：核衣殼蛋白（N）、磷蛋白（P）、基質(zhì)蛋白（M）、融合蛋白（F）、血凝素蛋白（HN）和大蛋白（L），以及2個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白C和V（圖1）。

2.2 PPRV基因組長度“六堿基規(guī)則” 研究表明麻疹病毒屬所有成員都有一個(gè)典型特征：基因組長度是6的倍數(shù)。PPRV基因組同樣符合“六堿基規(guī)則”。有一種解釋為每個(gè)N蛋白能與6個(gè)核苷酸結(jié)合，病毒基因組符合6的倍數(shù)能夠保證N蛋白與病毒RNA的完全結(jié)合[6]。最近研究表明PPRV服從六堿基率，但也具有一定的靈活性[7]。PPRV通過一個(gè)未知的機(jī)制進(jìn)行轉(zhuǎn)錄復(fù)制，使得基因組長度能夠適應(yīng)一些偏差，如+1、+2和-1。

2.3 PPRV編碼蛋白的功能

2.3.1 核衣殼蛋白（N） N蛋白是主要的結(jié)構(gòu)蛋白之一，特別是在不分段的負(fù)鏈RNA病毒中。N蛋白雖然不能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)病毒的保護(hù)性免疫，但是含量最多，免疫原性最高，因此在臨床診斷中被廣泛的使用。PPRV N蛋白的ORF起始于核苷酸位點(diǎn)108（UAC），終止于1685位點(diǎn)（AUU），經(jīng)翻譯產(chǎn)生的N蛋白大小為58 kDa。最近Dechamma等[8]確定了PPRV N蛋白的最高免疫活性區(qū)（氨基酸位點(diǎn)452～472）。

圖1 小反芻獸疫病毒結(jié)構(gòu)示意圖[5]Fig. 1 Schematic diagram of peste des petits ruminants virus (PPRV) structure[5]

根據(jù)PPRV N基因序列相似性將N蛋白劃分為四個(gè)區(qū)域。區(qū)域1（氨基酸位點(diǎn)為1～220）相當(dāng)保守，在整個(gè)譜系中具有75%～83%的一致性，而區(qū)域2（氨基酸位點(diǎn)為122～145）僅有40%的一致性。區(qū)域3（氨基酸位點(diǎn)為146～398)和區(qū)域4（氨基酸位點(diǎn)為421～525）的保守性分別最高和最低。Choi等[9]研究表明PPRV N蛋白的區(qū)域1和區(qū)域2 比區(qū)域3、區(qū)域4具有更高的免疫原性，這一結(jié)果與麻疹病毒屬其他病毒（人麻疹病毒和牛瘟病毒）結(jié)果相符。此外，針對(duì)區(qū)域1的體液免疫反應(yīng)發(fā)生要早于區(qū)域2?，F(xiàn)在N蛋白被認(rèn)為是在麻疹病毒屬中主要的交叉反應(yīng)性抗原。

N蛋白在多個(gè)階段影響著副粘病毒科病毒的生活史：與M蛋白一起促進(jìn)病毒的組裝，促使基因組RNA殼體化，在病毒的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程中參與P-L聚合酶復(fù)合物的形成。Servan等[10]通過沉默N基因發(fā)現(xiàn)N蛋白在PPRV的復(fù)制過程中發(fā)揮著重要的作用。他們進(jìn)一步揭示，抑制N蛋白的表達(dá)也會(huì)降低M蛋白的產(chǎn)量。Keita等[11]進(jìn)一步縮小N基因的活性位點(diǎn)為5'RRWYYDRNUGGUUYGRG3'基序（R代表A/G，W代表A/U，Y代表C/U，D代表G/A，N代表任何堿基），沉默該基序后會(huì)抑制PPRV、RPV和MV的N基因轉(zhuǎn)錄。具體來說，這段基序（RINWFEN）在PPRV中位于N蛋白的143～149氨基酸位點(diǎn)。中間部分（NWF）在所有毒株中都是保守的。

在麻疹病毒中，N蛋白可分為兩部分，即Ncore和Ntial。Ncore為420個(gè)氨基酸，在麻疹病毒和PPRV中都非常保守，可能反映了Ncore在核酸衣殼組裝過程中至關(guān)重要。Ntial是一個(gè)大小為12 kDa的C端區(qū)域（CTD)，在麻疹病毒和PPRV中保守性相對(duì)較低。CTD的488～499位點(diǎn)氨基酸主要負(fù)責(zé)N蛋白與其他病毒蛋白的互作[12]。CTD暴露于N蛋白的表面并且很容易經(jīng)胰酶消化后清除。在麻疹病毒中，盡管Ntial被移除，Ncore仍然具有在麻疹病毒中生成核衣殼樣結(jié)構(gòu)的能力[13]。Karlin等[12]發(fā)現(xiàn)將麻疹病毒228位絲氨酸和229位點(diǎn)的亮氨酸突變后，N蛋白的自我交聯(lián)能力受損且不能包裝RNA，表明MV N蛋白可能通過自我交聯(lián)產(chǎn)生參與RNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)。麻疹病毒N蛋白可以和宿主調(diào)節(jié)蛋白（Hsp72、IRF3和細(xì)胞表面受體）相互作用，表明了N蛋白在病毒復(fù)制和細(xì)胞嗜性中的作用[14]。

N蛋白和P蛋白結(jié)合到病毒基因組的前導(dǎo)和尾隨部分起始病毒基因組組裝，隨后進(jìn)行N-N交聯(lián)和N-RNA相互作用。目前已經(jīng)證明了兩個(gè)區(qū)域，其中一個(gè)位于N端（1～120），另一個(gè)位于中間區(qū)域（146～241），它們均負(fù)責(zé)PPRV的N-N自我組裝。研究人員進(jìn)一步證實(shí)N蛋白121～145氨基酸的短片段對(duì)核衣殼結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性起重要作用，這個(gè)區(qū)域在麻疹病毒屬中非常保守[15]。

2.3.2 磷蛋白（P） 在PPRV中1807～3333氨基酸編碼P蛋白，翻譯產(chǎn)生分子大小約為60 kDa的蛋白，但是從感染細(xì)胞中提取的P蛋白經(jīng)SDS-PAGE鑒定的分子大小為79 kDa[16]。麻疹病毒屬中P蛋白的大小在72～86 kDa間的變化主要是由它的酸性堿基及翻譯后磷酸化引起的[16]。Netphos 2.0預(yù)測(cè)有5個(gè)潛在的磷酸化位點(diǎn)[17]，并且這些位點(diǎn)在麻疹病毒屬中都很保守。在PPRV中4個(gè)氨基酸位點(diǎn)同樣也是保守的，它們分別是151、307、361、470，但是348位點(diǎn)處蘇氨酸代替了絲氨酸。P蛋白磷酸化功能的重要性尚不完全明確。

P蛋白是L-聚合酶復(fù)合物的重要組成部分，并且可能是麻疹病毒跨物種致病性的關(guān)鍵因素[18]。盡管P蛋白在麻疹病毒復(fù)制中發(fā)揮重要作用，但其在PPRV復(fù)制和致病性方面的作用仍有待進(jìn)一步研究。

2.3.3 基質(zhì)蛋白（M） M蛋白開放閱讀框的核苷酸位點(diǎn)在3438～4442nt，被翻譯為含有335個(gè)氨基酸的蛋白，預(yù)測(cè)分子量大小為37.8 kDa。M蛋白也與N蛋白及H與F蛋白的胞質(zhì)尾端相互作用[19]。最近在同科病毒的尼帕病毒中發(fā)現(xiàn)了一種名為FMYL基序，該基序位于50～53位點(diǎn)，并對(duì)M蛋白定位于細(xì)胞膜及出芽過程至關(guān)重要[20]。在M基因與F基因連接處存在一個(gè)長為1080 nt的非保守UTR，該序列包含M基因的末端和F基因的起始端且富含GC。這個(gè)區(qū)域的功能相關(guān)性還未被解釋清楚，但是Takeda等[21]的研究表明MV M蛋白的長鏈3'UTR具有上調(diào)M蛋白的功能，而F基因的長鏈5'UTR可以降低F蛋白的表達(dá)量。

2.3.4 融合蛋白（F） F基因在PPRV毒株中非常保守，編碼由546個(gè)氨基酸組成的富含GC的蛋白，預(yù)測(cè)分子量大小為59.137 kDa。這種高水平的序列保守性可以解釋麻疹病毒屬中不同成員之間存在的廣泛交叉保護(hù)，例如針對(duì)RPV的疫苗可以使動(dòng)物產(chǎn)生抗PPRV的免疫力。副粘病毒科間F基因序列同源性也解釋了常見的融合性質(zhì)和基于F蛋白的保守生物學(xué)活性。在麻疹病毒中，F(xiàn)蛋白在H蛋白的幫助下介導(dǎo)病毒囊膜在細(xì)胞表面與胞膜融合，從而使病毒進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞，隨后病毒基因組獲得了進(jìn)入宿主細(xì)胞的通道[22]。

無活性的前體F0是決定副粘病毒毒力的關(guān)鍵分子之一，主要依賴于裂解位點(diǎn)的氨基酸序列及胞內(nèi)蛋白酶裂解F蛋白的能力。盡管這種裂解能力對(duì)于病毒的組裝并不重要，但它是病毒感染性和發(fā)病機(jī)理的先決條件[23]。F0轉(zhuǎn)錄后蛋白酶裂解產(chǎn)生兩個(gè)通過二硫鍵相連的活性亞基F1和F2。F0蛋白序列分析表明麻疹病毒中除了兩個(gè)可變疏水區(qū)外具有很強(qiáng)的保守性。N端第一個(gè)區(qū)域負(fù)責(zé)將蛋白質(zhì)帶到粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上進(jìn)行翻譯，而第二個(gè)區(qū)域（C端）與蛋白錨定在膜上有關(guān)。后者被認(rèn)為停留在細(xì)胞膜的細(xì)胞質(zhì)一側(cè)，并與M蛋白互作從而促進(jìn)病毒出芽，因?yàn)榇藚^(qū)域突變后導(dǎo)致病毒產(chǎn)量下降[24]。這些區(qū)域在所有的PPRV毒株中都具有高度的保守性。在副粘病毒中，F(xiàn)1的膜錨定亞基包含4個(gè)保守基序：N端融合肽（FP）、HR1、HR2和跨膜區(qū)（TM）。在PPRV中，HR1-HR2復(fù)合物的3D結(jié)構(gòu)顯示HR2和HR1異二聚體覆蓋了HR1三聚體的內(nèi)核，從而形成了一個(gè)六螺旋束。FP區(qū)域錨定在膜上，HR區(qū)域的降解導(dǎo)致胞膜與病毒囊膜的距離拉近，從而促使它們的膜融合[25]。因?yàn)槿鏢V5、NDV和PPRV的大多數(shù)副粘病毒都攜帶這些HR結(jié)構(gòu)，推測(cè)它們含有共同的融合機(jī)制。在副粘病毒中F蛋白包含1個(gè)亮氨酸拉鏈基序，在PPRV中位于459～480氨基酸位點(diǎn)并且較為保守。該基序通過未知的機(jī)制負(fù)責(zé)F蛋白的寡聚化和融合功能[26]。

和所有膜相關(guān)蛋白一樣，F(xiàn)蛋白進(jìn)行潛在的糖基化。在這個(gè)轉(zhuǎn)錄后修飾過程中，添加寡糖側(cè)鏈對(duì)于F蛋白運(yùn)輸至細(xì)胞表面并保持其膜融合功能及完整性至關(guān)重要。所有麻疹病毒屬成員成熟F蛋白的F2亞基上都包含一個(gè)保守的NXS／T（X代表任何氨基酸）糖基化位點(diǎn)[24]。PPRV中有3個(gè)糖基化位點(diǎn)NLS、NIT和NCT，氨基酸位點(diǎn)分別為25～27、57～59、63～65，它們的功能有待進(jìn)一步研究。

2.3.5 血凝素蛋白(HN) HN蛋白或者H蛋白是麻疹病毒中保守性最差的蛋白質(zhì)之一。RPV和PPRV的氨基酸一致性僅為50%。這些差異可能反映了宿主體液免疫反應(yīng)主要針對(duì)HN蛋白以及細(xì)胞嗜性的特異性。PPRV Nigeria 75/1 H蛋白的ORF為7326～9152 nt，編碼大小為67kDa的HN蛋白。在麻疹病毒中，H蛋白介導(dǎo)病毒結(jié)合到宿主細(xì)胞受體是病毒感染增殖的第一步。H蛋白是麻疹病毒中細(xì)胞嗜性的決定因素，也是兔化牛瘟病毒跨種致病的主要原因[27]，表明H蛋白是麻疹病毒屬中重要的抗原決定簇。

麻疹病毒野生毒株和疫苗株都利用SLAM（信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)淋巴細(xì)胞激活分子，也稱CD150）作為細(xì)胞表面受體[28]，而適應(yīng)組織培養(yǎng)的疫苗株可利用CD46作為細(xì)胞表面受體。盡管鼠源SLAM與人源SLAM有較高的結(jié)構(gòu)和功能相似性（氨基酸相似性為60%），但卻不能作為麻疹病毒受體。普遍認(rèn)為58～67氨基酸位點(diǎn)的保守性基序是導(dǎo)致人源與鼠源SLAM受體差異的關(guān)鍵[29]。有研究表明7個(gè)殘基對(duì)人源SLAM和麻疹病毒之間的相互作用至關(guān)重要，其中6個(gè)（Y529、D530、R533、F552、Y553和P554）在PPRV中是保守的[30]。Pawar等[31]研究結(jié)果與上述結(jié)果一致，他們通過siRNA技術(shù)證實(shí)SLAM可以作為PPRV的共受體。

在某些副粘病毒中，糖蛋白不僅發(fā)揮血球凝集的作用，還發(fā)揮神經(jīng)氨酸酶功能。然而麻疹病毒屬中只有 MV和PPRV具有血球凝集功能[32]。目前普遍認(rèn)為麻疹病毒屬中（特別是PPRV）HN蛋白不僅負(fù)責(zé)病毒吸附在細(xì)胞表面及紅細(xì)胞凝集，還具有神經(jīng)氨酸酶功能。

2.3.6 大蛋白（L） PPRV L蛋白長度為2183個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分子量為247.3 kDa。L蛋白質(zhì)和P蛋白共同發(fā)揮RNA依賴的RNA聚合酶活性，負(fù)責(zé)基因組RNA的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制，包括起始、延伸和終止。L蛋白還有對(duì)病毒mRNA進(jìn)行加帽、甲基化和多聚腺苷酸化的作用。研究表明，L蛋白質(zhì)由3個(gè)保守結(jié)構(gòu)域組成，每個(gè)區(qū)域具有不同的功能[33-34]。這3個(gè)區(qū)域中，前2個(gè)帶正電，第3個(gè)帶負(fù)電。N端域（氨基酸1～606）攜帶1個(gè)RNA結(jié)合基序KEXXRLXXKMXXKM（X代表任何一個(gè)氨基酸），該基序高度疏水，被賴氨酸有節(jié)奏的隔開。第二個(gè)結(jié)構(gòu)域（氨基酸650～1694）含有兩個(gè)基序，分別位于771（QGDNQ）和1464（GDDD），這兩個(gè)區(qū)域被認(rèn)為與RNA聚合酶功能位點(diǎn)有關(guān)[35]。第三個(gè)區(qū)域不僅攜帶ATP結(jié)合位點(diǎn)（氨基酸1788），而且行使激酶活性功能[35]。

2.3.7 C蛋白 PPRV的C蛋白是由117個(gè)殘基組成的短蛋白，預(yù)測(cè)分子量為20.11 kDa。最近有研究表明RPV的C蛋白可以抑制干擾素β的產(chǎn)生[36]，但其分子機(jī)制有待探索，很可能是由于C蛋白抑制了干擾素β增強(qiáng)子生成所需的轉(zhuǎn)錄因子的激活。C蛋白已被證實(shí)是MV感染[37]和RPV增長[38]的一個(gè)毒力因子，但PPRV中C蛋白的生物學(xué)功能了解很少，有待進(jìn)一步研究。

2.3.8 V蛋白 在麻疹病毒屬中V蛋白的長度是不同的。PPRV中含有298個(gè)氨基酸，而CDV和RP有299個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)V蛋白分子量為 32.28 kDa。有研究表明V蛋白與N和L蛋白有關(guān)，這一發(fā)現(xiàn)表明V蛋白參與調(diào)控病毒RNA的合成[39]。雖然V蛋白的具體功能還不明確，但是Tober等[40]發(fā)現(xiàn)缺乏V蛋白能夠增加病毒復(fù)制，表明V蛋白在轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮作用。V蛋白在天然免疫方面的研究相對(duì)透徹。大多數(shù)副粘病毒都具有抵抗干擾素的作用，但是不同病毒間的抵抗機(jī)制及其涉及的相關(guān)蛋白又有所差異。值得注意的是，缺乏V蛋白或共半胱氨酸富含區(qū)的重組病毒在體內(nèi)都會(huì)出現(xiàn)體內(nèi)增長減緩，這可能是由于其對(duì)抗干擾素的功能所致[41]。

3 PPRV的復(fù)制機(jī)理

PPRV首先通過HN蛋白與細(xì)胞表面受體（SLAM或其他未明確的受體）結(jié)合，引起F蛋白構(gòu)象發(fā)生改變并釋放融合肽，導(dǎo)致病毒包膜與細(xì)胞膜發(fā)生融合，釋放螺旋化的核衣殼到胞質(zhì)中，從而開始病毒的轉(zhuǎn)錄，此時(shí)L蛋白作為依賴于RNA的RNA聚合酶啟動(dòng)mRNA的合成。PPRV復(fù)制過程也需要其他蛋白參與。簡(jiǎn)單的說，P蛋白調(diào)控N蛋白的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制及組裝成核衣殼的過程，M蛋白介導(dǎo)病毒組裝過程，HN蛋白發(fā)揮神經(jīng)氨酸酶作用，可促進(jìn)病毒的出芽過程。病毒基因組拷貝由小基因組通過復(fù)制中間體生成。PPRV中C和V蛋白的功能尚不清楚，據(jù)說這些蛋白能夠消除胞內(nèi)干擾素（IFN-α/β）反應(yīng)，因此在PPRV毒力方面有所貢獻(xiàn)。

4 PPR疫苗研究進(jìn)展

由于麻疹病毒間功能和結(jié)構(gòu)上的相似性，已研發(fā)出的或正在研發(fā)的PPRV的疫苗的策略與其他麻疹病毒相同。PPRV的疫苗已經(jīng)取得了重大進(jìn)展，可以簡(jiǎn)單地分為4類。

4.1 弱毒疫苗

4.1.1 異源PPRV弱毒疫苗 由于PPRV與RPV有較高同源性，因此組織培養(yǎng)的RPV Kabete O株疫苗曾廣泛用于PPR的防控[42]。該疫苗具有良好的免疫效果，但隨著全球牛瘟根除計(jì)劃的實(shí)施，現(xiàn)已被禁止使用。

4.1.2 同源PPRV弱毒疫苗 目前應(yīng)用較廣的PPRV弱毒疫苗為 Nigeria75/1弱毒疫苗和 Sungri/96 弱毒疫苗。Nigeria 75/1 是通過 Vero 細(xì)胞連續(xù)傳代研制出的弱毒疫苗，該疫苗對(duì)免疫接種動(dòng)物不但具有抗PPRV的保護(hù)作用，并且也有抗RPV的保護(hù)作用。第二個(gè)成功弱化的PPRV病毒是Sungri/96，該病毒從印度Sungri地區(qū)病死山羊中分離得到，此分離株在Vero細(xì)胞直接傳代56代后弱化[43]。

4.2 PPRV重組標(biāo)記疫苗

4.2.1 異源PPRV標(biāo)記疫苗 Romero等[44]研究表明包含RPV的H或F基因的重組山羊痘病毒建立了完整的抗PPRV的保護(hù)。盡管該疫苗可以保護(hù)動(dòng)物免受PPRV的感染，但它并沒有限制PPRV的早期復(fù)制。

4.2.2 同源PPRV標(biāo)記疫苗 由于目前缺乏良好的PPRV感染性克隆體系，于是RPV感染性克隆體系被用于開發(fā)PPRV標(biāo)記疫苗。Das等[45]構(gòu)建了F和HN基因被PPRV相應(yīng)基因取代的重組牛瘟病毒，此疫苗可以保護(hù)接種動(dòng)物免受PPRV的感染。

4.3 多價(jià)疫苗 由于PPRV可以與其他病毒發(fā)生并發(fā)感染，所以多價(jià)苗的開發(fā)迫在眉睫。Chaudhary等[46]已經(jīng)研制了針對(duì)綿羊痘（Romanian Fanar strain）和PPRV（Sungri/96 strain）的二價(jià)苗。這個(gè)二價(jià)苗可以保護(hù)動(dòng)物不受PPRV和綿羊痘的感染。多價(jià)苗的使用為疫苗接種帶來了便利，并且明顯降低了疫苗成本。

4.4 DIVA（區(qū)分自然感染與接種疫苗動(dòng)物）疫苗 傳統(tǒng)PPR疫苗具有諸多優(yōu)勢(shì)，但也存在一些缺陷：熱穩(wěn)定性較差；存在毒力返強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)；使用弱毒苗不能區(qū)分自然感染與人工免疫的動(dòng)物等。因此急需開發(fā)DIVA疫苗。最近，Buczkowski等[47]報(bào)道了一種標(biāo)記麻疹病毒屬疫苗的新機(jī)制，使用RPV進(jìn)行驗(yàn)證且討論了這種方法對(duì)于開發(fā)PPRV DIVA疫苗的適用性。

圖2 PPRV的生命周期[43]Fig.2 Life cycle of PPRV[43]

5 展望

近年來由于PPR疫情時(shí)有發(fā)生，引起了世界各國的廣泛關(guān)注，雖然PPR相關(guān)研究已取得些許進(jìn)展，但全球性消滅PPR的目標(biāo)還任重而道遠(yuǎn)。目前PPR相關(guān)研究急需解決以下問題：第一，高效反向遺傳系統(tǒng)有待建立：反向遺傳操作技術(shù)是指通過構(gòu)建病毒基因組cDNA克隆，在培養(yǎng)細(xì)胞或易感宿主中重新“拯救”病毒。通過基因插入或缺失等，進(jìn)行病毒基因功能研究和新型疫苗的研制。此外，反向遺傳技術(shù)也可用于蛋白質(zhì)與核酸之間的相互作用研究。小反芻獸疫病毒反向遺傳研究開展較晚。Bailey等[48]構(gòu)建了小反芻獸疫病毒Turkey 2000株微型基因組并驗(yàn)證其功能。我國研究者成功拯救了PPRV疫苗株Nigeria 75/1并進(jìn)行外源蛋白的表達(dá)[49]，但其拯救效率不高。第二，PPRV分子致病機(jī)制及其免疫調(diào)節(jié)機(jī)制有待研究：PPRV臨床評(píng)估取得了重大進(jìn)展，但其分子致病機(jī)制研究仍然匱乏。此外，PPRV的嗜神經(jīng)性也有待研究。目前最為重要的是闡明小反芻動(dòng)物提前產(chǎn)生針對(duì)PPRV N蛋白的機(jī)制，這或許是病毒特異性細(xì)胞免疫的主要目標(biāo)。此外，利用IFN-γ等細(xì)胞因子模擬類似反應(yīng)，也將有助于闡明PPRV免疫抑制與免疫調(diào)節(jié)的相關(guān)機(jī)制。