大豆淫羊藿骨碎補(bǔ)片增加骨密度功能實(shí)驗(yàn)研究

禹珊珊，趙倩倩，高洋，高卓林，王瑩，金向群

（吉林大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春 130021）

骨質(zhì)疏松癥在中老年人群中發(fā)病率較高，是一種以骨密度降低、骨質(zhì)變薄、骨脆性增加和患者骨折率增加為主要特征的骨骼性疾病[1]。隨著社會(huì)老齡化的加劇，患骨質(zhì)疏松癥的人群逐漸增加，許多醫(yī)藥研究者都在致力于開(kāi)發(fā)一種預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥的藥物。因此，許多具有改善骨質(zhì)疏松功能的中藥保健品應(yīng)運(yùn)而生。大豆淫羊藿骨碎補(bǔ)片是由大豆、淫羊藿及骨碎補(bǔ)組成的復(fù)方制劑，它具有增加骨密度、預(yù)防骨質(zhì)疏松的功能。本實(shí)驗(yàn)對(duì)大豆淫羊藿骨碎補(bǔ)片進(jìn)行了增加骨密度的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

動(dòng)物數(shù)量與標(biāo)準(zhǔn)：60 只SD 雌性大鼠，SPF 級(jí)，體重240～279 g，購(gòu)自上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬）2013-0006，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（滬）2013-0008。

動(dòng)物飼養(yǎng)條件：飼養(yǎng)室相對(duì)濕度為40%～53%，溫度為20 ℃～24 ℃；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠所用的基礎(chǔ)飼料由上海福貝寵物有限公司提供，登記證號(hào)：滬飼證（2014）04002。

1.2 材料與試劑

大豆淫羊藿骨碎補(bǔ)片（長(zhǎng)春英平藥業(yè)有限公司，規(guī)格0.6 g/片，批號(hào)：20161116）。

硝酸、高氯酸、2%氧化鑭鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液（配制成鈣含量為500g/mL 的溶液）。

1.3 儀器

PL3002 型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；ACS-3A型電子秤（上海太和衡器廠）；AA-300 型原子吸收分光光度計(jì)（鉑金埃爾默公司）；Discovery-wi型雙能X 線(xiàn)骨密度儀（美國(guó)Hologic 公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 骨密度和骨鈣含量測(cè)定試驗(yàn)

將60 只大鼠分于12 個(gè)籠內(nèi)，每籠飼養(yǎng)5 只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中（包括適應(yīng)性飼養(yǎng)階段）大鼠飲用去離子水。

對(duì)50 只大鼠進(jìn)行去勢(shì)手術(shù)處理：用戊巴比妥鈉溶液按照30 mg/kg的劑量對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉，去除大鼠背部肋脊角處的毛，用碘伏進(jìn)行消毒處理，將雙側(cè)卵巢切除。其余10 只大鼠作為假手術(shù)對(duì)照組，并做相應(yīng)的假手術(shù)處理：大鼠按照去勢(shì)手術(shù)方法處理，但保留雙側(cè)卵巢，僅切除部分脂肪。

大鼠去勢(shì)后，按照體重隨機(jī)分組，每組10 只，共5組：陽(yáng)性對(duì)照組、模型對(duì)照組、大豆淫羊藿骨碎補(bǔ)片低、中、高劑量組。假手術(shù)對(duì)照組和模型對(duì)照組大鼠均用去離子水灌胃；陽(yáng)性對(duì)照組大鼠用1.0 mg/kg的雌二醇灌胃；低、中、高3 個(gè)劑量組分別用人體推薦劑量的5倍（0.2 g/kg）、10 倍（0.4 g/kg）、30 倍（1.2 g/kg）的大豆淫羊藿骨碎補(bǔ)片供試液灌胃。以上各組每天灌胃1次，灌胃容量為10 mL/kg，連續(xù)12 周。每周記錄大鼠體重。12 周之后，處死大鼠，把各組大鼠右側(cè)的股骨分離出來(lái)，烘干至恒重并稱(chēng)量，記錄各組大鼠的股骨干重。測(cè)量各組股骨遠(yuǎn)心端和股骨中點(diǎn)的骨密度。骨密度測(cè)完后，股骨經(jīng)消化后利用原子吸收法進(jìn)行骨鈣含量的測(cè)定。

2.2 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)

對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理統(tǒng)計(jì)，采用SPSS22.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)的方差齊性進(jìn)行檢驗(yàn)，采用單因素方差分析對(duì)方差齊性數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)差異后，用Dunnett 法進(jìn)行多個(gè)劑量組與1 個(gè)對(duì)照組均數(shù)間比較。而對(duì)于方差不齊的數(shù)據(jù)，用Dunnett T3 檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。P ＜0.05，差異有顯著性。

3 結(jié)果

3.1 實(shí)驗(yàn)各組對(duì)大鼠體重的影響

模型對(duì)照組從第1 周末開(kāi)始，體重和體重增重均明顯高于假手術(shù)對(duì)照組（P ＜0.05），可以說(shuō)明大鼠骨密度低下模型造模成功。大鼠體重異常變化的原因可能是大鼠的卵巢被切除后，雌激素迅速減少，進(jìn)而引起激素水平紊亂而導(dǎo)致的。與模型對(duì)照組相比，陽(yáng)性對(duì)照組和假手術(shù)對(duì)照組每周體重和體重增重均顯著降低（P＜0.05），而后兩者變化無(wú)明顯差異；大豆淫羊藿骨碎補(bǔ)低、中、高劑量組初始體重、每周體重和試驗(yàn)?zāi)w重增重均無(wú)顯著性差異（P ＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 實(shí)驗(yàn)各組對(duì)大鼠體重的影響Table 1 Effect of every experimental group on body weight of rats

續(xù)表1

3.2 實(shí)驗(yàn)各組對(duì)大鼠股骨的干重、骨鈣含量及骨密度的影響

由表2 可見(jiàn)，假手術(shù)對(duì)照組與模型對(duì)照組相比，前者的骨鈣含量和骨密度均顯著高于后者（P ＜0.05），證明大鼠骨密度低下的模型造模成功；與模型對(duì)照組相比，大豆淫羊藿骨碎補(bǔ)片中、低劑量組的骨鈣含量和骨密度值均無(wú)顯著性差異（P ＞0.05），高劑量組中兩者均有顯著增加（P ＜0.05）；所有劑量組的股骨干重與模型對(duì)照組比較均未見(jiàn)明顯差異（P ＞0.05）。

表2 實(shí)驗(yàn)各組對(duì)大鼠股骨的重量、骨鈣及骨密度的影響Table 2 Effects of every experimental group on femur weight,bone calcium and bone mineral density in rats

4 結(jié)論

大豆淫羊藿骨碎補(bǔ)片選用大豆、淫羊藿、骨碎補(bǔ)為原料，是專(zhuān)為骨質(zhì)疏松人群設(shè)計(jì)的一種具有增加骨密度、改善骨質(zhì)疏松癥功能的保健型片劑。本實(shí)驗(yàn)表明，大豆淫羊藿骨碎補(bǔ)片具有增加大鼠骨密度和骨鈣含量的作用。

臨床上利用飲食調(diào)節(jié)、運(yùn)動(dòng)和藥物（鈣劑、氟化物、激素等）[2]等常規(guī)方式對(duì)骨質(zhì)疏松的治療雖然起效，但卻存在各種（諸如骨硬化、便秘等）不良反應(yīng)。近年來(lái)，更多的醫(yī)、藥學(xué)研究者致力于研究采用中藥治療骨質(zhì)疏松并取得良好的效果[3-5]。大豆中的大豆異黃酮能夠促進(jìn)大鼠成骨細(xì)胞的增殖[6]；淫羊藿中的淫羊藿苷可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的生長(zhǎng)[7]，并抑制破骨細(xì)胞的生成[8]；骨碎補(bǔ)也可促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖并抑制破骨細(xì)胞對(duì)骨的吸收[9]。大豆淫羊藿骨碎補(bǔ)片以大豆、淫羊藿、骨碎補(bǔ)三味中藥材為主要原料，起到了很好的治療骨質(zhì)疏松、增加骨密度的作用，具有良好的開(kāi)發(fā)前景。