傳染性法氏囊病炎癥反應(yīng)的誘因：巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制因子

傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV)屬于雙RNA病毒科，雙RNA病毒屬。該病于1957年發(fā)現(xiàn)于美國(guó)特拉華州甘步羅地區(qū)，因此又被稱作甘步羅病。根據(jù)IBDV的致病性及抗原變異分析，可將其分為經(jīng)典毒株、抗原變異株、超強(qiáng)病毒株及弱毒株。IBDV超強(qiáng)病毒株感染主要導(dǎo)致法氏囊損傷及免疫抑制，然而該病毒具體的致病機(jī)理仍未完全明確。

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所禽免疫抑制病創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)近期發(fā)表在《Frontiers in microbiology》的一項(xiàng)研究對(duì)于傳染性法氏囊病炎癥反應(yīng)的誘因進(jìn)行了一系列研究。該團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)IBDV超強(qiáng)病毒(vvIBDV)可以通過促進(jìn)靶細(xì)胞分泌巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制因子(MIF)，從而介導(dǎo)炎癥細(xì)胞的遷移及核心炎癥因子IL-1β及IL-18在巨噬細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)上調(diào)。

該團(tuán)隊(duì)以vvIBDV Gx株為主要研究對(duì)象，將Gx株感染SPF雞后發(fā)現(xiàn)其可以導(dǎo)致法氏囊中單核巨噬細(xì)胞及異嗜性細(xì)胞的遷移，同時(shí)這兩種細(xì)胞中IL-1β和IL-18的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。為了探究vvIBDV導(dǎo)致上述炎癥反應(yīng)的原因，該研究利用iTRAQ試驗(yàn)篩選到Gx株感染靶細(xì)胞后相比于人工致弱株感染該細(xì)胞后顯著上調(diào)的炎癥相關(guān)蛋白-MIF分子。為了驗(yàn)證篩選結(jié)果，將Gx株感染SPF雞后檢測(cè)MIF在法氏囊組織中的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)水平，結(jié)果顯示感染組與對(duì)照組相比，前者M(jìn)IF的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)水平均顯著上調(diào)。由于MIF分子主要分泌至細(xì)胞外起促炎癥作用，為了檢測(cè)Gx株感染是否上調(diào)MIF的分泌水平，將Gx株感染DT40細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞系)及法氏囊原代B淋巴細(xì)胞并檢測(cè)二者上清中MIF的分泌情況，結(jié)果顯示兩種細(xì)胞感染組MIF分泌水平在感染早期均顯著上調(diào)。

為了確定vvIBDV感染導(dǎo)致靶細(xì)胞分泌的MIF是否具有促進(jìn)炎癥細(xì)胞遷移的作用，首先通過Transwell試驗(yàn)證實(shí)了MIF蛋白或Gx感染的DT40細(xì)胞上清可以促進(jìn)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的遷移。利用MIF多種抑制劑及MIF抗體處理Gx感染的DT40細(xì)胞上清可以抑制vvIBDV感染的DT40細(xì)胞上清對(duì)PBMC遷移的促進(jìn)作用，表明Gx株感染DT40細(xì)胞后通過分泌MIF促進(jìn)PBMC的遷移。

為了確定被vvIBDV感染的靶細(xì)胞分泌的MIF是否具有促細(xì)胞中IL-1β和IL-18上調(diào)的功能，首先通過qPCR檢測(cè)Gx株感染的DT40細(xì)胞上清或MIF蛋白處理的巨噬細(xì)胞中的IL-1β和IL-18轉(zhuǎn)錄水平，結(jié)果顯示vvIBDV感染細(xì)胞上清及MIF蛋白均可以上調(diào)IL-1β和IL-18的轉(zhuǎn)錄。將MIF抗體及多種抑制劑作用于vvIBDV感染的DT40細(xì)胞上清，可見感染細(xì)胞中IL-1β及IL-18的轉(zhuǎn)錄水平均被顯著抑制。表明Gx株感染靶細(xì)胞后通過分泌MIF是IBDV感染后IL-1β和IL-18轉(zhuǎn)錄上調(diào)的原因之一。

目前，免疫抑制病是導(dǎo)致禽類死亡率上升及其產(chǎn)蛋率下降的重要原因之一，是制約養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要因素。該研究初步揭示了vvIBDV通過分泌MIF蛋白導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的機(jī)理，為闡明vvIBDV的致病機(jī)制提供了參考依據(jù)。