EDTA-K2抗凝劑致假性血小板減少的方法

鄒小峰

摘要 目的：探討EDTA-K2抗凝劑致假性血小板減少的方法。方法：收治肛瘺患者1例，對(duì)其血小板檢驗(yàn)結(jié)果異常進(jìn)行探討。結(jié)果：EDTA-K2抗凝標(biāo)本的血涂片15min時(shí)在顯微鏡下可看見大量的血小聚集現(xiàn)象。結(jié)論：血液檢測(cè)過(guò)程中使用EDTA-K2抗凝劑也會(huì)造成血小板假性降低，因此當(dāng)全自動(dòng)血液分析儀的血小板計(jì)數(shù)出現(xiàn)與臨床的診斷不相符且嚴(yán)重偏低時(shí)，檢驗(yàn)人員應(yīng)該及時(shí)并且積極的找出原因。

關(guān)鍵詞 EDTA-K2抗凝劑;假性;血小板減少

乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）具有對(duì)紅、白細(xì)胞形態(tài)影響極小，并可抑制血小板在體外聚集等優(yōu)點(diǎn)，目前臨床已廣泛應(yīng)用EDTA-K2抗凝劑進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)，但會(huì)引起血小板不正常的黏附、聚集，從而導(dǎo)致檢測(cè)出來(lái)的血小板結(jié)果假性減少，導(dǎo)致對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的錯(cuò)誤理解，極易誤診，應(yīng)引起注意。

資料與方法

2017年1月-2018年1月收治肛瘺患者1例，患者，男，36歲。利用SysmesXS-500i全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀做血常規(guī)檢測(cè)時(shí)血小板計(jì)數(shù)結(jié)果顯示16×10⁹/L，凝血四項(xiàng)正常，無(wú)任何臨床出血癥狀，瑞氏染色后鏡檢發(fā)現(xiàn)有血小板聚集現(xiàn)象。

儀器和試劑：sysmexXS-500i全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀與相關(guān)配套試劑，OLYMPUS-CX31雙目顯微鏡，EDTA-K2抗凝采血管，枸櫞酸鈉抗凝管，草酸銨稀釋液（按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》配制），瑞氏-吉姆薩染液。

檢測(cè)方法：①EDTA-K2抗凝：患者用EDTA-K2一次性采血管抽取靜脈血2mL充分混勻后放置15min、30min。②枸櫞酸鈉抗凝：同時(shí)為患者再用枸櫞酸鈉負(fù)壓采血管抽取靜脈血2mL（抗凝劑與血液之比1：9），在混勻后放置15min、30min。③草酸銨稀釋末梢血：抽取患者的末梢血20μL加入到0.38mL草酸銨稀釋液中，按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》來(lái)嚴(yán)格操作，混勻后放置15min、30min。沖入計(jì)數(shù)板人工計(jì)數(shù)。

檢測(cè)過(guò)程：利用sysmexXS-500i全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀和人工顯微鏡檢測(cè)的方法依照不同的時(shí)間段對(duì)以上各個(gè)血液樣本進(jìn)行檢測(cè)分析，計(jì)數(shù)血小板數(shù)量，以上測(cè)量每份標(biāo)本均采取3次測(cè)量的平均值作為最終結(jié)果。

制取血涂片染色鏡檢：同時(shí)將每例患者的血液樣本分別涂片染色，放在雙目顯微鏡下鏡檢，觀察15min、30min血小板的聚集和分布情況。

結(jié)果

血小板計(jì)數(shù)情況，見表1。

血涂片鏡檢情況：EDTA-K2抗凝標(biāo)本的血涂片15min時(shí)在顯微鏡下可看見大量的血小板聚集現(xiàn)象，并且隨著時(shí)間的增加聚集加劇。而15min以內(nèi)枸櫞酸鈉抗凝標(biāo)本血小板均勻分散分布，30min時(shí)枸櫞酸鈉抗凝標(biāo)本有微聚集現(xiàn)象。草酸銨稀釋液標(biāo)本的血涂片鏡檢則在15min，30min時(shí)血小板都無(wú)明顯變化。

討論

EDTA-K2的作用：EDTA-K2抗凝劑可以和血液中的鈣離子結(jié)合成鰲合物，促使鈣離子失去原本的凝血作用，防止血液凝固。國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）給出的建議：EDTA-K2抗凝劑對(duì)于全血細(xì)胞的計(jì)數(shù)分析最適合，尤其適用于血小板的計(jì)數(shù)檢測(cè)[1]，它可以對(duì)血液中血細(xì)胞和血小板的聚集幾乎不產(chǎn)生影響。但在實(shí)際臨床使用過(guò)程中，EDTA-K2抗凝劑偶爾也會(huì)對(duì)血小板產(chǎn)生影響，引發(fā)血小板聚集，對(duì)血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)產(chǎn)生明顯的干擾，引起血小板的假性減少。

血小板假性減少：引起血小板假性減少的原因：乙二胺四乙酸抗凝劑引起的血小板聚集，假性血小板減少發(fā)生率0.09%～0.21%[2]。有觀點(diǎn)認(rèn)為由于乙二胺四乙酸作用于血液，使血液中出現(xiàn)冷抗血小板自身抗體，這種免疫介導(dǎo)的冷抗體直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱ b/Ⅲ a上，產(chǎn)生衛(wèi)星現(xiàn)象，導(dǎo)致血小板產(chǎn)生互相聚集現(xiàn)象。另一種觀點(diǎn)認(rèn)為EDTA-K2依賴性假性減少癥可能與血漿中存在的抗血小板抗體和/或抗心磷脂抗體等自身抗體有關(guān)，但無(wú)任何生理、病理意義，也與藥物無(wú)關(guān)，多發(fā)生于糖尿病、腫瘤、炎癥及不明原因的疾病中[3]。此外，兒科患者經(jīng)常會(huì)因?yàn)椴裳粫呈沟貌裳^(guò)程中血小板產(chǎn)生聚集和黏附性改變，而EDTA-K2抗凝劑進(jìn)一步與血小板產(chǎn)生作用，產(chǎn)生更加明顯的聚集[4]。

糾正EDTA-K2誘導(dǎo)的血小板聚集的方法：在日常的檢測(cè)工作中，可以導(dǎo)致血小板聚集減少的外部因素有很多，其中，在檢測(cè)時(shí)因抗凝劑的使用、采血不當(dāng)以及混勻不及時(shí)是較為常見的原因。因此在檢驗(yàn)科的日常工作中，常常會(huì)遇到血小板檢驗(yàn)結(jié)果與真實(shí)結(jié)果不符合的情況，需盡量杜絕由于采集標(biāo)本時(shí)人為操作不正確引起血小板聚集導(dǎo)致的血小板假性減少。當(dāng)采集血液標(biāo)本嚴(yán)格按規(guī)程進(jìn)行而又無(wú)任何臨床出血癥狀，數(shù)值<50×10⁹/L的時(shí)候，檢驗(yàn)人員要予以重視，要認(rèn)真查找造成這種結(jié)果的原因?？梢圆捎描蹤此徕c抗凝劑進(jìn)行對(duì)比，也可以用草酸銨末梢稀釋血手工計(jì)數(shù)血小板，同時(shí)加做血涂片鏡檢觀察其血小板的分布和聚集狀況，以佐證檢驗(yàn)結(jié)果的符合性[5]。

通過(guò)以上研究可以發(fā)現(xiàn)，血液檢測(cè)過(guò)程中使用EDTA-K2抗凝劑也會(huì)造成血小板假性降低，因此當(dāng)全自動(dòng)血液分析的血小板計(jì)數(shù)出現(xiàn)與臨床診斷不相符的嚴(yán)重偏低時(shí)，檢驗(yàn)人員應(yīng)該及時(shí)并且積極地找出原因，要把POCT方面的因素考慮在內(nèi)。具體可以通過(guò)更換抗凝劑，或是采取人工計(jì)數(shù)法，以及血涂片染色鏡檢綜合分析判斷血小板計(jì)數(shù)減少的“真假”，從而保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。對(duì)于類似的問(wèn)題，檢驗(yàn)人員要保持高度的責(zé)任感，不能輕易通過(guò)審核，避免因抗凝劑的緣故引起結(jié)果假性偏低，而出具給臨床醫(yī)生和患者不真實(shí)的報(bào)告單。

通過(guò)對(duì)上述情況的分析，說(shuō)明要想成為一名合格的檢驗(yàn)工作者，需做好以下4點(diǎn)：①時(shí)刻保持一顆嚴(yán)謹(jǐn)?shù)男膽B(tài)，在遇到異常結(jié)果時(shí)，特別是與臨床明顯不符合時(shí)要多加思考，不能僅憑當(dāng)日的質(zhì)控符合要求草率通過(guò)審核而發(fā)出不真實(shí)的報(bào)告。②作為檢驗(yàn)人員，需要積極與臨床醫(yī)生溝通，通過(guò)溝通幫助我們?cè)敿?xì)了解實(shí)際情況，有助于找到分析的思路。③做好自身的實(shí)踐知識(shí)儲(chǔ)備，全面系統(tǒng)了解各個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)原理和干擾因素，在實(shí)踐中不斷學(xué)習(xí)和總結(jié)。④高度的責(zé)任心放在工作首位。

參考文獻(xiàn)

[1]劉俊閃.EDTA-K2抗凝劑致血小板假性減少現(xiàn)象及糾正方法的分析[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志，2015，3（2）：1442.

[2]陳言偉，張一民，董娟.EDTA-K2依賴性血小板減少癥1例分析[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志，2011，11（4）：849.

[3]李艷，孫家祥.EDTA-K2抗凝劑致血小板假性減少的原因及糾正方法探討[J].海南醫(yī)學(xué)，2013，24（21）：3187-3189.

[4]劉君，劉紫云.10例EDTA-K2抗凝致假性血小板減少分析[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，12（33）：1212-1213.

[5]朱建奎，張春玲，薛健.抗凝劑EDTA-K2導(dǎo)致血小板假性減少原因分析[J].吉林醫(yī)學(xué)，2010，31（33）：6018.