高效液相色譜法測(cè)定解郁安神顆粒中梔子苷的含量

林凡友 陳仁燕 羅曉倩 杜玲杰

[摘要]目的 建立高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定解郁安神顆粒中梔子苷含量的方法。方法 采用Thermo C18色譜柱，以乙腈-水（15∶85）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為236 nm，柱溫為室溫25℃。結(jié)果 梔子苷在20.26～67.52 μg/ml范圍內(nèi)，線性方程為A=14.357C+6.4276（r=0.9996），梔子苷平均回收率為99.87%，RSD為0.49%，精密度和穩(wěn)定性的RSD分別為1.56%和1.58%。測(cè)定3批解郁安神顆粒，平均含量為6.78 mg/袋，RSD為1.41%。結(jié)論 該法準(zhǔn)確性高、專屬性強(qiáng)，可以作為梔子苷含量檢測(cè)的有效方法。

[關(guān)鍵詞]解郁安神顆粒；高效液相色譜法；梔子苷；含量測(cè)定

[中圖分類號(hào)] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）11（c）-0044-04

[Abstract] Objective To establish the high performance liquid chromatography （HPLC） method for the determination of Geniposide in Jieyu Anshen Granules. Methods The HPLC was carried out with Thermo C18 using acetonitrile-water （15：85） as a mobile phase. The detection wavelength was 236 nm and the column temperature was 25℃. Rseults The linear equation of Geniposide was A=14.357C+6.4276 （r=0.9996） in the range of 20.26-67.52 μg/ml. The average recovery of geniposide was 99.87% （RSD=0.49%）. The RSD of precision and stability were 1.56% and 1.58%， respectively. Determination of 3 batches samples， the average content was 6.78 mg/bag （RSD=0.64%）. Conclusion It shows that this method is high accuracy and specificity， it can be used as an effective method for the determination of Geniposide content.

[Key words] Jieyu Anshen Granules； High performance liquid chromatography； Geniposide； Content determination

解郁安神顆粒由柴胡、炒梔子等16味中藥材組成，具有舒肝解郁[1-2]、安神定志的功能。臨床用于治療情志不暢、肝郁氣滯所致的失眠[3-4]、焦慮[5]、健忘、更年期綜合征見上述證候者等[6-7]。主藥梔子的有效成分梔子苷、熊果酸和總有機(jī)酸，其中梔子苷藥理作用廣泛，生物學(xué)效應(yīng)豐富，具有保肝利膽[8-9]、抗氧化[10]、鎮(zhèn)痛及抗炎等作用[11-12]，應(yīng)用前景廣闊。準(zhǔn)確檢測(cè)梔子苷含量是控制解郁安神顆粒質(zhì)量的有效途徑，梔子苷含量的測(cè)定方法有薄層掃描法、毛細(xì)管電泳法[13]及高效液相色譜法（HPLC）[14-15]等。HPLC是目前應(yīng)用廣泛，準(zhǔn)確性高的一種檢測(cè)方法，為準(zhǔn)確檢測(cè)梔子苷含量，本文采用了HPLC對(duì)梔子苷含量進(jìn)行檢測(cè)，以保證解郁安神顆粒質(zhì)量和療效，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀（G1314F型紫外檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司）；MS105DU型電子天平；梔子苷對(duì)照品（批號(hào)110749-201316，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；甲醇、乙腈（色譜純，美國(guó)天地有限公司）；水為純化水；其他試劑均為分析純；解郁安神顆粒（翔宇藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)160101、160102、160103）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱Thermo C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈-水（15∶85），檢測(cè)波長(zhǎng)236 nm，流速1.0 ml/min，柱溫為室溫25℃，進(jìn)樣量為10 μl。理論板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算應(yīng)≥3000。

2.2溶液的制備

2.2.1供試品溶液 取解郁安神樣品適量，研細(xì)過4號(hào)篩，精密稱定1 g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇20 ml，稱定重量，加熱回流40 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過取續(xù)濾液，即得。

2.2.2對(duì)照品溶液 精密稱取梔子苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含300 μg的溶液，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。再加甲醇稀釋制成每毫升含30 μg的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

2.2.3陰性供試品溶液 按供試品溶液制備方法，制備不含梔子苷的陰性樣品溶液。

2.3專屬性試驗(yàn)

精密量取上述3種溶液各10 μl進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，理論板數(shù)按梔子苷峰計(jì)均>3000，陰性供試品溶液對(duì)主峰沒有干擾，分離度均>1.5，表明該方法專屬性良好。

2.4線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量置10 ml的量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得不同濃度的線性溶液，依法測(cè)定。以濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，線性方程為：A=14.357C+6.4276，相關(guān)系數(shù)r= 0.9996，梔子苷溶液在20.26～67.52 μg/ml內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（表1）。

2.5精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，并記錄色譜圖。結(jié)果顯示，峰面積的RSD值為1.56%（表2），表明該方法的系統(tǒng)精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

將供試品溶液室溫放置12 h，每2小時(shí)測(cè)定1次。結(jié)果顯示，梔子苷峰面積RSD值為1.58%（表3），供試品溶液在 12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，計(jì)算含量為6.78 mg/袋。

2.7加樣回收率試驗(yàn)

取160101批樣品（含量6.78 mg/袋，每袋5 g），加入高、中、低濃度對(duì)照品溶液適量與所取供試品中待測(cè)成分之比控制在0.8∶1、1∶1、1.2∶1左右，依法進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果顯示，含量測(cè)定各濃度下回收率在98.1%～101.0%，RSD為0.49%（表4），表明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.8耐用性試驗(yàn)

2.8.1柱溫 在柱溫分別為20、25、30℃條件下測(cè)定含量。結(jié)果顯示，梔子苷平均含量為6.57 mg/袋，RSD為1.13%，耐用性較好。

2.8.2流速 在流速分別為0.9、1.0、1.1 ml/min條件下測(cè)定含量。結(jié)果顯示，梔子苷平均含量為6.64 mg/袋，RSD為1.48%，耐用性較好。

2.8.3流動(dòng)相 在流動(dòng)相乙腈與水的比例分別為11∶89、15∶85、19∶81條件下測(cè)定含量。結(jié)果顯示，梔子苷平均含量為6.72 mg/袋，RSD為1.26%，耐用性較好。

2.8.4檢測(cè)波長(zhǎng) 在檢測(cè)波長(zhǎng)分別為232、236、240 nm條件下測(cè)定含量。結(jié)果顯示，梔子苷平均含量為6.65 mg/袋，RSD為1.27%，耐用性較好。

2.8.5色譜柱 色譜柱分別為熱電C18和迪馬C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）測(cè)定含量。結(jié)果顯示，使用不同型號(hào)的色譜柱，梔子苷平均含量為6.74 mg/袋，RSD為1.38%（表5），耐用性較好。

2.9樣品含量測(cè)定

取3批解郁安神顆粒，依法測(cè)定梔子苷含量，3批樣品平均含量為6.78 mg/袋，RSD為1.41%（表6）。

3討論

取梔子苷對(duì)照品溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果梔子苷在236 nm波長(zhǎng)處有最大吸收且無干擾，選定236 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，采用甲醇為提取劑，提取率高，方法簡(jiǎn)單污染性小。

近年來，隨著科技的發(fā)展，人們對(duì)藥品的質(zhì)量、安全日益重視。本文建立的HPLC檢測(cè)梔子苷含量的方法，重點(diǎn)為提高解郁安神顆粒質(zhì)量，嚴(yán)格監(jiān)控有效成分含量。與薄層掃描法、毛細(xì)管電泳法相比，HPLC法能有效檢測(cè)梔子苷含量，分離度高，無其他雜質(zhì)峰干擾、檢測(cè)性強(qiáng)準(zhǔn)確可靠，為解郁安神顆粒的質(zhì)量控制提供有效的參考依據(jù)。解郁安神顆粒是中成藥，藥材種類較多，本研究中測(cè)定方法的建立，可以為進(jìn)一步控制藥品質(zhì)量提供依據(jù)，增加多組分的含量控制是下一步研究的方向。

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