白蘿卜提取物對大鼠術(shù)后早期炎性腸梗阻血清炎癥因子及胃腸動力的影響

肖志強　鐘衛(wèi)權(quán)　劉其龍

[摘要]目的 觀察白蘿卜提取物對術(shù)后早期炎性腸梗阻大鼠血清炎癥因子及胃腸動力的影響。方法 選取24只成年SD大鼠按照隨機數(shù)字表法分為三組，每組各8只，采用腸管表面擦拭法建立術(shù)后早期炎性腸梗阻模型。生理鹽水組（NS組）、白蘿卜提取物組（Rex組）及莫沙必利組（Mos組）分別予以生理鹽水、白蘿卜提取物及莫沙必利灌胃1 ml/100 g一周，每天2次。采用ELISA方法檢測血清超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-8（IL-8）和腫瘤壞死因子（TNF-α）含量，并觀察小腸推進情況。結(jié)果 Rex組的hs-CRP、IL-6、IL-8、TNF-α表達水平顯著低于NS組和Mos組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Rex組的回腸黏膜損傷評分顯著低于NS組和Mos組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Rex組大鼠的24 h小腸推進比明顯高于NS組和Mos組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 白蘿卜提取物可以降低炎性腸梗阻大鼠的血清炎癥因子水平，促進小腸蠕動增加，為治療術(shù)后腸梗阻提供新的理論基礎(chǔ)。

[關(guān)鍵詞]術(shù)后早期炎性腸梗阻；炎癥因子；胃腸動力；白蘿卜提取物

[中圖分類號] R282.71 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）7（b）-0004-04

[Abstract] Objective To investigate the effects of Raphanussativus extract on serum inflammatory factor and gastrointestinal motility in rats with early postoperative inflammatory small bowel obstruction （EPISBO）. Methods Twenty-four adult SD rats were randomly divided into three groups according to random number list method， with eight rats in each group. The EPISBO models were generated by wiping the wall of rat′s small intestine and subsequently were given gastriclavage （twice/day） with saline group （NS group）， Raphanussativus extract group （Rex group） and moxabili group （Mos group） 1 ml/100 g for one week. The serum high sensitivity C-reactive protein （hs-CRP）， interleukin-6 （IL-6）， interleukin-8 （IL-8） and tumor necrosis factor （TNF-α） were measured by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）， and gastrointestinal motility was studyed. Results The expressions of hs-CRP， IL-6， IL-8， TNF-α in Rex group were significantly lower than that in NS group and Mos group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The lleal mucosal injury score in Rex group was significantly lower than that in NS group and Mos group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The 24 h small intestinal transit ratio in Rex group was significantly higher than that in NS group and Mos group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion Rex can reduce serum inflammatory factor level and promote small bowel peristalsis in rats with inflammatory intestinal obstruction.

[Key words] Early postoperative inflammatory small bowel obstruction； Serum inflammatory factor； Gastroin-testinal motility； Raphanussativus extract

術(shù)后早期炎性腸梗阻（early postoperative inflammatory small bowel obstruction，EPISBO）指發(fā)生在腹部手術(shù)后早期（通常為術(shù)后1～2周內(nèi)），由于腹部手術(shù)創(chuàng)傷或腹腔炎癥等原因?qū)е履c壁水腫和滲出形成的一種機械性與動力性同時存在的粘連性腸梗阻，其造成梗阻的原因主要來自腸管本身，即腸壁充血水腫造成的管壁增厚及腸腔狹窄，同時合并腸蠕動障礙[1]。

白蘿卜味辛、甘，性涼，在功效上具有消積熱、化痰熱、下氣、寬中、解毒的作用，可用于食積脹滿、呃噎反胃等癥。白蘿卜提取物（Raphanussativus extract，Rex）可促進大鼠十二指腸、空、回腸動力，而以回腸收縮最明顯，并存在劑量-效應(yīng)關(guān)系，也可明顯加快鼠小腸炭餐通過時間[2]。實驗表明[3-5]，Rex能夠使大鼠胃電的振幅增高，胃及十二指腸電活動的慢波頻率和振幅明顯增加，血漿胃動素水平明顯升高，能夠使大鼠胃排空加快，促進小腸消化間期移行性復(fù)合運動。Rex對梗阻病變引起的動力障礙小腸有促進其蠕動的作用，顯著提高了腸平滑肌收縮的頻率和強度，使整體腸運動活力得到提高，腸道平滑肌收縮波形也規(guī)則穩(wěn)定，腸道蠕動功能得到良好改善，并且也能減輕腸道損傷程度?；谏鲜隼碚摚狙芯客ㄟ^建立大鼠EPISBO模型，給予Rex灌胃治療后，檢測大鼠血液中炎性因子血清超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-8（IL-8）和腫瘤壞死因子（TNF-α）含量的變化，測量小腸中阿拉伯膠活性炭粉混合物的推進距離，為治療EPISBO提供新的理論基礎(chǔ)，也為臨床非手術(shù)治療EPISBO提供新的思路，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1材料

清潔級成年雌性SD大鼠，體重220～320 g，共24只，由中山大學(xué)實驗動物中心提供，許可證號：SYXK（粵）2007-0081。hs-CRP、IL-6、IL-8和TNF-α的ELISA試劑盒由上海茁彩生物科技有限公司，批號分別為201601、201604、201511、201607。使用儀器包括：RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；Modulyo D-230型冷凍干燥機（Thermo Electron Corporation）；Bio Mate-3S分光光度計（Thermo Fisher Scientific）；680酶標儀（BIO-RAD，USA）。

1.2方法

1.2.1 Rex制備 采用衛(wèi)青蘿卜（Raphanus root）榨汁后，將殘渣轉(zhuǎn)至容器中，加入適量蒸餾水，密閉，常溫下靜置3 d，傾取上層清液，壓榨藥汁，并與之前收集的濾液混合，靜置24 h過濾，取濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，40～45℃旋轉(zhuǎn)蒸干，得稠膏，將稠膏置冷凍干燥機中凍干，得綠色藥粉，即Rex，稱取質(zhì)量，計算提取率。提取率=制得提取物質(zhì)量（g）/原料質(zhì)量（g）×100%。將制備得到的提取物外用錫紙包裝密封，避光于-4℃冰箱保存。

1.2.2動物分組及建模 SD大鼠，每籠2只，實驗前3天購入，使其適應(yīng)實驗室環(huán)境，給予標準飼料飼養(yǎng)，實驗前12 h開始禁食。手術(shù)均在清潔級的環(huán)境中進行，所有的手術(shù)操作均由同一組人員完成。參考文獻步驟[6]，以0.3%戊巴比妥鈉溶液1 ml/100 g體重腹腔注射進行麻醉。大鼠腹部脫毛、消毒后，取腹部正中切口長3 cm，進腹后以紗塊由近端向遠端輕輕擦拭全部小腸，共5次，并暴露于空氣中30 min后逐層縫合關(guān)腹。手術(shù)后24 h之內(nèi)，大鼠可自由飲水，但分次逐步恢復(fù)進食。

1.2.3動物模型治療 造模成功后，使用隨機數(shù)字表將動物分為3組，每組各8只。分別予以生理鹽水（NS）、Rex及莫沙必利（Mos）灌胃（1 ml/100 g）1周，每天2次，灌胃后可自由飲水。

1.2.4標本處理 實驗前后對各組大鼠尾靜脈取血，離心，將血清置于-80℃冰箱中保存。造模后7 d，以0.3%戊巴比妥鈉溶液1 ml/100 g體重腹腔注射進行麻醉，取回盲部上方4 cm處小腸1 cm行組織學(xué)檢查。

1.2.5大鼠小腸推進比的測定 根據(jù)活性炭染色長度計算小腸推進比。各組動物最后一次灌胃后30 min灌入0.4 ml的2%活性炭，24 h后脫頸處死大鼠，開腹取出全部小腸，量取幽門括約肌至色素最前端及至盲腸的距離，以二者之比為小腸推進比。

1.2.6 HE染色 將小腸組織固定于10%中性甲醛，石蠟包埋、切片，HE染色，于光鏡下觀察。由兩位病理醫(yī)生盲法進行。組織學(xué)評分采用Chiu腸黏膜損傷評分標準[7]。

1.2.7炎癥因子濃度測定 采用ELISA試劑盒測定hs-CRP、IL-6、IL-8和TNF-α的濃度，步驟嚴格按照說明書進行。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，多組建比較采用單因素方差分析，進一步組間兩兩比較采用LSD法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1大鼠一般情況及組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)

所有動物實驗前正常。造模期間，大鼠多數(shù)反應(yīng)遲緩，食量減少，排便少，少部分一般情況差，活動減少，精神萎靡。實驗結(jié)束時，打開腹腔，見大鼠腸管水腫明顯，出現(xiàn)粘連，顏色蒼白，腸管內(nèi)積氣積液，腸管管徑變小。經(jīng)Rex治療，動物飲食、精神狀態(tài)較好，梗阻情況及粘連較輕。

2.2各組大鼠血清hs-CRP、IL-6、IL-8和TNF-α表達水平的比較

Rex組大鼠的血清hs-CRP、IL-6、IL-8和TNF-α表達水平均顯著低于NS組和Mos組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.3腸組織HE染色

2.3.1各組大鼠腸黏膜損傷鏡下評分的比較 Rex組的回腸黏膜損傷評分為（2.26±0.54）分，顯著低于NS組的（3.40±0.57）分和Mos組的（2.97±0.65）分，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.3.2組織病理改變情況 HE染色結(jié)果提示，REX組大鼠的回腸組織間質(zhì)輕微水腫，絨毛界限輕微模糊，NS組、Mos組大鼠的回腸黏膜上皮細胞腫脹，界限不清，偶有壞死、脫落，黏膜下層、肌層及漿膜層明顯瘀血，毛細血管明顯擴張，并有大量炎癥細胞浸潤（圖1）。

2.4各組大鼠24 h小腸推進比的比較

Rex組大鼠的24 h小腸推進比為（69.13±8.37）%，明顯高于NS組的（55.24±7.88）%和Mos組的（66.50±6.21）%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

3討論

白蘿卜作為食源性植物，有很好的理氣、順氣作用，傳統(tǒng)中醫(yī)認為，白蘿卜味辛、甘，性涼，在功效上具有消積熱、化痰熱、下氣、寬中、解毒的作用，可用于食積脹滿、呃噎反胃等癥。Jung等[2]研究發(fā)現(xiàn)，Rex可促進大鼠十二指腸、空、回腸動力，而以回腸收縮最明顯，并存在劑量-效應(yīng)關(guān)系，也可明顯加快鼠小腸炭餐通過時間。實驗表明[3-5]，Rex能夠使大鼠胃電的振幅增高，胃及十二指腸電活動的慢波頻率和振幅明顯增加，血漿胃動素水平明顯升高，能夠使大鼠胃排空加快，促進小腸消化間期移行性復(fù)合運動，但其作用機制尚不清楚。

術(shù)后早期炎性腸梗阻指發(fā)生在腹部手術(shù)后早期，由于腹部手術(shù)創(chuàng)傷或腹腔炎癥等原因?qū)е履c壁水腫和滲出形成的一種機械性與動力性同時存在的粘連性腸梗阻[1]。炎性腸梗阻在腸管粘連的同時，還合并有腸壁炎癥、水腫和滲出及其造成的腸腔狹窄、閉塞和腸麻痹。EPISBO治療方法主要是腸外營養(yǎng)，同時輔助生長抑素，必要時加用糖皮質(zhì)激素，在腸蠕動恢復(fù)階段還可應(yīng)用腸動力藥以促進梗阻腸道運動功能的恢復(fù)[7-14]。EPISBO的發(fā)病機制迄今尚不完全明確，但近年來研究已證實，EPISBO患者由于手術(shù)損傷或術(shù)中腸管暴露時間過長引起腹腔內(nèi)無菌性炎性反應(yīng)性吸收，手術(shù)操作激活了肥大細胞并釋放出大量炎性介質(zhì)，導(dǎo)致腸壁通透性增加及細菌易位，并引起級聯(lián)反應(yīng)繼續(xù)巨噬細胞，巨噬細胞再誘導(dǎo)釋放大量炎癥因子和趨化因子，導(dǎo)致組織器官的損傷并影響胃腸道的收縮及傳導(dǎo)功能，其中IL-6、IL-8、TNF-α發(fā)揮重要作用[15-16]，引起腸壁黏膜局部炎癥反應(yīng)，腸黏膜的通透性明顯增加，發(fā)生炎癥滲出及水腫。腸壁水腫進一步導(dǎo)致hs-CRP、IL-6、IL-8和TNF-α等炎性因子大量分泌與釋放，從而進一步導(dǎo)致腸道黏膜細胞膜通透性上升，加劇腸腔內(nèi)液體的積聚，加重患者的病情，形成惡性循環(huán)，且其病情的嚴重程度與hs-CRP和TNF-α等炎癥因子水平異常密切相關(guān)[17-20]。

本探究結(jié)果提示，大鼠EPISBO后，腸黏膜細胞完整性受損，且發(fā)生了明顯的炎癥反應(yīng)，血清中hs-CRP、IL-6、IL-8和TNF-α等炎性因子升高，通過Rex治療后，Rex組的hs-CRP、IL-6、IL-8、TNF-α表達水平顯著低于NS組和Mos組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），可見血清中炎性因子下降，Rex組的回腸黏膜損傷評分顯著低于NS組和Mos組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），Rex組大鼠的24 h小腸推進比明顯高于NS組和Mos組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明Rex可以通過抑制腸梗阻后的炎癥反應(yīng)，保護小腸黏膜與結(jié)果的完整性，從而促進腸道運動功能的恢復(fù)。Gilani等[21]的研究結(jié)果提示，Rex的不良反應(yīng)輕微，用藥安全可靠，但是EPISBO病理生理變化復(fù)雜，Rex成分多樣且可能還有其他的生物學(xué)作用，如對胃腸激素，氧化應(yīng)激的影響等，不能在本實驗中得到驗證，有待今后更加深入的研究來進一步闡明，以明確Rex所含的組分、各組分的藥理作用及其用于治療EPISBO的作用機制。因此，相信隨著對Rex研究的不斷深入，有可能為術(shù)后炎性腸梗阻的治療提供新的理論基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2018-03-13 本文編輯：孟慶卿）