乳腺癌粗針穿刺與術(shù)后活檢標(biāo)本病理分級(jí)及免疫組化比較

魏穎

醫(yī)學(xué)中所指的惡性腫瘤常被人們稱之為癌癥，臨床實(shí)踐中，乳腺癌的發(fā)病率和致死率較高，是最為常見(jiàn)的也是對(duì)女性健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一[1]。最近幾年，我國(guó)女性乳腺癌患者數(shù)量極速增加，據(jù)權(quán)威機(jī)構(gòu)統(tǒng)計(jì)，年平均增長(zhǎng)速度高達(dá)27.6%[2]。乳腺癌有著比較明顯的特點(diǎn)，如病患人群一般在42周歲以上；發(fā)病初期癥狀不易被覺(jué)察，大部分病患被確診時(shí)已接近晚期；不宜采取外科手術(shù)方法治療，多采用介入手段，如放化療等[3]。臨床實(shí)踐中，化療方法能夠有效延緩病患生存時(shí)間，提升病患生存質(zhì)量，是比較有效的治療手段。但是，因化療使用細(xì)胞毒藥物，會(huì)給病患帶來(lái)嚴(yán)重的副作用和并發(fā)癥，面對(duì)副作用和并發(fā)癥帶來(lái)的巨大痛苦，相當(dāng)一部分病患不能堅(jiān)持進(jìn)行化療，延誤了治療時(shí)機(jī)[4]。這兩年隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)逐漸發(fā)展，一些疾病的治療技術(shù)不斷在更新，乳腺癌的治療手段也在發(fā)展，乳腺粗針穿刺活檢逐漸應(yīng)用于臨床乳腺癌的診斷，并且臨床數(shù)據(jù)顯示其診斷效果較好，在逐漸取代細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)，優(yōu)點(diǎn)比較明顯[5]。臨床上采取化療方法后雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）狀態(tài)有誤差不宜采取。針對(duì)這種問(wèn)題，本文選取2014年1月-2016年1月本院收治的未經(jīng)化療的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌根治術(shù)患者120例，探討乳腺癌粗針穿刺與術(shù)后活檢標(biāo)本病理分級(jí)及免疫組化的差異。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月-2016年1月本院收治的未經(jīng)化療的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌根治術(shù)患者120例，年齡29～73歲，平均（47.5±1.2）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)過(guò)西醫(yī)和傳統(tǒng)中醫(yī)診斷，并均已通過(guò)病理切片和影像檢查手段確診；年齡≥25歲；對(duì)本文治療無(wú)相關(guān)禁忌；卡氏功能狀態(tài)評(píng)分（KPS）＞70分；預(yù)計(jì)生存期＞3個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn)：心臟等臟器嚴(yán)重受損或者患有出血性相關(guān)病癥的患者；已經(jīng)采取過(guò)手術(shù)和放療手段治療過(guò)的乳腺癌患者；在本研究過(guò)程中出現(xiàn)感染，并且沒(méi)有得到控制的患者；藥物性過(guò)敏體質(zhì)的患者?；颊呔橥獗狙芯?，并經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 病理檢查和分級(jí)工作 （1）檢測(cè)方法：手術(shù)前對(duì)患者進(jìn)行粗針穿刺，獲得病灶組織，將獲得的組織放入甲醛溶液中，常規(guī)石蠟包埋，制備4 μm切片，對(duì)制備好的切片進(jìn)行HE染色。（2）分級(jí)：乳腺癌患者診斷分級(jí)采取WH02012乳腺癌分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)進(jìn)行，分級(jí)主要從以下三方面進(jìn)行評(píng)估：腺管形成的程度、細(xì)胞核的多形性、核分裂計(jì)數(shù)[6]。

1.2.2 免疫組織化學(xué) （1）檢測(cè)方法：采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定ER、PR、HER2、Ki67表達(dá)水平。取手術(shù)過(guò)程中的病灶組織，向不同組織中加入蒸餾水與濃度為30.0%的H2O2，常溫下加入內(nèi)源性酶并進(jìn)行10 min滅活，PBS連續(xù)進(jìn)行3次洗滌。將最終獲得的切片放置在0.01 M枸櫞酸鹽緩沖液中，加入生理鹽水控制溶液pH最終為6。電爐加熱直到煮沸，間隔5 min后再次進(jìn)行煮沸，常溫下冷卻，采用PBS完成2次洗滌，洗滌5 min/次，最后加入5%BSA封閉液并加入ER、PR、HER2、Ki67蛋白（稀釋濃度為1∶100）一抗一滴。滴加完畢后進(jìn)行3次PBS洗滌；在1 mL底物中加入ER、PR、HER2、Ki67蛋白二抗一滴，充分混合后常溫下顯色，蘇木素復(fù)染后封片，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞數(shù)量，每份標(biāo)本測(cè)定三次，取平均值。（2）判斷方法。參考奧爾雷德評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分別從細(xì)胞的陽(yáng)性數(shù)量（1～4分）、染色強(qiáng)度（0～12分）完成免疫組化染色評(píng)分，總分16分，總分越高陽(yáng)性率越高。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) （1）粗針穿刺標(biāo)本與手術(shù)切除標(biāo)本病理分級(jí)。記錄粗針穿刺標(biāo)本與手術(shù)切除標(biāo)本病理分級(jí)情況，分級(jí)標(biāo)本參考WH02012乳腺癌分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行[6]。（2）ER、PR、HER2、Ki67陽(yáng)性率表達(dá)。記錄粗針穿刺標(biāo)本與手術(shù)切除標(biāo)本ER、PR及HER2的陽(yáng)性表達(dá)率。（3）Ki67蛋白表達(dá)。記錄并統(tǒng)計(jì)粗針穿刺標(biāo)本與手術(shù)切除標(biāo)本Ki67表達(dá)情況，由于Ki67在乳腺癌組織中表達(dá)水平較低，研究中以20.0%為限進(jìn)行分析，對(duì)于陽(yáng)性率＞20.0%者視為異常。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 18.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；一致性采用Kappa檢驗(yàn)，0～0.20極低的一致性、0.21～0.40一般的一致性、0.41～0.60中等的一致性、0.61～0.80高度的一致性和0.81～1.00幾乎完全一致。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 粗針穿刺標(biāo)本與手術(shù)切除標(biāo)本病理分級(jí)比較 粗針穿刺標(biāo)本檢測(cè)病理分級(jí)與手術(shù)切除標(biāo)本比較，一致性一般，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Kappa=0.38，P=0.04）。見(jiàn)表 1。

表1 粗針穿刺與手術(shù)切除標(biāo)本病理分級(jí)的一致性分析 例

2.2 粗針穿刺與手術(shù)切除標(biāo)本ER、PR及HER2的陽(yáng)性表達(dá)率比較 粗針穿刺標(biāo)本ER、PR及HER2蛋白陽(yáng)性率與手術(shù)切除標(biāo)本比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），一致性均較高（Kappa=0.89、0.70、0.69，P=0.00、0.01、0.01）。見(jiàn)表 2。

表2 粗針穿刺與手術(shù)切除標(biāo)本ER、PR及HER2的陽(yáng)性表達(dá)情況比較 例（%）

2.3 粗針穿刺標(biāo)本與手術(shù)切除標(biāo)本Ki67表達(dá)分析比較 120例乳腺癌患者中88例免疫組化檢測(cè)呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率為73.33%；兩種檢測(cè)方法的Ki67表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，一致性中等（Kappa=0.49，P=0.03）。見(jiàn)表 3。

表3 粗針穿刺標(biāo)本與手術(shù)切除標(biāo)本Ki67表達(dá)分析比較 例

3 討論

隨著醫(yī)療技術(shù)的逐漸發(fā)展，臨床上對(duì)于癌癥的治療方法不斷在更新，傳統(tǒng)治療癌癥方法為化療加放療或者采用手術(shù)治療方法，但這些治療手段副作用大且治療效果并不理想[8]。近幾年，輔助性全身療法逐漸應(yīng)用于臨床治療癌癥。特別對(duì)于乳腺癌患者，這種方法可以大大降低乳腺癌的復(fù)發(fā)率與死亡率，臨床效果較好。一般乳腺癌患者為ER、PR均陽(yáng)性患者，最佳治療方法是調(diào)節(jié)內(nèi)分泌，選擇內(nèi)分泌療法[9]。但是對(duì)于HER2陽(yáng)性患者，內(nèi)分泌療法并不適合，最佳治療方法為曲妥單抗。還有一些ER陰性及HER2陽(yáng)性患者，最好是采用傳統(tǒng)治療方法[10]。粗針穿刺活檢臨床診斷時(shí)精度相對(duì)較高，但是該診斷方法所需時(shí)間較長(zhǎng)、可重復(fù)性較差，并且檢查具有較高的風(fēng)險(xiǎn)性、創(chuàng)傷性，導(dǎo)致臨床診斷依從性較差[11]。

對(duì)于惡性腫瘤的治療一般是通過(guò)以下幾個(gè)方面，一是能夠有效控制腫瘤的產(chǎn)生和增長(zhǎng)，進(jìn)而致使癌細(xì)胞死亡[12]；二是能夠有效控制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，遲滯腫瘤生成，以此實(shí)現(xiàn)阻礙腫瘤生成和擴(kuò)散的目的；三是提高人體免疫功能，全面提升病患免疫能力；四是減輕化療副作用，特別對(duì)人體造成的骨髓抑制作用，增強(qiáng)細(xì)胞功能，提升病患白細(xì)胞數(shù)量[13]；五是明顯改善病患消化道功能，增強(qiáng)胃壁厚度，以此降低病患等不良反應(yīng)[14-15]。

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，目前對(duì)于癌癥的治療已經(jīng)從原來(lái)的細(xì)胞水平逐漸發(fā)展到分子水平[16]。所以對(duì)乳腺癌患者的腫瘤進(jìn)行分子水平分析是非常必要的，研究患者腫瘤的生物學(xué)特性可以作為臨床指標(biāo)進(jìn)行檢驗(yàn)。因?yàn)榇轴槾┐袒顧z越來(lái)越流行成為乳腺癌的首選診斷方法，進(jìn)而其準(zhǔn)確性逐漸在臨床上倍加重視。從理論上說(shuō)，粗針穿刺活檢標(biāo)本和手術(shù)標(biāo)本腫瘤指標(biāo)的不一致率應(yīng)該較低。乳腺癌有明顯的病理現(xiàn)象，例如泥沙樣鈣化，這種比例現(xiàn)象一般在X線下即可觀察到，但是泥沙樣鈣化也存在良性腫瘤中[17]。一般情況下，泥沙樣鈣化具有一定特殊的形態(tài)，并且可以應(yīng)用于診斷。一般的形態(tài)有圓圈狀、原點(diǎn)狀、條狀以及片狀，這樣的形態(tài)清晰，一般都是良性腫瘤。而形態(tài)不清晰的混合性的腫瘤，就像出現(xiàn)條狀、叉狀同時(shí)具備的患者，幾乎可以確診為惡性腫瘤即乳腺癌[18]。

本文進(jìn)行粗針穿刺標(biāo)本與手術(shù)病理標(biāo)本的病理分級(jí)及免疫組化分析，結(jié)果顯示，粗針穿刺標(biāo)本檢測(cè)病理分級(jí)與手術(shù)切除標(biāo)本比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Kappa=0.38，P=0.04）；粗針穿刺標(biāo)本ER、PR及HER2蛋白陽(yáng)性率與手術(shù)切除標(biāo)本比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，一致性均較高（Kappa=0.89、0.70、0.69，P=0.00、0.01、0.01）；120例乳腺癌患者中88例免疫組化檢測(cè)呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率為73.33%；兩種檢測(cè)方法的Ki67表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，一致性中等（Kappa=0.49，P=0.03）。該結(jié)果與文獻(xiàn)[19]相符，而且醫(yī)學(xué)研究顯示，腫瘤特別是惡性腫瘤的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)移和人體免疫功能特別是細(xì)胞的免疫功能聯(lián)系密切，在人體的諸多細(xì)胞中，淋巴系統(tǒng)細(xì)胞有著十分重要的作用[20]，是人體的效應(yīng)細(xì)胞和免疫監(jiān)控的重要參與者。

綜上所述，乳腺癌粗針穿刺與術(shù)后活檢標(biāo)本ER、PR、HER2檢測(cè)的一致性均較高，但是乳腺癌粗針穿刺與術(shù)后活檢標(biāo)本病理分級(jí)和Ki67表達(dá)一致性相對(duì)較差，均需要進(jìn)一步研究與探討，臨床應(yīng)結(jié)合實(shí)際選擇合適的方法。