中西藥聯(lián)合降脂對(duì)腎動(dòng)脈粥樣硬化性高血壓大鼠炎癥反應(yīng)的影響

王宙，沈靜，劉洋，王天嬌，曲云鵬，秦智峰，季朝紅，張靜

腎動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄（ARAS）是引起繼發(fā)性高血壓最常見的病因之一。動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，各種理化因素所致的內(nèi)皮損傷被認(rèn)為是其發(fā)生發(fā)展的始動(dòng)因素[1]，其中尤以血脂異常最為常見，也最易可控。有研究發(fā)現(xiàn)，高脂血癥與炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化及動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[2]。目前，對(duì)于ARAS性高血壓的治療主要有三種方式：藥物治療、介入治療、外科手術(shù)治療[3,4]。據(jù)報(bào)道，抑制炎癥反應(yīng)可控制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展[4,5]。藥物治療通過(guò)使用他汀類藥物降低血脂，抑制動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)炎癥反應(yīng)，從而達(dá)到穩(wěn)定或者逆轉(zhuǎn)粥樣硬化斑塊的作用。有研究證實(shí)，小劑量瑞舒伐他汀聯(lián)合血脂康可有效調(diào)節(jié)動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)因子，使血NO（一氧化氮）升高，ET-1（內(nèi)皮素-1）、髓過(guò)氧化物酶（MPO）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）顯著降低[6]，本實(shí)驗(yàn)旨在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探究中西藥聯(lián)合降脂對(duì)腎動(dòng)脈粥樣硬化性高血壓大鼠炎癥反應(yīng)的影響。

1 方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑6周齡雄性wistar大鼠60只，體重（210±10）g，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。瑞舒伐他汀由阿斯利康藥業(yè)（中國(guó)）有限公司生產(chǎn)；血脂康（北京北大維信生物科技有限公司）；高脂飼料的配制：3%膽固醇+0.5%膽酸鈉+0.2%丙硫氧嘧啶+10%豬油+5%白糖+基礎(chǔ)飼料；大鼠MMP-9抗體（萬(wàn)類生物科技有限公司）；大鼠MPO抗體（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）。

1.2 建立ARAS高血壓模型大鼠方法手術(shù)組大鼠（55只）采用兩腎一夾（2K1C）、平行針灸針縮窄法造模，并予腹腔注射VitD3 50萬(wàn)IU/kg 3 d及高脂喂養(yǎng)8周；假手術(shù)組（5只），只分離腎動(dòng)脈，未予狹窄，余操作同手術(shù)組。造模成功標(biāo)準(zhǔn)：喂養(yǎng)8周后隨機(jī)抽取T組大鼠5只及假手術(shù)組大鼠5只，使用powerlab測(cè)量大鼠血壓，手術(shù)組較假手術(shù)組大鼠平均血壓高20 mmHg以上/高于115mmHg。模型大鼠排除標(biāo)準(zhǔn)：因狹窄過(guò)度導(dǎo)致腎臟萎縮、壞死。

1.3 實(shí)驗(yàn)大鼠分組將造模成功的大鼠隨機(jī)分為5組，并按以下方案藥物灌胃：T1組：血脂康120 mg/kg/d；T2組：瑞舒伐他汀1 mg/kg/d；T3組：瑞舒伐他汀1 mg/kg/d+血脂康120 mg/kg/d；T4組：瑞舒伐他汀0.5 mg/kg/d+血脂康120 mg/kg/d；T0組：等體積的生理鹽水。藥物灌胃6周。

1.4 相應(yīng)指標(biāo)檢測(cè)藥物治療6周后腹主靜脈取血，而后處死大鼠，迅速分離主動(dòng)脈、腎臟，4%甲醛固定，石蠟包埋。血總膽固醇（TC）、三酰甘油（T G）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平由全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。

1.5 大鼠主動(dòng)脈及腎臟中MPO、MMP-9的表達(dá)將各組大鼠主動(dòng)脈、腎臟標(biāo)本切片后，SABC法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，而后經(jīng)計(jì)算機(jī)影像處理和Image-Pro plus 6.0分析系統(tǒng)進(jìn)行光密度分析，高倍鏡（a400）下選取切片，以各切片平均光密度值代表其陽(yáng)性程度。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，并運(yùn)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。方差齊則采用方差分析，方差不齊則采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 模型大鼠藥物干預(yù)后血脂的變化情況給予相應(yīng)的藥物干預(yù)后，各用藥組均可見TC、TG、LDL-C不同程度降低、HDL-C升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中T3、T4組血脂改善最明顯，但T4組較T3組組間比較未見明顯差異（P＞0.05）（表1）。

2.2 模型大鼠藥物干預(yù)后MPO、MMP在腎臟免疫組化中表達(dá)情況藥物干預(yù)后，各組MPO在腎臟組織中表達(dá)均可見不同程度的降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且聯(lián)合用藥組T3、T4下降最為明顯，T3組略優(yōu)于T4組，但差異不明顯（P＞0.05）。與T0組相比，T3、T4組MMP-9在腎臟組織中表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但兩組組間差異不明顯（P＞0.05）（表2，圖1～2）。

表1 各組大鼠藥物干預(yù)后TC、TG、HDL-C、LDL-C結(jié)果

表2 MPO、MMP-9在腎臟免疫組化中平均光密度值

2.3 模型大鼠藥物干預(yù)后MPO、MMP在主動(dòng)脈免疫組化中表達(dá)情況各用藥物MPO在主動(dòng)脈中表達(dá)均可見不同程度的降低，T2、T3、T4組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），T3、T4組下降最明顯，且無(wú)明顯差異。與T0組相比，T3、T4組MMP-9在主動(dòng)脈中表達(dá)下降明顯（P＜0.05），T3下降最明顯，但兩組無(wú)明顯差異（P＞0.05）（表3，圖3～4）。

圖1 MPO在腎臟免疫組化中的表達(dá)（×400）

圖2 MMP-9在腎臟免疫組化中的表達(dá)（×400）

3 討論

ARAS引起高血壓的機(jī)制非常復(fù)雜，主要與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)，單純使用降壓藥物治療高血壓療效較差，因此需要我們對(duì)其發(fā)病機(jī)制進(jìn)行深入了解，進(jìn)而制定更加合理的治療方案。他汀類藥物因其具有降低血脂、改善內(nèi)皮功能、減緩甚至逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣斑塊進(jìn)展及抗炎作用等多效性[5]，為我們尋求新的治療方案提供了新思路，然而何種他汀治療方案最為有效且使用量最小是本研究的重點(diǎn)。

他汀類藥物除具有降脂作用外，還主要通過(guò)抗炎作用發(fā)揮其多效性[7]。由于炎癥反應(yīng)與氧化應(yīng)激共同參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成[8]，因此，在這一過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的MPO成為了研究的熱點(diǎn)。已經(jīng)證實(shí)，MPO具有促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的作用，并能通過(guò)多種機(jī)制影響粥樣斑塊的穩(wěn)定性[9,10]。此外，MPO可激活MMPS（金屬基質(zhì)蛋白酶）酶原，使MMPS表達(dá)活性增強(qiáng)，MMPS可降解細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，其降解產(chǎn)物又產(chǎn)生趨化炎性細(xì)胞聚集的功能，加速AS的發(fā)展[6,11]。LDL-C是斑塊中的主要成分，可被氧化為OX-LDL,血管平滑肌細(xì)胞及巨噬細(xì)胞吞噬LDL變?yōu)榕菽?xì)胞，進(jìn)而產(chǎn)生大量活性物質(zhì)，使AS的進(jìn)展大大加快。他汀類藥物主要就依靠其降LDL-C而發(fā)揮其抗AS作用。MMP-9是一種影響粥樣斑塊穩(wěn)定性的主要鋅離子依賴性蛋白水解酶，主要由斑塊中單核-巨噬細(xì)胞及血管平滑肌細(xì)胞分泌，可降解細(xì)胞外基質(zhì)、 基底膜膠原，軟化斑塊表面纖維帽， 降低斑塊穩(wěn)定性[12]。據(jù)報(bào)道，他汀類藥物能降低MMP-9表達(dá)水平，阻止MMPS酶原激活為MMPS，從而穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊[6]。另外，有報(bào)道稱，瑞舒伐他汀在發(fā)揮降脂、抗炎、抗氧化、穩(wěn)定AS斑塊、逆轉(zhuǎn)AS發(fā)生發(fā)展等作用的同時(shí)，長(zhǎng)期大劑量的使用將會(huì)導(dǎo)致肝損害、橫紋肌溶解等不良反應(yīng)的發(fā)生[13]。因此，尋找一種有效且安全的他汀治療方案，成為了研究重點(diǎn)。

表3 MPO、MMP-9在主動(dòng)脈免疫組化中平均光密度值

血脂康是一種從特制紅曲中提取的含有天然他汀類元素的中成藥。其化學(xué)組分復(fù)雜，包含有多種必須氨基酸、不飽和脂肪酸、微量元素、麥角淄醇和少量黃酮類物質(zhì)[14]，兼具降低血脂、抑制MMP-9活性和抗炎作用等多種功效。據(jù)報(bào)道，血脂康可能主要通過(guò)以下2種機(jī)制發(fā)揮穩(wěn)定AS斑塊的作用[14]：①降低HMG-CoA還原酶活性，從而減少膽固醇的合成，并通過(guò)增加肝臟表面LDL-C受體表達(dá)，使血LDL的清除增加；②抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，減少ox-LDL的生成，抑制泡沫細(xì)胞的產(chǎn)生，減輕AS發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的炎癥反應(yīng)，保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞，從而延緩甚至逆轉(zhuǎn)AS的發(fā)生發(fā)展。

這些與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相切合，各用藥組血脂情況均有所改善，且中西藥聯(lián)合用藥組下降最明顯，普通劑量瑞舒伐他汀聯(lián)合血脂康組與小劑量瑞舒伐他汀聯(lián)合血脂康組兩組之間差異不大。在腎臟和主動(dòng)脈免疫組化中，各用藥組MPO、MMP-9表達(dá)較生理鹽水組均可見不同程度下降，而聯(lián)合用藥組下降最明顯，且普通劑量瑞舒伐他汀聯(lián)合血脂康組與小劑量瑞舒伐他汀聯(lián)合血脂康組兩組之間，未見明顯差異?？梢娭形麽t(yī)聯(lián)合用藥在減低瑞舒伐他汀用量的同時(shí)，亦能有效改善動(dòng)脈硬化中的炎癥反應(yīng)，降低了因長(zhǎng)期大量使用瑞舒伐他汀所致肝損傷、肌溶解等副反應(yīng)的可能性。

綜上所述，在ARAS性高血壓的治療中聯(lián)合應(yīng)用西藥瑞舒伐他汀與中藥血脂康，能有效改善血脂水平，減輕AS相關(guān)炎癥反應(yīng)，就這一點(diǎn)而言，中西藥聯(lián)合降脂治療在ARAS性高血壓未來(lái)的治療中，能得到更加廣泛地推廣及運(yùn)用。