UPLC-LTQ Orbitrap MS對沙棘葉化學(xué)成分的分析△

康瑩，毛怡寧，王方方，武文奇，劉勇

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 102488)

沙棘HippophaerhamnoidesL.，又名醋柳、達普(藏名)、沏其日干(蒙名)等，是胡頹子科Elaeagnaceae沙棘屬植物，在我國廣泛分布。中國沙棘屬于我國特有的種，是中國分布最廣，數(shù)量最多的沙棘，其在1977年首次載入《中華人民共和國藥典》，果實入藥，具有健脾消食，止咳祛痰，活血散瘀的作用[1-3]。沙棘以果實入藥，一般多開發(fā)利用的原料是其果實，葉作為廢料通常被遺棄，造成極大的資源浪費。近年來研究發(fā)現(xiàn)，沙棘葉中也含有大量的活性成分[4-6]，主要有黃酮類、維生素C、多糖等，還含豐富的蛋白質(zhì)、粗纖維，與沙棘其它部位比較，葉片中的黃酮類成分最高，沙棘葉具有預(yù)防心血管疾病、降血脂、抗炎、殺菌等多種藥理活性，其安全、多效的藥用功效極具開發(fā)潛力，研究沙棘葉對沙棘資源的綜合利用具有重要意義。目前關(guān)于沙棘葉藥效物質(zhì)基礎(chǔ)方面研究不夠深入、高附加值產(chǎn)品開發(fā)不足等制約了產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。綜上所述，本實驗采用UPLC-LTQ Orbitrap MS技術(shù)對沙棘葉提取物的化學(xué)成分進行分析，根據(jù)化學(xué)成分的質(zhì)譜信息，并與對照品、相關(guān)文獻數(shù)據(jù)比對，分析出其醇提物中的26個化合物，有利于進一步闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為沙棘葉的進一步研究開發(fā)提供有效的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

對照品：槲皮素(B20527，質(zhì)量分數(shù)≥98%)，山奈酚(B21126，質(zhì)量分數(shù)≥ 98%)，異鼠李素(B21554，質(zhì)量分數(shù)≥ 98%)，異鼠李素-3-O-葡萄糖苷(B21556，質(zhì)量分數(shù)≥ 98%)，槲皮苷(B20525，質(zhì)量分數(shù)≥98%)，蘆丁(B20771，質(zhì)量分數(shù)≥98%)均購于上海源葉生物科技有限公司；異槲皮苷(0373，質(zhì)量分數(shù)≥ 98%)，購于北京四面體生物科技有限公司；水為超純水，甲醇、乙腈為質(zhì)譜級(美國 Fishier Scientific 公司)，其余試劑均為分析純；沙棘葉采自青海德令哈地區(qū)，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)資源系劉勇教授鑒定其原植物為沙棘HippophaerhamnoidesL.。

1.2 主要儀器與設(shè)備

LTQ-Oribitrap XL線性離子阱-串聯(lián)靜電場軌道阱質(zhì)譜儀：美國Thermo Scientific公司產(chǎn)品，配有熱噴霧離子源(HESI)、Xcalibur 2.1化學(xué)工作站(美國thermo公司)；Thermo Scientific Dionex Utimate 3000 UHPLC Plus Focused超高液相色譜系統(tǒng)：含二元梯度泵，自動進樣器，柱溫箱，DAD檢測器；Chromeleon 7工作站；Millipore Synergy UV型超純水機(美國Millipore公司)；R200D型電子分析天平(十萬分之一，德國Sartorius公司)。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準品溶液配制 精密稱取異鼠李素、槲皮素、山奈酚、槲皮苷、異槲皮苷、蘆丁、異鼠李素-3-O-葡萄糖苷各1 mg，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，得相應(yīng)的7個標準品溶液。過0.45 μm微孔濾膜，備用。

1.3.2 供試品溶液配制 沙棘葉干燥后，粉碎過篩。稱取沙棘葉粉末2 g，石油醚脫脂，以1∶15的比例加入70%乙醇，水浴回流2 h，冷卻，過濾，殘渣再分別以1∶10的比例加熱回流2次，每次1 h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至干，用甲醇溶解，過0.45 μm微孔濾膜，即得。

1.3.3 UHPLC-ESI-MSn分析條件

1.3.3.1 色譜條件

色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH-Cl8柱(2.1×50 mm，1.7 μm)；流動相A相是乙腈，B相是0.1%甲酸水溶液，洗脫程序如下：0～3 min，5%～14%A；3～17 min，14%～27%A；17～23 min，27%～40%A；23～35 min，40%～90%A；35～41 min，90%～90%A；41～41.1 min，90%～5%A；41.1～45 min，5%～5%A；流速為0.4 mL·min-1；柱溫為30 ℃；檢測波長360 nm；進樣量4 μL。

1.3.3.2 質(zhì)譜條件

HESI離子源，負離子檢出模式，離子源溫度350 ℃，電離源電壓4 KV，毛細管電壓：35 V，管透鏡電壓：110 V，鞘氣和輔助氣均為高純氮氣(純度>99.99%)，鞘氣流速40 arb，輔助氣流速流速20 arb；數(shù)據(jù)采用傅里葉變換高分辨全掃方式(TF，F(xiàn)ull scan，Resolution 30000)數(shù)據(jù)依賴性(data-dependent acquisistion)ddMS2和ddMS3。

2 結(jié)果與分析

2.1 沙棘葉中化合物的鑒別

采用UPLC-LTQ Orbitrap MS對沙棘葉醇提成分進行定性分析，負離子模式下的質(zhì)譜總離子流圖見圖1。通過UPLC-LTQ Orbitrap MS檢測得到沙棘葉中各化學(xué)成分的保留時間和質(zhì)譜信息，結(jié)合保留時間及裂解碎片信息，與文獻報道[7-18]的化學(xué)成分及對照品進行分析比對，初步推斷中國沙棘中成分的結(jié)構(gòu)，結(jié)果見表1。

圖1 沙棘葉總離子流圖

No.tR/minCompound NameFormula[M-H]-MS/MS11.38一-O-沒食子?；咸烟荂13H16O10331.0655271,211,169,151,12521.90沒食子酸C7H6O5169.1036151 12532.93沒食子兒茶素C15H14O7305.065 7287,261,221,219,179,151,13744.27表沒食子兒茶素C15H14O7305.065 7287,261,221,219,17954.42兒茶素C15H14O6289.069 8271,245,205,179,16564.50沒食子酰基-鞣花?；咸烟荂27H22O18633.068 4463,30174.69表兒茶素(EC)C15H14O6289.069 7271,245,205,179,16584.80槲皮素-3-O-槐糖苷C27H30O17625.135 830195.05鞣花酰基-橡椀?；咸烟荂41H28O26935.073 1917,891,873,783,659,633,571,481,301105.50異鼠李素-3,7-O-己糖苷C28H32O17639.151 3477,315115.68槲皮素-7-O-葡萄糖苷C21H20O12463.087 1301,300,271,179,151126.64槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷C27H30O16609.145 0463,447,466,301,271137.05槲皮素-3-O-阿拉伯糖苷C20H18O11433.0385301147.59山奈酚-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷C27H30O15593.150 1447,431,285157.85鞣花酸C15H10O7300.996 7283,257,245,229,185167.93異鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷C28H32O16623.169 7477,461,315,300178.24蘆丁C27H30O16609.141 7301,300188.78槲皮素-3-O-葡萄糖苷C21H20O12463.087 1301,300199.93山奈酚-3-O-蕓香糖苷C27H30O15539.147 62852010.30異鼠李素-3-O-蕓香糖苷C28H32O16623.106 7315,300,271,2432110.52山奈酚-3-O-葡萄糖苷C21H20O11447.092 1285,284,255,227,1512210.85異鼠李素-3-O-葡萄糖苷C22H22O12477.102 7315,285,271,243,1512311.20二-O-沒食子?；咸烟荂20H19O14483.184 2331,313,301,271,2412417.20山奈酚-3-O-鼠李葡萄糖苷C27H30O15593.125 2447,2852517.88異鼠李素-7-O-鼠李糖苷C22H22O11461.105 6315,3002618.25山奈酚-3-O-鼠李葡萄糖苷C27H30O15593.125 1447,285

2.2 沙棘葉中化合物的結(jié)構(gòu)解析

化合物1：一-O-沒食子?；咸烟?。結(jié)合質(zhì)譜給出的準分子離子峰m/z331.065 5[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的為C13H16O10。m/z271，241，211，169，151，125。碎片離子的歸屬為m/z271[M-H-H2O-C2H2O]-，m/z241，211為m/z271連續(xù)失去CH2O形成，m/z169為沒食子?；鶊F，取代位置不確定。結(jié)合文獻，推測該化合物為一-O-沒食子酰基葡萄糖。

化合物2：沒食子酸。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z169.1036[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C7H6O5。以m/z169.103 6[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z151，125碎片離子信息。碎片離子的歸屬為m/z151[M-H-H2O]-，m/z125[M-H-CO2]-，為其特征離子碎片。結(jié)合文獻，推測該化合物為沒食子酸。

化合物3：沒食子兒茶素。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z305.065 7[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C15H14O7，以m/z305.065 7[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z287，261，221，219，179，151，135碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z287[M-H-H2O]-，m/z261[M-H-CO2]-，m/z221[M-H-2C2H2O]-，m/z219[M-H-CO2-C2H2O]，再裂解發(fā)生C5H6O的丟失得到m/z137，m/z179為丟失B環(huán)所得，繼而可發(fā)生CO和CO2的中性丟失，分別得離子m/z151和m/z135。結(jié)合文獻，推測該化合物為沒食子兒茶素。

化合物4：表沒食子兒茶素。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z305.0657[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C15H14O7，以m/z305.0657[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z287，261，221，219，179，137碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z287[M-H-H2O]-，m/z261[M-H-CO2]-，m/z221[M-H-2C2H2O]-，m/z219[M-H-CO2-C2H2O]，-再裂解發(fā)生C5H6O的丟失得到m/z 137，m/z179為丟失B環(huán)所得，繼而可發(fā)生CO和CO2的中性丟失，分別得離子m/z151，135。結(jié)合文獻，并根據(jù)保留時間，推測該化合物為沒食子兒茶素的對應(yīng)異構(gòu)體表沒食子兒茶素。

化合物5：兒茶素。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z289.069 8[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C15H14O6，以m/z289.069 8[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z271，245，205，179，165，碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z271[M-H-H2O]-，m/z245[M-H-CO2]-，m/z205[M-H-2C2H2O]，m/z179[M-H-C6H6O2]。結(jié)合文獻，推測該化合物為兒茶素。

化合物6：沒食子?；?鞣花?；咸烟?。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z633.068 4[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C27H22O18，以m/z633.068 4[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z463，301，257，229，185碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z463[M-H-170]-是母分子離子丟失沒食子酸，m/z301[M-H-332]-是母分子離子失去沒食子?；c葡萄糖組成的化合物形成的。結(jié)合文獻，m/z257，229，185碎片離子與鞣花酸的碎片離子相同，推測該化合物為沒食子?；?鞣花酰基葡萄糖。

化合物7：表兒茶素。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z289.069 8[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C15H14O6，以m/z289.069 8 [M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯m/z271，245，205，179等碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z271[M-H-H2O]-，m/z245[M-H-CO2]-，m/z205[M-H-2C2H2O]，m/z179[M-H-C6H6O2]。結(jié)合文獻，并根據(jù)保留時間及離子相對豐度，推測該化合物為兒茶素的對映異構(gòu)體表兒茶素。

化合物8：槲皮素-3-O-槐糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z625.135 8[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C27H30O17，以m/z625.135 8[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z301碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z301[M-H-2Glc]-。m/z301產(chǎn)生與標品槲皮素相同的特征離子峰m/z271 179 151，化合物母核是槲皮素。結(jié)合文獻，推測該化合物為槲皮素-3-O-槐糖苷。

化合物9：鞣花?；?橡椀?；咸烟?。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z935.073 1[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C41H28O26，以m/z935.073 0[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z917，891，783，633，481，301碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z917[M-H-H2O]-；m/z891[M-H-CO]-；碎片m/z783[M-H-152]-是其母離子失去1分子沒食子?；纬桑B續(xù)失去2分子沒食子?；謩e形成m/z633和481，相當于其母分子離子丟失橡椀酰基；481丟失1分子葡萄糖得到m/z301。結(jié)合文獻，推測該化合物為鞣花酰基-橡椀?；咸烟恰?/p>

化合物10：異鼠李素-3，7-二-O-己糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z625.135 8[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C27H30O17，以m/z625.135 8[M-H]作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z463，301碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z477[M-H-162]-是母離子失去一份子的己糖苷形成的，m/z315[M-H-324]-是失去二分子己糖苷形成。m/z315產(chǎn)生與標品異鼠李素相同的特征離子峰m/z300，271，151，107，化合物母核是異鼠李素。結(jié)合文獻，推測該化合物為異鼠李素-3，7-二-O-己糖苷。

化合物11：槲皮素-7-O-葡萄糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z463.0871[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C21H20O12，以m/z463.087 1[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z301碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z301[M-H-Glc]-。m/z301產(chǎn)生與標品槲皮素相同的特征離子峰m/z271，179，151，化合物母核是槲皮素。結(jié)合文獻，推測該化合物為槲皮素-7-O-葡萄糖苷。

化合物12：槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z609.1450[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C27H30O16，以m/z609.1450[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的463，477，466，301碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z463 [M-H-Rha]-，m/z301[M-H-Rha-Glc]-。m/z301產(chǎn)生與標品槲皮素相同的特征離子峰，母核是槲皮素。結(jié)合文獻，推測該化合物為槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷。

化合物13：槲皮素-3-O-阿拉伯糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z433.038 5[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C20H18O11，以m/z433.038 5[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的301碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z301[M-H-Ara]。m/z301產(chǎn)生與標品槲皮素相同的特征離子峰，母核是槲皮素。結(jié)合文獻，推測該化合物為槲皮素-3-O-阿拉伯糖苷。

化合物14：山奈酚-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z593.150 1[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C27H30O15，以m/z593.150 1[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的447，431，285碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z447[M-H-Rha]-，m/z431[M-H-Glc]-，285[M-H-Rha-Glc]-。m/z285產(chǎn)生與標品山柰酚相同的特征離子峰m/z227，159，117，化合物母核是山柰酚。結(jié)合文獻，推測該化合物為山奈酚-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷。

化合物15：鞣花酸。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z300.996 7[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C6H10O7。以m/z300.996 7[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z283，257，244，229，185碎片離子信息。碎片離子的歸屬為m/z283[M-H-H2O]-，m/z257[M-H-CO2]-，m/z245[M-H-2CO]-，m/z229[M-H-CO2-CO]-，m/z185[M-H-2CO2-CO]-。結(jié)合文獻，推測該化合物為鞣花酸。

化合物16：異鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z623.169 7[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C28H32O16。以m/z623.169 7[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z477，461，460，315碎片離子信息。各碎片離子的歸屬為m/z477[M-H-Rha]-，m/z461[M-H-Glc]-，m/z315[M-H-Rha-Glc]-。m/z315產(chǎn)生與標品異鼠李素相同的特征離子峰，母核是異鼠李素。結(jié)合文獻，推測該化合物為異鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷。見圖2。

圖2 異鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷可能的裂解途徑

化合物17：蘆丁。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z609.141 7[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C27H30O16。以m/z609.141 7[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z301碎片離子信息，與標品蘆丁裂解碎片相同，推測該化合物為蘆丁。

化合物18：異槲皮苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z463.087 1[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C21H20O12，以m/z463.087 1[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z301碎片離子信息。碎片離子的歸屬為m/z301[M-H-Glc]-。與標品異槲皮苷對照，并結(jié)合文獻，推測該化合物為異槲皮苷。

化合物19：異鼠李素-3-O-蕓香糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z623.106 7[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C28H32O16，以m/z623.106 7[M-H]-，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z315，300，271碎片離子信息。碎片離子的歸屬為m/z315[M-H-Rha-Glc]-。m/z315產(chǎn)生與標品異鼠李素相同的特征離子峰，母核是異鼠李素。結(jié)合文獻，推測該化合物為異鼠李素-3-O-蕓香糖苷。

化合物20：山奈酚-3-O-蕓香糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z593.147 6[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C27H30O15，以m/z593.147 6[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z285碎片離子信息。碎片離子的歸屬為m/z285[M-H-Rha-Glc]-。m/z285產(chǎn)生與標品山奈酚相同的特征離子峰，母核是山柰酚。結(jié)合文獻，推測該化合物為山奈酚-3-O-蕓香糖苷。

化合物21：山奈酚-3-O-葡萄糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z447.092 1[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C21H20O11，以m/z447.092 1[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z285碎片離子信息。碎片離子的歸屬為m/z285[M-H-Glc]-。m/z285產(chǎn)生與標品山柰酚相同的特征離子峰，母核是山柰酚。結(jié)合文獻，推測該化合物為山奈酚-3-O-葡萄糖苷。

化合物22：異鼠李素-3-O-葡萄糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z477.102 7[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C22H22O12。以m/z477.102 7[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z314，285，271，243，151碎片離子信息。碎片離子的歸屬為m/z315[M-H-Glc]-。m/z315產(chǎn)生的與標品異鼠李素相同的特征離子峰，母核是異鼠李素。結(jié)合文獻，推測該化合物為異鼠李素-3-O-葡萄糖苷。見圖3。

圖3 異鼠李素-3-O-葡萄糖苷可能的裂解途徑

化合物23：二-O-沒食子?；咸烟恰＝Y(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z483.184 2[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C20H19O14，以m/z483.184 2[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z331，313，301，271，241，177，169等碎片離子信息。碎片離子的歸屬為m/z331，313是失去沒食子?；纬?。m/z313連續(xù)失去C2H2O和CH2O依次形成m/z271，241的碎片離子，特征離子m/z169為沒食子?；鶊F，取代位置不確定。結(jié)合文獻，推測該化合物為二-O-沒食子?；咸烟恰?/p>

化合物24：山柰酚-3-O-葡萄糖鼠李糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z593.124 7[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C27H30O15，以m/z593.124 7[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z447，285碎片離子信息。碎片離子的歸屬為m/z477[M-H-Rha]-，m/z285[M-H-Rha- Glc]-。結(jié)合文獻，推測該化合物為山柰酚-3-O-葡萄糖鼠李糖苷?；衔?6與24產(chǎn)生相同的離子碎片，可能為其同分異構(gòu)體。

化合物25：異鼠李素-7-O-鼠李糖苷。結(jié)合質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z465.1056[M-H]-，根據(jù)元素組成分析，推斷該化合物的分子式為C22H22O11。以m/z465.105 6[M-H]-作為母離子進行二級質(zhì)譜分析，所得二級質(zhì)譜圖中有明顯的m/z315，300碎片離子信息。碎片離子的歸屬為m/z315[M-H-Rha]-。m/z315產(chǎn)生與標品異鼠李素相同的特征離子峰，母核是異鼠李素。結(jié)合文獻，推測該化合物為異鼠李素-7-O-鼠李糖苷。

3 討論

中藥成分復(fù)雜多樣，將中藥的特色與現(xiàn)代化技術(shù)相結(jié)合，快速、有效的研究中藥中的成分，去闡明中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機制十分有意義。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)是現(xiàn)代研究常用的分析方法，其將液相色譜的優(yōu)越的分離特性與質(zhì)譜高選擇性、高靈敏度和提供結(jié)構(gòu)信息的性能結(jié)合起來，LC-MS高靈敏度、高專屬性等特點和樣品制備簡單、分析速度快等優(yōu)勢，已成為中藥化學(xué)成分表征的主要技術(shù)之一。LTQ-Orbitrap質(zhì)譜儀的結(jié)構(gòu)是一個線性離子阱低分辨質(zhì)量分析器串聯(lián)Orbitrap高分辨質(zhì)量分析器，在Orbitrap進行高分辨掃描時，LTQ能進行多個數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)的MSn或MS/MS的掃描。與傳統(tǒng)LC-MS相比，UPLC-LTQ Orbitrap MS可實現(xiàn)多級質(zhì)譜碎裂和母離子的高分辨采集，并具有低分辨和和高分辨平行檢測功能，根據(jù)碎片離子可篩選非目標成分以及快速分析化合物的結(jié)構(gòu)，是進行常規(guī)化合物鑒定和復(fù)雜成分分析的有效手段[19-20]。

沙棘葉中主要的成分為黃酮類化合物，并且以異鼠李素、槲皮素、山柰酚為苷元與葡萄糖基、鼠李糖基、阿拉伯糖基、蕓香糖基等結(jié)合形成黃酮醇苷類化合物。黃酮類化合物極性較大且熱不穩(wěn)定，分子中的羥基容易形成穩(wěn)定的氧負離子，選擇負離子模式檢測信噪比較好。沙棘葉中黃酮醇苷的裂解主要是先逐步失去糖類成分，如[M-H-Glc]-，對于黃酮苷元，則主要發(fā)生C環(huán)的RDA裂解和一些小分子碎片的丟失，比如CHO，CO，CH3等。在負離子模式下，糖基化位置不同，苷元離子和自由基苷元離子豐度不同，黃酮醇3-O-單糖苷產(chǎn)生的自由基苷元離子豐度強，黃酮醇7-O-單糖苷產(chǎn)生苷元離子豐度強；3，7-二-O-糖苷一般與不同質(zhì)量的單糖連接，并且與7位糖基相比，黃酮醇離子更容易失3位的取代基，可以推斷其糖基位置。

本實驗采用UPLC- LTQ Orbitrap MS技術(shù)得到沙棘葉中化學(xué)成分，初步推斷出沙棘葉中的26種化學(xué)成分，為沙棘葉中化學(xué)成分的定性分析及其質(zhì)量控制提供了一種高效、快速的分析方法，對今后進一步闡明沙棘葉藥效物質(zhì)基礎(chǔ)以及進一步的資源開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)支持。